锦州医科大学：《分子医学实验技术》课程教学课件（讲稿）聚合酶链式反应 Polymerase Chain Reaction，PCR

实验一 质粒的制备 实验二 DNA 的琼脂糖凝胶电泳 实验三 外源 DNA 片段在质粒载体中的克隆 实验四 感受态细胞的制备 实验五 质粒的转化及转化子的鉴定 实验六 PCR 技术 实验七 植物总 DNA 的快速少量抽提（ CTAB 法） 实验八 总 DNA 质量检测及酶切 实验九 电泳、转膜 实验十 RNA Extraction (mini prep) 实验十一 RT-PCR 实验 附录 试剂配方 一 细菌培养试剂 二 质粒抽提试剂 三 DNA 操作试剂 四 RNA 操作试剂

核酸的基本操作技术： 1）核酸的简介 2）基因组DNA提取 3）质粒DNA提取 4）真核细胞总RNA提取 5）琼脂糖凝胶电泳 6）核酸分子杂交 7）聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR) 8） RT-PCR

第一节 分子杂交与印迹技术 Molecular Hybridization and Blotting Technique 第二节 PCR技术的原理与应用 The Principle and Application of PCR Technology 第三节 基因文库 Gene Library 第四节 生物芯片技术 Biological Chip Technique

1.了解某一特定组织或细胞某一特定mRNA转录量的变化,如 RT-PCR、 Northernblot等 2.了解某一特定组织或细胞全部mRNA转录量的变化,如 DD-PCR、基因芯片等。 3.获得某一特定组织或细胞全部mRNA,以便建立cDNA库等

DNA的三级结构 核酸的分离纯化及测定 DNA一级结构的分析 -测序（Sequencing） 分子杂交、PCR等技术简介 重组DNA技术的基础 Basis of Recombinant DNA Technology

第一节、实验室规则及安全防护 一、实验室规则 二、实验室安全防护 第二节、分子生物学常用研究技术 一、核酸分离纯化 二、聚合酶链反应技术 三、分子杂交技术 四、分子克隆技术 五、其它新技术 第三节、常用仪器使用 一、离心机 二、分光光度计 三、PCR 仪 第四节、如何撰写实验报告 第五节 核酸分离纯化技术 实验一、基因组 DNA 的提取制备与检测 实验二、总 RNA 的提取制备与检测 实验三、质粒 DNA 的提取制备与检测 第六节 PCR 技术 实验四、常规 PCR 技术 实验五、定量 PCR 技术 第七节 分子克隆技术 实验六、DNA 的限制性酶切与电泳 实验七、凝胶中 DNA 片断的纯化回收 实验八、DNA 连接实验 实验九、感受态细胞的制备 实验十、重组 DNA 转化与篮白斑筛选 第八节 分子杂交技术 实验十一、Southern 印迹杂交 实验十二、Northern 印迹杂交 实验十三、Western 印迹 实验十四、核酸原位杂交 第九节 综合性实验 实验十五、蛋白质双向电泳 实验十六、酵母双杂交实验 实验十七、RNA 干扰实验

第一章 生物化学部分.1 实验一、双缩脲法测定血清蛋白质含量. 1 实验二、纸层析法观察转氨基作用. 2 实验三、血清醋酸纤维薄膜电泳. 4 实验四、血清丙氨酸氨基转移酶活性测定. 7 实验五、胰酶对蛋白质的消化和影响酶作用的因素. 10 实验六、酶的竞争性抑制作用. 13 实验七、血糖浓度的测定. 16 实验八、血清γ球蛋白的分离纯化与鉴定. 18 第二章 分子生物学部分.25 实验一、质粒 DNA 的提取制备与检测. 25 实验二、PCR 技术. 28 实验三、DNA 的限制性酶切与电泳. 31 实验四、DNA 连接实验. 38 实验五、重组 DNA 转化与篮白斑筛选. 41 实验六、SDS-PAGE 测定蛋白质的相对分子量. 44

学习本门课程的总体要求 1.熟悉免疫组织化学和原位PCR的技术特点及其原理 2.掌握免疫组织化学染色的操作流程 3熟悉免疫化学反应相关术语及其所用免疫试剂的来源和质量控制 4.了解多克隆抗体制备程序与操作要求 5.了解单克隆抗体制备原理和步骤

1985年PE -cetusMullis-公司的人类遗传研究室等人发 明了具有划时代意义的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)。此技术能够特异地扩增任何所希望的目 的基因或DNA片段。在基础和临床医学、法医、考古等方 面有重要的应用价值,并对分子生物学技术的发展给予巨 大的推动