实验四肠道杆菌提醒：不要打开平血和试管！！！
实验四 肠道杆菌 提醒:不要打开 平皿和试管!!!
实验目的：了解常见肠道杆菌的生物学特性及分离鉴定程序掌握肠道杆菌在选择、鉴别培养基上生长/选择/鉴别的原理和现象掌握药敏试验的原理和方法实验内容（录像）肠道杆菌的生物学特性、致病与检测肠道杆菌的分离鉴定程序介绍肠道杆菌在选择/鉴别培养基上生长现象观察药敏试验(纸片法）
实验目的： • 了解常见肠道杆菌的生物学特性及分离鉴定程序. • 掌握肠道杆菌在选择、鉴别培养基上生长/选择/鉴 别的原理和现象 . • 掌握药敏试验的原理和方法 实验内容 • 肠道杆菌的生物学特性、致病与检测（录像）. • 肠道杆菌的分离鉴定程序介绍. • 肠道杆菌在选择/鉴别培养基上生长现象观察. • 药敏试验（纸片法）
（录像）1.肠道杆菌的生物学特性、致病与检测2.肠道杆菌的分离鉴定程序介绍：p281接种选择培养基（中国兰、SS粪便琼脂平板、伊红美兰平板）临床症状挑选无色的可疑致病菌落增菌血液、尿液、接种鉴别培养基脑脊液（双糖含铁培养基）生化反应鉴定药敏试验
1.肠道杆菌的生物学特性、致病与检测（录像） 2.肠道杆菌的分离鉴定程序介绍：p281 临 床 症 状 粪便 血液、尿液、 脑脊液 接种选择培养基（中国兰、SS 琼脂平板、伊红美兰平板.） 挑选无色的可疑致病菌落 接种鉴别培养基 （双糖含铁培养基） 增 菌 生化反应鉴定 药敏试验
*乳糖发酵试验可以用来初步鉴别肠道致病菌还是非致病菌能发酵乳糖产酸的为非致病菌，例如大肠杆菌不能发酵乳糖的为致病菌，例如伤寒杆菌、副伤寒沙门菌、志贺菌等。在选择培养基中加入一些乳糖和酸碱指示剂、或显色试剂，如细菌分解乳糖产酸，则酸碱指示剂会变色故在选择培养基上，致病菌常为无色或淡黄色
*乳糖发酵试验可以用来初步 鉴别肠道致病菌还是非致病菌 能发酵乳糖产酸的为非致病菌，例如大肠杆菌； 不能发酵乳糖的为致病菌，例如伤寒杆菌、副伤寒 沙门菌、志贺菌等。 在选择培养基中加入一些乳糖和酸 碱指示剂、或显色试剂，如细菌分 解乳糖产酸，则酸碱指示剂会变色。 故在选择培养基上，致病菌常为 无色或淡黄色
3.肠道杆菌在选择培养基上的菌落观察：(1）S.S琼脂平板Salmonella & Shigella agar plate基础培养基营养物培养基成分：(乳糖红(酸)黄 (碱)→中性红酸碱指示剂—pH6.8-8.0，煌绿、胆盐、枸橡酸钠等：抑菌菌种：大肠杆菌伤寒杆菌(2) EMBEosin-methyleneblueagarplate培养基成分：基础培养基营养物乳糖伊红、美兰：抑菌；酸性条件下结合染色菌种：大肠杆菌伤寒杆菌
3.肠道杆菌在选择培养基上的菌落观察： （1）s.s琼脂平板（ Salmonella & Shigella agar plate） 培养基成分：基础培养基营养物 乳糖 红(酸） 黄（碱） 中性红（酸碱指示剂—pH6.8-8.0，） 煌绿、胆盐、枸橼酸钠等：抑菌 菌种：大肠杆菌 伤寒杆菌 （2）EMB（Eosin-methylene blue agar plate） 培养基成分：基础培养基营养物 乳糖 伊红、美兰：抑菌；酸性条件下结合染色 菌种：大肠杆菌 伤寒杆菌
平板EMBS.S琼脂平板无色菌落伤寒杆菌无色菌落大肠杆菌红色菌落深紫色，带金属光泽
EMB 平板 S.S 琼脂平板 伤寒杆菌 无色菌落 无色菌落 大肠杆菌 深紫色，带金属光泽 红色菌落
4.肠道杆菌在鉴别培养基上的生化现象观察一一双糖含铁培养基p249Double Sugar Iron Agar)培养基成分：观察内容：上层：蛋白陈、氯化钠、上层颜色V乳糖、硫酸亚铁、硫代硫酸钠、琼脂和酚红指示剂>上下层交界颜色固体斜面斜面基，划线接>下层颜色种。下层：蛋白陈、氯化钠、>下层气泡/气柱葡萄糖、琼脂和酚红指示剂．半固体培养基，穿刺>下层接种线接种
4.肠道杆菌在鉴别培养基上的生化现象观察——双 糖含铁培养基（Double Sugar Iron Agar） p249 • 培养基成分： • 上层：蛋白胨、氯化钠、 乳糖、硫酸亚铁、硫代硫 酸钠、琼脂和酚红指示剂. 固体斜面斜面基，划线接 种。 • 下层：蛋白胨、氯化钠、 葡萄糖、琼脂和酚红指示 剂. 半固体培养基，穿刺 接种。 观察内容： ➢ 上层颜色 ➢上下层交界颜色 ➢下层颜色 ➢下层气泡/气柱 ➢下层接种线
肠道杆菌的生化反应培养基观察内容大肠杆菌痫疾杆菌伤寒杆菌乙型副伤寒杆菌上层乳糖发酵田试验(固体)H,S试验++++/下层葡萄糖发田田+X酵试验(半固体)动力实验+++酸碱指示剂-一-酚红（碱性为红色；酸性为黄色）
肠道杆菌的生化反应 培养基 观察内容 大肠杆菌 痢疾杆菌 伤寒杆菌 乙型副伤 寒杆菌 上层 (固体) 乳糖发酵 试验 ⊕ - - - H2S试验 - - +/- +++ 下层 (半固体) 葡萄糖发 酵试验 ⊕ + + ⊕ 动力实验 + - + + 酸碱指示剂-酚红（碱性为红色；酸性为黄色）
未种菌大肠杆菌痢疾杆菌伤寒杆菌乙型副伤寒杆菌
未种菌 大肠杆菌 痢疾杆菌 伤寒杆菌 乙型副伤 寒杆菌
（纸片法，p262，263)5.药敏试验原理：在有抗生素的培养基中，抗生素能够抑制细菌生长或者杀灭细菌。方法：纸片法一一定性（了解对那种抗生素敏感试管法一一定量（何种剂量下治疗一MIC）抑菌环（抑菌圈）
5.药敏试验（纸片法，p262，263） • 原理：在有抗生素的培养基中，抗生素能够抑制细 菌生长或者杀灭细菌。 • 方法：纸片法——定性（了解对那种抗生素敏感） • 试管法——定量（何种剂量下治疗—MIC） • 抑菌环 （抑菌圈）