第二十章 常用分子生物喾技术的 原理及泫用 The Principle and Application of Common Used Techniques in Molecular Biology
目录 常用分子生物学技术的 原理及应用 The Principle and Application of Common Used Techniques in Molecular Biology 第二十章
第一节 分子杂交与印迹技术 Molecular Hybridization and Blotting Technique
目录 第一节 分子杂交与印迹技术 Molecular Hybridization and Blotting Technique
、分子杂交与印迹技术的原理 核酸分子杂交( nucleic acid hybridization 在DNA复性过程中,如果把不同DNA单链 分子放在同一溶液中,或把DNA与RNA放在 起,只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定 的碱基配对关系,就可以在不同的分子之间形 成杂化双链( heteroduplex)
目录 核酸分子杂交 (nucleic acid hybridization) 在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链 分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一 起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定 的碱基配对关系，就可以在不同的分子之间形 成杂化双链(heteroduplex) 。 一、分子杂交与印迹技术的原理
TTP 复性 RNA DNA
目录 复性 RNA DNA
(一)印迹技术 利用各种物理方法使电泳胶中的生物大分子 转移到NC等各种膜上,使之成为固相化分子 这一技术类似于用吸墨纸吸收纸张上的墨迹,因 此称之为“ blotting”,译为印迹技术
目录 （一）印迹技术 利用各种物理方法使电泳胶中的生物大分子 转移到NC等各种膜上，使之成为固相化分子。 这一技术类似于用吸墨纸吸收纸张上的墨迹，因 此称之为“blotting”，译为印迹技术
(二)探针技术 用放射性核素、生物素或荧光染料标记其 末端或全链的已知序列的多聚核苷酸链被称为 探针”,探针可以与固定在NC膜上的核苷 酸结合,判断是否有同源的核酸分子存在
目录 用放射性核素、生物素或荧光染料标记其 末端或全链的已知序列的多聚核苷酸链被称为 “探针”，探针可以与固定在NC膜上的核苷 酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在。 （二）探针技术
二、印迹技术的类别及应用 (-)DNA印迹( Southern blotting) 用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体的分析 (二)RNA印迹( Northern blotting) 用于RNA的定性定量分析。 (三)蛋白质的印迹( Western blotting) 用于蛋白质定性定量及相互作用研究
目录 二、印迹技术的类别及应用 （一）DNA印迹 (Southern blotting) （二）RNA印迹 (Northern blotting) （三）蛋白质的印迹 (Western blotting) 用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体的分析。 用于RNA的定性定量分析。 用于蛋白质定性定量及相互作用研究
■其他: 斑点印迹( dot blotting) 原位杂交( in situ hybridization) DNA点阵 NA array) DNA芯片技术( DNA chip)
目录 其他： 斑点印迹 (dot blotting) 原位杂交 (in situ hybridization) DNA点阵 (DNA array) DNA芯片技术 (DNA chip)
限制性内切酶 RNA样品 酶切DNA溶液 蛋白样品 电泳↓转移↓杂交 转移到NC膜后与 转移到NC膜或尼龙膜 转移到NC膜或FDF 标记探针杂交 后与标记探针杂交 膜后与抗体反应 种印迹技术的比较 放或 射化 自学 显显 影色 DNA印迹 RNA印迹 蛋白印迹
目录 三 种 印 迹 技 术 的 比 较
DNA 转移至酸 千维滤膜上 限制酶消化( HindI) 加重量 吸潮纸 滤纸 转移缓神液 硝酸纤维滤 琼脂糖胶电脉 3PDNA探针 硝酸纤维滤膜 放射自显影 分子杂交实验
分子杂交实验 ① ② ③