第35卷第7期湖北畜牧兽医Vol. 35 No. 072014年07月Hubei Journal of Animal and Veterinary SciencesJuly 2014一株羊源肠出血性大肠杆菌的分离与鉴定林家琪1.2,董真1.2,金铎1,2,刘慧谋1,2顾敏1.2,焦库华1,2,展天松1.2,王彦红1.2刘文博1.2（1.扬州大学兽医学院，江苏扬州225009；2.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州225009）摘要：肠出血性大肠杆菌是一种严重危害高禽养殖的革兰氏阴性杆菌，扬州大学动物医院接诊一例羊急性肠出血伴有严重腹泻引起的急性死亡的病例，经过剖检、分离培养、革兰氏染色、生化鉴定后确诊为肠出血性大肠杆菌。关键词：肠出血性大肠杆菌；分离鉴定；耐药性分析中图分类号：S858.26文章编号：1007-273X(2014)07-0005-01文献标识码：A大肠埃希氏菌通常称为大肠杆菌，是埃希菌属血，肠道黏膜卡他性炎症，肾脏肿大、淤血。中的一类，为革兰氏阴性无芽胞的直杆菌，两端钝2材料与方法圆，周身鞭毛，能运动，为异养兼性厌氧菌，最适生长温度为37℃,最适生长pH7.2~7.4,在普通琼脂培2.1材料养基上生长良好，在麦康凯琼脂上形成红色菌落。大病料；病羊肝脏、脾脏、心脏、肠道等病变组织。肠杆菌主要有O、K、H3种抗原。大肠杆菌广泛分2.2方法布在自然界，大多数是不致病菌，主要附生在人或动2.2.1细菌分离取山羊的肠道、肝脏、脾脏、肾脏物的肠道里，为正常菌群，少数具有毒性，在一定条等病变组织在无菌环境下接种血琼脂平板，在37℃件下可引起肠道外感染。某些血清型菌株的致病性条件下培养24h。然后在无菌条件下分别挑取鲜血强，引起腹泻，统称致病性大肠杆菌。根据毒力因子平板上的单个菌落，在鲜血平板和麦康凯琼脂进行和发病机制的不同致腹泻型大肠杆菌可分为5类：鉴别培养，并作有氧厌氧于37℃条件下进行对照培产肠毒素大肠杆菌、肠致病型大肠杆菌、肠出血型大养。挑取单个菌落进行革兰氏染色、镜检，观察细菌肠杆菌、肠侵袭型大肠杆菌、肠聚集型大肠杆菌。因形态特征和染色特性。致病性大肠杆菌的血清型不同，表现的病理过程和2.2.2生化试验利用细菌微量生化反应管（购于临床症状也不致一般以肠炎较多见，有时还可引杭州微生物试剂有限公司，操作方法与判定标准参起败血症和毒血症，引起动物死亡，或者严重影响幼照该公司操作方法与标准）对所分离的菌株进行生畜生长发育,给畜牧业发展造成重大损失[2]。近年化指标测定，分别挑取纯化菌株接种于生化鉴定管，来，江浙一带地区山羊养殖量不断扩大，随之，各种37℃温箱中培养24~48h，记录生化反应结果。疾病也随之发生，现将一例羊感染肠出血性大肠杆2.2.3药敏试验对此菌进行纸片法药敏试验，药菌的病例报告如下。敏纸片购于杭州微生物试剂有限公司。操作方法和判定标准参照该公司操作方法与标准。1发病情况3结果与分析2013年3月，江苏南通的一山羊养殖户将发病的两月龄山羊送至扬州大学动物兽医院就诊。该养3.1细菌分离殖户饲养山羊174只，病死24头。畜主叙述病羊出经培养，血平板上出现了圆形，凸起，光滑，湿润现腹泻，伴有鼻涕、咳嗽，食欲不振。用环丙沙星和氟的菌落，并出现溶血环，在麦康凯培养基上为生长良苯尼考治疗，但未见效。剖检可见病羊有脓性鼻液，好的粉红色菌落，经过厌氧有氧的对照培养发现该肺部淤血、气肿，肝脏肿大、淤血，胆囊扩张，瘤胃黏细菌在有氧无氧环境均可生长，但有氧环境生长略膜轻微脱落，真胃黏膜充血、轻度出血，小肠浆膜出微旺盛。挑取单个菌落进行革兰氏染色镜检有中等收稿日期：2014-05-25基金项目：江苏高校优势学科建设工程；江苏省大学生创新训练计划省级重点项目（201311117039Z)作者简介：林家琪（1992-)，女，江苏南通人，本科生，主要从事羊临床菌株耐药性及质粒指纹图谱分析应用的研究；通讯作者，王彦红，讲师，（电子信箱）wyh7405@163.com；刘文博，副教授，（电子信箱）lwb@yzu.edu.cn
第 35卷第 7期 2014年 07月 湖 北 畜牧 兽 医 HubeiJournalofAnimalandVeterinarySciences Vo1．35 No．07 July 2014 一 株羊源肠出血性大肠杆菌的分离与鉴定 林家琪 一，董 真 一，金 铎 一，刘慧谋 一，顾 敏 一，焦库华 一，展天松 一，王彦红 一，刘文博 · (1．扬州大学兽医学院，江苏 扬州 225009；2．江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏 扬州 225009) 摘要：肠出血性大肠杆菌是一种严重危害畜禽养殖的革兰氏阴性杆菌，扬州大学动物医院接诊一例羊急性肠出血伴 有严重腹泻引起的急性死亡的病例，经过剖检、分离培养、革兰氏染色、生化鉴定后确诊为肠出血性大肠杆菌。 关键词 ：肠 出血性 犬肠杆 菌；分 离鉴 定；耐药性分析 中图分 类号 ：$858．26 文献标识码 ：A 文章 编号 ：1007—273X{2014)07—0005—01 大肠埃希 氏菌通常称为大肠杆菌 ．是埃希菌属 中的一类 ．为革兰氏阴性无芽胞 的直杆菌 ，两端钝 圆 ，周身鞭毛 ，能运动 ，为异养兼性厌氧菌 ，最适生长 温度为 37℃，最适生长 pH 7．2 7．4，在普通琼脂培 养基上生长 良好 。在麦康凯琼脂上形成红色菌落 。大 肠杆菌主要有 0、K、H3种抗原【1】。大肠杆菌广泛分 布在 自然界 ．大多数是不致病菌 ，主要附生在人或动 物的肠道里 ．为正常菌群 ，少数具有毒性 ，在一定条 件下可引起肠道外感染。某些血清型菌株的致病性 强 ．引起腹泻 。统称致病性大肠杆菌。根据毒力 因子 和发病机制的不同 ．致腹泻型大肠杆菌可分为 5类 ： 产肠毒素大肠杆菌 、肠致病型大肠杆菌 、肠 出血型大 肠杆菌 、肠侵袭型大肠杆菌、肠聚集型大肠杆菌。因 致病性大肠杆菌的血清型不 同．表现的病理过程和 临床症状也不一致 一般 以肠炎较多见 ．有时还可引 起败血症和毒血症 ，引起动物死亡 ，或者严重影响幼 畜生长发育 ，给畜牧业发展造成重大损失[2】。近年 来 ．江浙一带地区山羊养殖量不断扩大 ，随之 ，各种 疾病也随之发生．现将一例羊感染肠出血性大肠杆 菌的病例报告如下 1 发病情况 2013年 3月 ．江苏南通 的一 山羊养殖户将发病 的两月龄 山羊送至扬州大学动物兽医院就诊 该养 殖户饲养 山羊 174只 ．病死 24头。畜主叙述病羊出 现腹泻，伴有鼻涕、咳嗽，食欲不振。用环丙沙星和氟 苯尼考治疗 。但未见效 。剖检可见病羊有脓性鼻液 ， 肺部淤血 、气肿 ，肝脏肿大、淤血 ，胆囊扩张 ，瘤 胃黏 膜轻微脱落 ，真 胃黏膜充血 、轻度 出血 ，小肠浆膜出 血 ，肠道黏膜卡他性炎症 ，肾脏肿大、淤血 。 2 材料与方 法 2．1 材 料 病料 ：病羊肝脏 、脾脏 、心脏 、肠道等病变组织。 2_2 方 法 2．2．1 细 菌分 离 取 山羊的肠道 、肝脏 、脾脏 、肾脏 等病变组织在无菌环境下接种血琼脂平板 ，在 37℃ 条件下培养 24h。然后在无菌条件下分别挑取鲜血 平板上 的单个菌落 ．在鲜血平板和麦康凯琼脂进行 鉴别培养。并作有氧厌氧于 37℃条件下进行对照培 养 。挑取单个菌落进行革兰氏染色 、镜检 ，观察细菌 形态特征和染色特性 2．2．2 生化试验 利用细菌微量生化反应管 (购于 杭州微生物试剂有 限公司．操作方法与判定标准参 照该公 司操作方法与标准 )对所分离的菌株进行生 化指标测定 ，分别挑取纯化菌株接种于生化鉴定管 ， 37℃温箱 中培养 24～48h．记录生化反应结果。 2．2．3 药敏试验 对此菌进行纸片法药敏试验 ．药 敏纸片购 于杭州微生物试剂有 限公司 操作方法和 判定标准参照该公司操作方法与标准 3 结果与分析 3．1 细菌分离 经培养 ，血平板上出现了圆形 ，凸起 ，光滑 ，湿润 的菌落 ．并出现溶血环 ．在麦康凯培养基上为生长 良 好的粉红色菌落 。经过厌氧有氧的对照培养发现该 细菌在有氧无氧环境均可生长 ．但有氧环境生长略 微旺盛。挑取单个菌落进行革兰氏染色镜检有中等 收藕 日期 ：2014-05—25 基金项 目：江苏高校优势 学科建设工程 ；江苏省大学生创新训练计划省级重点项 目(201311117039Z) 作者简 介 ：林 家琪 (1992一)，女 ，江苏南通人 ，本科生 ，主要从事羊I临床 菌株耐药性及 质粒指 纹图谱 分析应用 的研究 ；通讯作者 ，王彦 红 ，讲 师 ，(电子信箱 )wyh7405@163．corn；刘文博 ，副教授 ，(电子信箱 )1wb yzu．edu．ca
第35卷第7期湖北畜牧兽医Vol. 35 No. 072014年07月Hubei Jourmal of Animal and Veterinary SciencesJuly 2014猪腹泻病料进行病原微生物的分离培养曾小凤（广东省新丰县梅坑镇畜牧兽医水产站，广东新丰510000）摘要：对广东某一家猪场采集的病料进行病原微生物的分离培养，获得4株菌株。通过菌落和细菌形态学观察、生化试验进行细菌的分离鉴定。根据细菌的形态特征及生长特性，同时应用肠杆菌科GY乙一15e编码鉴定管和葡萄球菌属细菌生化编码鉴定管TH一16S对所分离的细菌进行分类鉴定，以鉴定其属和种。试验结果确定4株菌种中有大肠埃希氏菌3株，葡萄球茵1株。关键词：大肠埃希氏菌：分离培养；鉴定；生物学特性；生化反应；菊萄球菌中图分类号：S858.28文献标识码：A文章编号：1007-273X(2014)07-0006-021.1.3主要用具接种环，接种针、培养皿、试管、载1材料与方法玻片等。1.1材料1.1.4生化试剂大肠杆菌科生化编码鉴定管、葡萄球菌属细菌生化编码鉴定管均购于杭州微生物试1.1.1样品来源从某猪场分离的4株菌株。剂有限公司。1.1.2主要仪器超净工作台、THZ-C恒温振荡1.1.5培养基营养肉汤、血清肉汤、普通平板、面器、pH计、光学显微镜等。收稿日期：2014-06-25作者简介：曾小凤（1985-），女，广东新丰人，助理曾医师，主要从事畜牧医技术推广及兽医临床诊断工作。大小的革兰氏阴性杆菌。料中加人4.5kg多聚甲醛[3]。3.2生化试验大肠杆菌容易形成抗药性而目大肠杆菌可通结果表明该分离株能分解葡萄糖乳糖与靛基质、鸟过菌毛将其抗药性质粒传递给其他大肠杆菌，加之氨酸、赖氨酸、卫矛醇反应，不与苯丙氨酸、枸橡酸现在养殖户们对抗生素的应用还并不是十分明确，盐、尿素、硫化氢反应，与经典大肠埃希氏菌特征相抗生素滥用的现象非常严重，这样使得大肠杆菌的符。抗药性形成较快，环境中大肠杆菌耐药性菌株越来越多,耐药性在疾病的治疗上扮演着重要的角色，3.3药敏试验试验结果表明该分离株对丁胺卡那霉素、庆大从试验中发现使用胺卡那霉素，庆大霉素左氟沙星、菌必治、氟哌酸、链霉素等药物对本羊场大肠杆霉素、左氟沙星、菌必治、氟哌酸、链霉素等敏感。对菌病的治疗有显著的意义。此外,支持疗法对于该病氯霉素、卡那霉素、萘啶酸、强力霉素、复方新诺明、罗美沙星等耐药。的治疗非常重要，尤其在该病出现严重腹泻时，当山羊不能自时可用5%葡萄糖盐水或复方盐水灌服[5]。4讨论参考文献：[1]】陆承平.兽医微生物学[M].第四版.中国农业出版社,2007大肠杆菌是革兰氏阴性、中等大小的杆菌，分类[2]房全正.羊大肠杆菌病病原特性[]畜牧兽医科技信息,2013,(6]上属肠杆菌科，埃希氏菌属，无芽孢，具有周鞭毛。由62.于大肠杆菌对外界不利因素的抵抗能力不强，60℃[3]秦承林,熊东艳,陈清军，鸡大肠杆菌病的防治[]北京农业,2009条件下15min即死亡，因此优化环境是防治大肠杆(24):6871.菌病的重要方法。场址应建立在水源充足、水质良[4]王建，沃妮娜，邱江，大肠杆菌的药敏试验[{]中国畜牧兽医文摘，2014,(30)3:29.好、排水方便、远离居民区，平时用0.3%过氧乙酸，[5]张满其.犊牛大肠杆菌的诊治[]今日畜牧善医,2013(6):57-58按30mL/m喷雾消毒，也可用多聚甲醇在25m2垫
第 35卷第 7期 2014年 07月 湖 北 畜 牧 兽 医 HubeiJournalofAnimalandVeterinarySciences Vo1．35No．07 July 2014 猪腹泻病料进行病原微生物的分离培养 曾小凤 (广东省新丰县梅坑镇 畜牧兽 医水产站 ，广东 新丰 510000) 摘要：对广东某一家猪场采集的病料进行病原微生物的分离培养，获得 4株茵株。通过菌落和细菌形态学观察、生化 试验进行 细菌的分 离鉴定 。根 据细菌的形 态特征及 生长特性 ，同时应用肠杆 菌科 GYZ一15e编码鉴 定管和葡萄球 菌属 细菌生化编码鉴定管 TH一16S对所分 离的细 菌进行分类鉴定 ，以鉴定其属 和种 。试验结果确定 4株 菌种 中有 大肠埃 希氏茵 3株 ，葡萄球菌 1株 。 关键词 ：大肠埃希氏茵；分离培养；鉴定；生物学特性；生化反应；葡萄球菌 中图分 类号 ：$858．28 文献标识码 ：A 文章 编号 ：1007—273X{2014)07—0006—02 1 材 料与方法 1．1 材料 1．1．1 样品来源 从某猪场分离的 4株菌株 。 1．1．2 主要 仪 器 超净 工作 台 、THZ—C恒温 振荡 器 、pH计 、光学显微镜等 。 1．1．3 主要用具 接种环、接种针 、培养皿 、试管 、载 玻片等 1．1．4 生化试剂 大肠杆菌科 生化编码鉴定管 、葡 萄球菌属细菌生化编码鉴定管均购于杭州微生物试 剂有限公司 1．1．5 培养基 营养肉汤 、血清 肉汤 、普通平板 、血 收稿 日期 ：2014—06—25 作者 简介 ：曾小凤 (1985一)，女 ，广东新丰人 ，助理兽 医师 ，主要从 事畜牧兽 医技术推广及兽 医临床诊断工作 。 · + ··+ ”+ ”—卜 ··+ ··+ ··+ ··—+．··—·+．一··—-+一··—+一-·—●一··+ ··—-+一··—+一··—_．一”—+_一··—-+一”—-●一”—-●一··—+一··—●一··—+一··—+一··+ ··+ ··—·I卜-··——卜 ··+ · 大小的革兰氏阴性杆菌 。 3．2 生化试 验 结果表明该分离株能分解葡萄糖乳糖与靛基 质 、鸟 氨酸 、赖氨酸 、卫矛醇反应 ，不与苯丙氨酸 、枸橼酸 盐 、尿素、硫化氢反应 ，与经典大肠埃希 氏菌特征相 符。 3．3 药敏试验 试验结果表明该分离株对丁胺卡那霉素 、庆大 霉素 、左氟沙星 、菌必治、氟哌酸、链霉素等敏感。对 氯霉素 、卡那霉素 、萘啶酸、强力霉素 、复方新诺明 、 罗美沙星等耐药。 4 讨论 大肠杆菌是革兰氏阴性 、中等大小的杆菌 ，分类 上属肠杆菌科 ．埃希 氏菌属 ，无芽孢 ，具有周鞭毛 。由 于大肠杆菌对外界不利因素的抵抗能力不强 ．60℃ 条件下 15min即死亡 ．因此优化环境是 防治大肠杆 菌病的重要方法 。场址应建立在水源充足 、水质 良 好 、排水方便 、远离居 民区，平时用 0．3％过氧 乙酸 ， 按 30mL／m3喷雾消毒 ．也可用多聚甲醇在 25m 垫 料中加入 4．5kg多聚 甲醛[3l。 大肠杆菌容易形成抗药性 ．而且大肠杆菌可通 过菌毛将其抗药性质粒传递给其他大肠杆菌 ．加之 现在养殖户们对抗生素 的应用还并不是 十分 明确 。 抗生素滥用的现象非常严重 ．这样使得大肠杆菌的 抗药性形成较快 ．环境 中大肠杆菌耐药性菌株越来 越多[41．耐药性在疾病 的治疗上扮演着重要 的角色 ． 从试验 中发现使用丁胺卡那霉素、庆大霉素 、左氟沙 星、菌必治 、氟哌酸 、链霉素等药物对本羊场大肠杆 菌病的治疗有显著的意义。此外 ．支持疗法对于该病 的治疗非常重要 ．尤其在该病出现严重腹泻时 ，当山 羊不能 自吮时可用 5％葡萄糖盐水或复方盐水灌服[5]。 参考文献 ： [1]陆承平．兽医微生物学[M]．第四版．中国农业出版社，2007． [2]房全正．羊大肠杆菌病病原特性[J]．畜牧兽医科技信息，2013，(6)： 62． [3]秦承林，熊东艳，陈清军 ．鸡 大肠杆 菌病 的防治[J]．北京农业，2009 (24)：68—71． [4]王 建 ，沃妮娜 ，邱 江．大肠杆菌 的药敏试 验U】．中国畜牧兽 医 文摘，2014，(30)3：29． [5]张满其 ．犊 牛大肠杆菌 的诊治Ⅲ．今 日畜牧 兽医，2013(6)：57—58．