生物化学与分子生物学实验双缩脲法测定血清蛋白质含量
生物化学与分子生物学实验 双缩脲法测定血清蛋白质含量
蛋白质的定量分析是生物化学和其他生命学科最常涉及的分析内容，是临床上诊断疾病及检查康复情况的重要指标，也是许多生物制品，药物、食品质量检测的重要指标。在生化实验中，对样品中的蛋白质进行准确可靠的定量分析，则是经常进行的一项非常重要的工作
蛋白质的定量分析是生物化学和其他生 命学科最常涉及的分析内容，是临床上诊 断疾病及检查康复情况的重要指标，也是 许多生物制品，药物、食品质量检测的重 要指标。在生化实验中，对样品中的蛋白 质进行准确可靠的定量分析，则是经常进 行的一项非常重要的工作
自前测定蛋白质含量的方法有很多种，下面列出根据蛋白质不同性质建立的一些蛋白质测定方法：物理性质：紫外分光光度法化学性质：凯氏定氮法双缩脲法、Lowry法银染法。染色性质：考马斯亮蓝染色法、其他性质·带光法
目前测定蛋白质含量的方法有很多种，下 面列出根据蛋白质不同性质建立的一些蛋 白质测定方法： 物理性质：紫外分光光度法。 化学性质：凯氏定氮法、双缩脲法、Lowry 法 染色性质：考马斯亮蓝染色法、银染法。 其他性质：荧光法
一凯氏定氮法（Kjeldahldetermination）·定义：一测定化合物或混合物中总氮量的一种方法即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准碱滴定就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法
–凯氏定氮法 (Kjeldahl determination ) • 定义： –测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。 即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样 品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱 性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出 并为过量的酸液吸收，再以标准碱滴定， 就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含 氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含 量，故此法是经典的蛋白质定量方法
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优点①可用于所有食品的蛋白质分析中；②操作相对比较简单；③实验费用较低；④结果准确，是一种测定蛋白质的经典方法；缺点①最终测定的是总有机氮，而不只是蛋白质氮；②实验时间太长（至少需要2h才能完成）；③精度差，精度低于双缩脲法；④所用试剂有腐蚀性
优点 ①可用于所有食品的蛋白质分析中； ②操作相对比较简单； ③实验费用较低； ④结果准确，是一种测定蛋白质的经典方法； 缺点 ①最终测定的是总有机氮，而不只是蛋白质氮； ②实验时间太长(至少需要2h才能完成)； ③精度差，精度低于双缩脲法； ④所用试剂有腐蚀性
NH2NNNNHH2N2分子式：C3N3(NH2)3含N量：66.7%
分子式：C3N3(NH2)3 含N量：66.7%
Tryptophan5Boueose32TyrpsinePhenylalanine230240250260270280290300310Wavelength (nm)
实验目的掌握双缩脲法测定蛋白质的原理掌握分光光度计的使用口掌握标准曲线的制作学习分光光度法测定的原理和方法
掌握双缩脲法测定蛋白质的原理 掌握分光光度计的使用 掌握标准曲线的制作 学习分光光度法测定的原理和方法 实验目的
实验原理口双缩脲反应(Biuretreaction)两分子尿素加热脱氨缩合成的双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2），因分子内含有两个邻接的酰胺键，在碱性溶液中可与Cu2+发生双缩脲反应，生成紫红色络合物NH2工NH2Cu2+135~~190℃TH+HIHOHNH2NH2NH2NH tH2NNH2尿素紫红色络合物双缩脲[A]
实验原理 双缩脲反应（Biuret reaction） 两分子尿素加热脱氨缩合成的双缩脲（H2NOC-NH-CO-NH2），因分子内含有两个邻接 的酰胺键，在碱性溶液中可与Cu2+发生双缩脲 反应，生成紫红色络合物