医学实验方法与技术 1950 医学今子生物学 常用实验技术 主讲：杨常 Email:lyang@uestc.edu.cn Tel:13208180309
医学分子生物学 常用实验技术 医学实验方法与技术 主讲：杨露 Email: lyang@uestc.edu.cn Tel: 13208180309
(一)分子生物学三个重要的发展所般 1、准备和酩酿阶般 20世纪40年代确定了遗传信息的携带者，即基因的分子载体是DNA而不是蛋白质， 解决了遣传的物质基础问题。 无寺的R型 S在悬浮瘦中 5标记完体置白 存活 o。有毒的S型 0g11 死 校射性周位素 对S型加热 标记的帽置体 在授摔器中授裤， 面心，检测暴浮酒 灭活 与相菌里合， 使国衡外的赠商 和沉波中的放射性 理莲体侵染细 体与细菌分离 同位素 增黄体侵染细置时， 仅N从进入细薰馆施 周蛋白外光没有进入 P标记0N 加入活的R型图 0 对S型加热 灭活 AEii 要期 起德害内行的 柳在沉淀中 bbioo.com Griffith的肺炎脱球黄的转化实验 噬黄体实脸
（一）分子生物学三个重要的发展阶段 1、准备和酝酿阶段 20世纪40年代确定了遗传信息的携带者，即基因的分子载体是DNA而不是蛋白质， 解决了遗传的物质基础问题。 Griffith的肺炎双球菌的转化实验 噬菌体实验
2.规代分子生物学的建立和发展阶般 (1)50年代褐示宁DNA分子的飘螺旋结构模型和得保留复制机制，解决了基因 的自我修复和世代爱替问题。 2 April 1953 NATURE,VOL 171,page 737 MOLECULAR STRUCTURE OF NUCLEIC ACIDS James D.WATSON Francis H.C.CRICK 1962 Nobelprice in Medicine Molecular structure of nuclear acids and significance for information transfer in living material Rosalind Franklin Maurice Wilkins X-ray光源 DNA 1953- Franklin&Wilkins 1953-Watson Crick 新射能片 脱氧核糖核酸飘螺旋模型
2. 现代分子生物学的建立和发展阶段 （1）50年代揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机制，解决了基因 的自我修复和世代交替问题。 Rosalind Franklin Maurice Wilkins 1953- Franklin&Wilkins 衍射照片 1953-Watson & Crick 脱氧核糖核酸双螺旋模型
2.现代分子生物学的建立和发展所般 (2)遗传信息中心法则的建立和振拟子学说，褐示了蛋白质合成的逢传调控机 制，破泽了遗传密码，开创了基因调控的研完。 The Central Dogma of Molecular Biology X000C 908( Replication 1961-Jacob&monod DNA duplicates X /0D80004y DNA /X0000000/ Transcription RNA RNA synthesis Nuclcar memanc Promoter Operator Cytopicm Structural genes T,B前电 Translation Protein synthesis Protein Transcription is blocked by binding of operator 4+e1时1 Repressor genetic central dogma
2. 现代分子生物学的建立和发展阶段 （2）遗传信息中心法则的建立和操纵子学说，揭示了蛋白质合成的遗传调控机 制，破译了遗传密码，开创了基因调控的研究。 genetic central dogma 1961-Jacob&monod
3.秋积生命本质异开始改造生命的深入发展阶段 (1)重额DNA枝术的建立和发展 1962年Arber发现限制性核酸南切酶 I967年Gellert发挽了DNA连接膝 1970年Baltimore&Temin发挽了友转最酵 Arber Werner Martin F.Gellert 00 转sk线米移 Sticky and XOIBOOX Sticky end David Baltimore Howard Martin Temin
3. 认识生命本质并开始改造生命的深入发展阶段 （1）重组DNA技术的建立和发展 1962年Arber 发现限制性核酸内切酶 1967年Gellert发现了DNA连接酶 1970年 Baltimore & Temin 发现了反转录酶 David Baltimore Howard Martin Temin Arber Werner Martin F.Gellert
3.秋识生命本质异开始改造生命的深入发展所般 (2)基因工程的大力发展和适用 -基因工程（重组DNA枝木）：将补源基因通过体外切割、将接和重组后导入受体细 脆，使重组基因在受体细脆阳复制、转最、飘律表达，产生新的遗传特征的生物美型。 -1972年Berg和Cohen完成第一个细首基因的克隆，开创了基因工程新纪元，标志 着人美认识生命存质异能盖动改造生命的新时期开始。 -转基因小、转基因植物姻草
3. 认识生命本质并开始改造生命的深入发展阶段 （2）基因工程的大力发展和运用 -基因工程（重组DNA技术）：将外源基因通过体外切割、拼接和重组后导入受体细 胞，使重组基因在受体细胞内复制、转录、翻译表达，产生新的遗传特征的生物类型。 -1972年Berg和Cohen完成第一个细菌基因的克隆，开创了基因工程新纪元，标志 着人类认识生命本质并能主动改造生命的新时期开始。 -转基因小鼠、转基因植物烟草
3.秋识生命牵质异开怡改造生命的深入发展阶殷 (3)基图工程的大力发晨和适用 -1985年Kary.Mullis境立PCR技木： (Polymerase Chain Reaction) -1989年《Science》亲志粮道了耐热性DNA 多聚醉Tq膝的发现，预示着体外核算扩增枝木 的正式建立。（温泉的嘴热杆黄） 一wartod gene 下xponential amplifc城in -20世纪来单克隆抗体及基因工程抗体的发展和 表用。生物制品鲨产，品生农激素、醉、 :≥6 liecoic Aa家Ve*南 抗休、平扰素、胰岛素等
3. 认识生命本质并开始改造生命的深入发展阶段 （3）基因工程的大力发展和运用 -1985年Kary.Mullis 建立了PCR技术： （Polymerase Chain Reaction） - 1989年《 Science》杂志报道了耐热性DNA 多聚酶Taq酶的发现，预示着体外核算扩增技术 的正式建立。(温泉的嗜热杆菌） - 20世纪末单克隆抗体及基因工程抗体的发展和 应用。生物制品生产，如生长激素、酶、 抗体、干扰素、胰岛素等
3.秋识生命库质异开怡改造生命的深入发展阶般 (4)基因盟研究的发展： DNA的核苦酸序列分折枝木 -第一代测序技术：化学降解法、殿脱氧能换止法 nanopore -第二代测序枝木：454测序枝术、solexa测序枝术等 electrode 1 electrode 2 tunneling 新一代测序枝术：单分子测序、抽米孔测序等。 current 1990年启动了人美基因组计划，2003年共同徐制完成了人美基因组序列圆 临床上的寇用：产斋元创筛查、滨病遗传分折、肿痛个性化用菊等等
3. 认识生命本质并开始改造生命的深入发展阶段 （4）基因组研究的发展： DNA的核苷酸序列分析技术 -第一代测序技术：化学降解法、双脱氧链终止法 -第二代测序技术：454测序技术、solexa测序技术等 -新一代测序技术：单分子测序、纳米孔测序等。 1990年启动了人类基因组计划，2003年共同绘制完成了人类基因组序列图 临床上的应用：产前无创筛查、疾病遗传分析、肿瘤个性化用药等等
3.秋识生命牵质异开怡改造生命的深入发展阶般 (5)基因偏辑枝术的鱼速发展 -人工核酸酵介导的ZFN枝术(zinc-finger nucleases) -希最激活因子样效寇物核酸膝TALEN枝术(transcription activator--like effectors nucleases). -RNA引导的CRISPR-Cas核酸醉技术 CRISPR位点 间隔区 扫播靶点序列 tracrRNA Cas1 Cas2 Cas3-10 前导区 重复序列区 Cas9 CAS基因 CRISPR序列 双链外源DNA PAM Protospacer crRNA 靶点序列配对 We may be nearing the beginning of the tracrRNA Cas9 end of genetic 剪切 diseases. PAM Jennfer Dou中ha 2t1 Profoesor o Chomietry and Mdscular and Cel Bdogy 外源DNA双链被身开 crRNA http://www.london-science.com/archives/220
3. 认识生命本质并开始改造生命的深入发展阶段 （5）基因编辑技术的飞速发展 - 人工核酸酶介导的ZFN 技术(zinc-finger nucleases) - 转录激活因子样效应物核酸酶TALEN技术 (transcription activator-like effectors nucleases). - RNA引导的CRISPR-Cas核酸酶技术 http://www.london-science.com/archives/220
(二)常用的分子生物学技术 1.核酸的基本操作枝术 1)核酸的简介 2)基因组DNA提取 3)质粒DNA提取 4)真核细脆总RNA提取 5)琼脂糖峡股电深 6)核酸分子杂灸 7)聚合酶能式友寇PCR 8)RT-PCR
（二）常用的分子生物学技术 1.核酸的基本操作技术 1）核酸的简介 2）基因组DNA提取 3）质粒DNA提取 4）真核细胞总RNA提取 5）琼脂糖凝胶电泳 6）核酸分子杂交 7）聚合酶链式反应PCR 8） RT-PCR
