实验三琼脂糖凝胶电泳分离血清脂蛋白
实验三 琼脂糖凝胶电泳分离血清脂蛋白
VLDLLDLHDL离心法CMβ-lpα-lp电泳法前β-lp<0.95密度0.95-1.0061.006 -1.0631.063 - 1.210原点电泳位置α 2 -球蛋白β-球蛋白α1一球蛋白80- 50025-8020-257.5 -10颗粒直径(nm)505-10蛋白质 (%)0.5-220-255098-9990-9575-80脂类（(%)血浆合成部位肝细胞肝、肠、血浆小肠粘膜细胞转运外源甘油转运内源甘油功能转运内源性固醇逆向转运胆固醇三脂及胆固醇三脂及胆固醇
离心法 CM VLDL LDL HDL 电泳法 前β-lp β-lp α-lp 密度 ＜0.95 0.95－1.006 1.006－1.063 1.063－1.210 电泳位置 原点 α2－球蛋白 β-球蛋白 α1－球蛋白 颗粒直径(nm) 80－500 25－80 20－25 7.5－10 蛋白质（%） 0.5－2 5－10 20－25 50 脂类（%） 98－99 90－95 75－80 50 合成部位 小肠粘膜细胞 肝细胞 血浆 肝、肠、血浆 功能 转运外源甘油 三脂及胆固醇 转运内源甘油 三脂及胆固醇 转运内源性固醇 逆向转运胆固醇
目的要求！1.了解正常人血清脂蛋白的类型。2.学习血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳的原理和方法
一、目的要求： 1.了解正常人血清脂蛋白的类型。 2.学习血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳的原理 和方法
二、基本原理不同的血清脂蛋白不仅分子大小及在脂类的组成和含量上不同，而且其载脂蛋白的种类与数量也不同，因此在电场中的电泳速度也不相同。将血清脂蛋白用脂类染料（如苏丹黑B)进行预染，在本实验条件下，血清脂蛋白均带负电荷，利用琼脂糖凝胶作支持介质进行电泳可将血清脂蛋白分为四个组分。从负极到正极依次是乳糜微粒、β-脂蛋白、前 β-脂蛋白和α -脂蛋白
二、基本原理 不同的血清脂蛋白不仅分子大小及在脂类 的组成和含量上不同，而且其载脂蛋白的种类 与数量也不同，因此在电场中的电泳速度也不 相同。将血清脂蛋白用脂类染料（如苏丹黑B） 进行预染，在本实验条件下，血清脂蛋白均带 负电荷，利用琼脂糖凝胶作支持介质进行电泳 可将血清脂蛋白分为四个组分。从负极到正极 依次是乳糜微粒、β-脂蛋白、前β-脂蛋白和 α-脂蛋白
结构特征LDLCMVLDLHDL(前β)(β)(α)多多少少少甘油三脂少多多胆固醇蛋白质带电量（Q）pH8.6为例颗粒大小（mm）大低慢小高快密度电泳速度形态规则不规则
pH 8.6>pI，各种脂蛋白均带负电，电泳时由负极到正极；VLDL为圆形，受阻力小，LDL形态不规则，受阻力大，所以VLDL跑在前。CMLDLHDLVLDL+β前β加样槽a
琼脂糖凝胶电泳的原理：琼脂糖凝胶是由D-半乳糖和3.6脱水L-半乳糖的残基通过氢键交替排列组成的直链多糖。电泳时，因凝胶中含水量大，固体支持物的影响较少，故电泳速度快，区带整齐。而且由于琼脂糖不含带电荷的基团，电渗影响很小，是一种很好的电泳材料，分离效果较好
琼脂糖凝胶电泳的原理：琼脂糖凝胶是由 D-半乳糖和3,6脱水L-半乳糖的残基通过氢键 交替排列组成的直链多糖。电泳时，因凝胶中 含水量大，固体支持物的影响较少，故电泳速 度快，区带整齐。而且由于琼脂糖不含带电荷 的基团，电渗影响很小，是一种很好的电泳材 料，分离效果较好
三、器材与试剂1、器材：电泳仪与电泳槽、玻璃板（10cmX10cm）电炉：滤纸：三角烧瓶；微量加样器2. 试剂:(1） 血清（2）苏丹黑B染色液(3)pH8.6巴比妥缓冲液（离子强度0.05mo1/L）（4）琼脂糖
三、器材与试剂 1、器材：电泳仪与电泳槽、玻璃板（10cm×10cm）； 电炉；滤纸；三角烧瓶；微量加样器 2. 试剂： （1）血清 （2）苏丹黑B染色液 （3） pH8.6巴比妥缓冲液（离子强度0.05mol/L） （4）琼脂糖
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四、操作1.预染血清2.制板：凝胶厚度约2～2.5mm、距板一端约2.0cm处挖槽3.加样4．电泳：纱布作盐桥、调节电压为4mA/cm、电泳时间为45min
四、操作 1. 预染血清 2. 制板：凝胶厚度约2～2.5mm、距板一端约 2.0cm处挖槽 3. 加样 4．电泳：纱布作盐桥、调节电压为4mA/cm、电 泳时间为45min