肝糖原的提取及鉴定
肝糖原的提取及鉴定
实验目的了解肝糖原的性质并掌握其提取方法熟悉肝糖原的鉴定方法
实验目的 ⚫ 了解肝糖原的性质并掌握其提取方法。 ⚫ 熟悉肝糖原的鉴定方法
实验原理（一）肝糖原的提取糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎。加入三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中。糖原不溶于乙醇，故用乙醇可将糖原沉淀
实验原理 （一）肝糖原的提取 糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细 胞破碎。加入三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中 的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中。 糖原不溶于乙醇，故用乙醇可将糖原沉淀
（二）肝糖原的鉴定CHOHCH,OH-1.6-趣百放大CHOH糖原的基本结构糖原与碘作用呈红色。糖原水解产物与本尼迪克特试剂在沸水浴下生成砖红色沉淀
（二）肝糖原的鉴定 糖原的基本结构 糖原与碘作用呈红色。 糖原水解产物与本尼迪克特试剂在沸水浴下生成砖红色沉 淀
操作步骤（一）肝糖原的提取1.取新鲜动物肝脏（一只动物肝分为4份）至研钵中加入3mL10%的三氯醋酸溶液，充分研磨至糜状（戴手套操作），再加入3mL10%的三氯醋酸和3mL蒸馏水继续研磨片刻，使成均匀糜浆（均分为3组）。2.取3ml转入离心管中，2000r/min离心5min。3.取上清液于另一离心管中，加入等体积的95%乙醇混匀后静置片刻，使糖原呈絮状析出，再2500r/min离心10min。弃去上清液，将离心管倒置于滤纸上
（一）肝糖原的提取 1.取新鲜动物肝脏(一只动物肝分为4份）至研钵中 ，加入3mL10%的三氯醋酸溶液，充分研磨至糜状（戴 手套操作），再加入3mL10%的三氯醋酸和3mL蒸馏水 继续研磨片刻，使成均匀糜浆（均分为3组）。 2.取3ml转入离心管中，2000r/min 离心5min。 3.取上清液于另一离心管中，加入等体积的95%乙醇 ，混匀后静置片刻，使糖原呈絮状析出，再 2500r/min 离心10min。弃去上清液，将离心管倒置 于滤纸上。 操作步骤
（二）肝糖原鉴定肝糖原沉淀中加入1mL蒸馏水，用细玻棒搅拌至溶解得糖原溶液。1.取小试管2支，一支加入糖原溶液500μl，另一支加入蒸馏水500μl，然后两管再各加入碘液2滴，混匀。观察管中颜色变化，并解释现象。2.在剩余糖原溶液内加浓盐酸3滴，沸水浴中加热10min，取出冷却，加入20%的NaOH溶液1ml至碱性。加入班氏试剂1mL，再置沸水浴中加热2-3min取出。观察管中沉淀的生成，并解释现象
（二）肝糖原鉴定 肝糖原沉淀中加入1mL 蒸馏水，用细玻棒搅拌至溶解， 得糖原溶液。 1.取小试管2支，一支加入糖原溶液500μl，另一支加入蒸 馏水500μl，然后两管再各加入碘液2滴，混匀。观察管 中颜色变化，并解释现象。 2.在剩余糖原溶液内加浓盐酸3滴，沸水浴中加热10min， 取出冷却，加入20%的NaOH 溶液1ml至碱性。加入班氏 试剂1mL，再置沸水浴中加热2-3min取出。观察管中沉 淀的生成，并解释现象
注意事项新鲜肝脏须迅速以三氯醋酸处理。肝脏研磨应充分。离心时，离心管平衡后对称放入离心机
⚫ 新鲜肝脏须迅速以三氯醋酸处理。 ⚫ 肝脏研磨应充分。 ⚫ 离心时，离心管平衡后对称放入离心机。 注意事项
离心机的使用1、离心管必须先平衡后对称放入离心机避免液体酒在离心机上；记住位置编号；开机后逐2、开机前，检查有无空套管；如有异常，立即切断电源，排除级加速；#故障；3、停机后，旋钮还原。应让离心机自然停转：严禁未停转或开机运转时打开机盖
离心机的使用 1、离心管必须先平衡后对称放入离心机； 避免液体洒在离心机上；记住位置编号； 2、开机前，检查有无空套管；开机后逐 级加速；如有异常，立即切断电源，排除 故障； 3、停机后，旋钮还原。应让离心机自然 停转；严禁未停转或开机运转时打开机盖