欢迎同学们到生物化学实验室来！对于大多数学生来说，这不是第一次做化学实验， 但是我们相信，生物化学实验一定是大家最感兴趣、最激动人心的实验，当然也是花费 最大、最辛苦的实验。同学们在过去几年中所学到的各种实验技术和操作技能，在这些 实验中将会经常用到，当然更重要的是要学会一些新的、在生物化学的科学研究中最常 用的实验方法。同学们在生物化学实验方面要取得好成绩，在很大程度上，取决于你们 对这些专门化实验技术的熟练掌握和对生物化学原理的深入了解

离心技术在生物科学，特别是在生物化学和分子生物学研究领域，已得到十分广 泛的应用，每个生物化学和分子生物学实验室都要装备多种型式的离心机。离心技术 主要用于各种生物样品的分离和制备，生物样品悬浮液在高速旋转下，由于巨大的离 心力作用，使悬浮的微小颗粒（细胞器、生物大分子的沉淀等）以一定的速度沉降， 从而与溶液得以分离，而沉降速度取决于颗粒的质量、大小和密度

离心技术在生物科学，特别是在生物化学和分子生物学研究领域，已得到十分广 泛的应用，每个生物化学和分子生物学实验室都要装备多种型式的离心机。离心技术 主要用于各种生物样品的分离和制备，生物样品悬浮液在高速旋转下，由于巨大的离 心力作用，使悬浮的微小颗粒（细胞器、生物大分子的沉淀等）以一定的速度沉降， 从而与溶液得以分离，而沉降速度取决于颗粒的质量、大小和密度

1.绪论 1 1.1 生物化学实验技术发展简史 1 1.2 实验室规则 5 1.3 实验室安全及防护知识 6 1.4 实验记录与实验报告 9

信阳职业技术学院：《微生物学检验》课程教学课件（PPT讲稿）细菌的生物化学实验

第一章 生物化学部分.1 实验一、双缩脲法测定血清蛋白质含量. 1 实验二、纸层析法观察转氨基作用. 2 实验三、血清醋酸纤维薄膜电泳. 4 实验四、血清丙氨酸氨基转移酶活性测定. 7 实验五、胰酶对蛋白质的消化和影响酶作用的因素. 10 实验六、酶的竞争性抑制作用. 13 实验七、血糖浓度的测定. 16 实验八、血清γ球蛋白的分离纯化与鉴定. 18 第二章 分子生物学部分.25 实验一、质粒 DNA 的提取制备与检测. 25 实验二、PCR 技术. 28 实验三、DNA 的限制性酶切与电泳. 31 实验四、DNA 连接实验. 38 实验五、重组 DNA 转化与篮白斑筛选. 41 实验六、SDS-PAGE 测定蛋白质的相对分子量. 44

第一章生物化学实验基本知识与操作 第一节生物化学实验基本知识 第二节 第二章分光光度技术 实验一双缩脲法测定蛋白质浓度 实验二 Folin-酚试剂法(Lowry 法)测定蛋白质浓度 实验三紫外分光光度法测定蛋白质浓度 实验四考马斯(Comessie)亮兰结合法测定蛋白质浓度 实验五BCA 法测定蛋白质浓度 实验六激素对血糖浓度的影响及血糖的测定 第三章生物大分子的提取、沉淀和离心分离技术 第一节生物材料的选取与预处理 第二节生物大分子的沉淀分离技术 第三节生物大分子离心分离技术 实验七鸡血SOD的提取、分离及活力测定 实验八碱性磷酸酶的制备及活力测定 实验九酪蛋白的制备 实验十动物肝脏中提取DNA 实验十一猪心肌细胞线粒体可溶性ATP合酶的提 第四章电泳技术 实验十二DNA 琼脂糖凝胶电泳 实验十三血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 实验十四聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶 实验十五蛋白质分子量的测定——SDS-聚丙烯凝胶电泳 实验十六聚丙烯酰胺等电聚焦电泳 第五章层析技术 第一节 层析技术概述 吸附层析 第三节 分配层析 第四节 离子交换层析 第五节 凝胶层析 第六节亲和层析 第七节 高效液相层析 实验十七氨基酸的纸上层析与氨基酸的转氨基作用 实验十八血清-球蛋白的分离纯化与鉴定 实验十九 亲和层析纯化胰蛋白酶 实验十二离子交换层析分离氨基酸 实验二十一蛋白质分子量测定——凝胶过滤层析法 第六章 分子生物学基本技术 核酸分子杂交 聚合酶链反应 第三节分子克隆 实验二十二Southern杂交分析 实验二十三 Northern 杂交分析 实验二十四 PCR 基因扩增 验二十五质粒DNA的提取及酶切 实验二十六 DNA重组实验 实验二十七大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 附录一常用缓冲液的配制方法 附录二易变质及需要特殊方法保存的试剂 附录三一般化学试剂的分级 附录四 English words in the lab

1.1 生物化学实验技术发展简史 1.2 实验室规则 1.3 实验室安全及防护知识 1.4 实验记录与实验报告 1.5 实验室基本操作 1.6 缓冲溶液与 pH 测定 1.7 生化实验室的基本设施与装备

第一章 综合性实验 第一节 病原生物的分布与检查 第二节 呼吸道感染标本的病原生物检查 第三节 消化道感染标本的病原生物检查 第四节 泌尿生殖道感染标本的病原生物检查 第五节 血液或骨髓标本的病原生物检查 第六节 皮肤感染标本的病原生物检查 第七节 免疫分子功能的检测 第八节 免疫细胞功能的检测 第九节 抗体的制备 第二章 病原生物感染及免疫相关的动物模型制备 第一节 艰难梭菌性肠炎模型 第二节 结核杆菌感染动物模型 第三节 豚鼠过敏性休克模型 第四节 类风湿关节炎大鼠模型 第五节 疟原虫感染动物模型 第六节 日本血吸虫感染动物模型 第七节 华支睾吸虫感染动物模型 第八节 旋毛虫感染模型 第三章 创新性实验 第四章 实验室生物安全与新的实验技术进展 第一节 实验室生物安全（laboratory biosafety） 第二节 新的实验技术进展

性质与任务 生物化学实验是生物化学教学的重要组成部分,它和生物化学理论教学都具有同等重 要的地位。生化实验技术广泛用于生命科学许多领域的研究。 1.通过实验课的教学,使学生掌握比色、层析、电泳、离心等生物化学基本实验方 法的原理和操作技能,学会选择正确的方法进行生物材料中多种物质的分离,提纯及鉴定。 2.培养学生严谨的科学态度及分析、解决问题的能力。同时通过实验加深学生对生 物化学基本理论的理解