实验一细菌的形态结构观察
实验一 细菌的形态结构观察
实验目的：了解革兰染色的原理掌握并熟练操作细菌涂片的革兰染色熟悉细菌的特殊染色法并观察细菌的特殊结构一一英膜（capsule），鞭毛（（flagellum），芽胞(spore)实验内容：制备细菌涂片，进行革兰染色并观察细菌的大小、形态、排列与染色性一英膜观察细菌的特殊结构（示教镜）（flagellum），芽胞（capsule），鞭毛（spore
实验目的： • 了解革兰染色的原理. • 掌握并熟练操作细菌涂片的革兰染色. • 熟悉细菌的特殊染色法并观察细菌的特殊结构——荚 膜（capsule）, 鞭毛（flagellum）, 芽胞（spore) 实验内容： • 制备细菌涂片，进行革兰染色并观察细菌的大小、形 态、排列与染色性. • 观察细菌的特殊结构（示教镜）——荚膜 （capsule）, 鞭毛（flagellum）, 芽胞（ spore)
p192、、细菌的形态结构观察方法显微镜细菌体积小，半透明，活体很难观察。经常用染色方法进行观察：1单染色法2鉴别染色法革兰染色法（Gramstain）：最常用：1884年丹麦细菌学家革兰发明。其原理等电点学说”+“细胞壁结构学说3特殊染色法：
1、细菌的形态结构观察方法 p192 ◆显微镜 ◆细菌体积小，半透明，活体很难观察。经常用 染色方法进行观察： 1 单染色法 2 鉴别染色法 革兰染色法（Gram stain):最常用， 1884年丹麦细菌学家革兰发明。其原理—— “等电点学说”+“细胞壁结构学说”。 3 特殊染色法：
surfaceproteinsproteinLPSteichoicacidproteinOpolysaccharideporirlipoteichoic acid-lipidA808838outermembrane00O0peptidoglycanlipoprotein800000000OOOOOONAMNAGpeptidoglycanOOOOOOOOOODOpeptide工务cytoplasmiccytoplasmicmembranemembranephospholipidphospholipid革兰阳性菌细胞壁由肽聚糖和磷壁革兰阴性菌细胞壁由肽聚糖和外膜酸组成。肽聚糖层厚，结构致密组成。肽聚糖层薄，含糖类少，脂富含糖类，脂质含量少。结晶紫染质含量多。结晶紫染成紫色，再用成紫色，再用脂溶剂丙酮酒精脱色脂溶剂丙酮酒精脱色易脱色，最后不易脱色，最后用复红进行红染仍用复红进行红染仍为红色（红色判为紫色（紫蓝色判断为革兰阳性断为革兰阴性
革兰阳性菌细胞壁由肽聚糖和磷壁 酸组成。肽聚糖层厚，结构致密， 富含糖类，脂质含量少。结晶紫染 成紫色，再用脂溶剂丙酮酒精脱色 不易脱色，最后用复红进行红染仍 为紫色（紫蓝色判断为革兰阳性） 革兰阴性菌细胞壁由肽聚糖和外膜 组成。肽聚糖层薄，含糖类少，脂 质含量多。结晶紫染成紫色，再用 脂溶剂丙酮酒精脱色易脱色，最后 用复红进行红染仍为红色（红色判 断为革兰阴性）
2.细菌涂片的制作：“有菌观念，无菌操作步骤：涂片——千燥——固定p193讲台上取一张清洁载玻片用接种环取3-5环生理盐水取2个位置在载玻片上，用接种环无菌刮取细菌在生理盐水中涂开，两位置有交叉（以便直径1cm在同一视野下比较两种细菌大小）涂成薄膜
2.细菌涂片的制作:“有菌观念，无菌操作” 步骤：涂片——干燥——固定 p193 讲台上取一张清洁载 玻片 用接种环取3-5环生理盐水 在载玻片上，取2个位置 用接种环无菌刮取细菌在生理盐 水中涂开，两位置有交叉（以便 在同一视野下比较两种细菌大小） 涂成薄膜 1 2 直径1cm
注意无菌操作：。1.取菌前，试管口、接种环火焰消毒；试管塞保持在手上或倒放在桌面上！2.取菌后，试管口、接种环火焰消毒，盖上试管塞
• 注意无菌操作： • 1. 取菌前，试管口、接种环火焰消毒； 试管塞保持在手上或倒放在桌面上！ 2. 取菌后，试管口、接种环火焰消毒， 盖上试管塞
注意点：干燥时不要太靠近火焰，以免水温过高细菌变形、破裂！在空气中自然干燥或在火焰上方烘干（菌膜面向上，至少10cm）小心防烫！通过火焰：来回3次进行热固定（菌膜面向上)
.通过火焰，来回3次 进行热固定（菌膜面 向上） 在空气中自然干燥或 在火焰上方烘干（菌 膜面向上，至少10cm) 注意点：干燥时不要太靠 近火焰，以免水温过高， 细菌变形、破裂！ 小心防烫！
（Gram stain）：分4步p1953.革兰染色法9No.1step---初染结晶紫和等量的碳酸氢钠（3-5秒）倒掉染料，细水流冲洗，甩干媒染：No.2step--碘液（3-5秒）倒掉染料，细水流冲掌握好时间！洗，甩干脱色No.3step丙酮酒精(3-5秒）倒掉染料，细水流冲洗，甩干复染No. 4step---倒掉染料，细水流冲洗，甩干，烘干稀释复红（10-15秒）
3.革兰染色法（Gram stain）：分4步 -p195 No.1step-初染: No.2step- 媒染: No.3step-脱色: No.4step-复染 结晶紫和等量的碳酸氢钠（3-5秒） 碘液（3-5秒） 丙酮酒精（3-5秒） 稀释复红（10-15秒） 倒掉染料，细水流冲 洗，甩干 倒掉染料，细水流冲 洗，甩干 倒掉染料，细水流冲 洗，甩干 倒掉染料，细水流冲 洗，甩干，烘干 掌握好时间！
4.油镜观察在干燥的细菌涂片上滴加香柏油，转到油镜（标志100/1.25/0IL”）进行观察。观察内容：细菌的革兰染色性：(Gt)菌细菌被染成紫蓝色一一革兰阳性(G-)菌细菌被染成红色一一革兰阴性(b)2单个细菌的形态：球菌(C），杆菌3细菌的排列：散在排列；葡萄状排列记录：G+c，葡萄状排列;G-b，散在排列
4.油镜观察 在干燥的细菌涂片上滴加香柏油，转到油镜(标志 “100/1.25/OIL”)进行观察。观察内容： 1 细菌的革兰染色性： 细菌被染成紫蓝色——革兰阳性（G +)菌 细菌被染成红色——革兰阴性（G -)菌 2 单个细菌的形态：球菌（C），杆菌（b） 3 细菌的排列：散在排列；葡萄状排列 记录： G +c，葡萄状排列； G -b，散在排列
油镜使用注意点：1光线最亮，聚光器升到最上，光圈完全打开；2.先用低倍镜找到视野，滴加香柏油（勿涂开）将油镜浸入；3.小心调节粗、细螺旋直到看清视野，观察细菌。（替代方法：目视下将油镜头下降接触玻片，再反向远离调节聚焦，可防玻片被压碎！）4.镜头不清晰可用拭镜纸蘸乙醇乙醚清洗；5.使用完毕要用拭镜纸清洁油镜头
• 1.光线最亮，聚光器升到最上，光圈完全打开； • 2.先用低倍镜找到视野，滴加香柏油（勿涂开）， 将油镜浸入； • 3.小心调节粗、细螺旋直到看清视野，观察细菌。 （替代方法：目视下将油镜头下降接触玻片，再反 向远离调节聚焦，可防玻片被压碎！） • 4.镜头不清晰可用拭镜纸蘸乙醇乙醚清洗； • 5.使用完毕要用拭镜纸清洁油镜头。 油镜使用 注意点：