实验五血清总补体活性检测(CH50
实验五 血清总补体活性 检测 (CH50 )
溶血反应SRBC?免抗SRBC抗体溶血素新鲜血清提供补体启动经典激活途径溶血
溶血反应 SRBC + 兔抗SRBC抗体 (溶血素) 新鲜血清 (提供补体） 溶血 + 启动经典激活途径
CH50实验原理绵羊红细胞 (Ag)与溶血素(Ab),在补体（新鲜血清的作用下，绵羊红细胞可被溶解，出现溶血现象。溶血程度与血清中补体量正相关，呈一S形曲线。在50%溶血附近，稍微改变补体量，溶血程度变化明显（溶血程度与补体量之间呈明显线性关系），因此以50%溶血率来判定终点较100%更为敏感，所以该试验称为50%溶血试验-CH50
CH50实验原理 ⚫ 绵羊红细胞（Ag)与溶血素(Ab)，在补体（新鲜血清） 的作用下，绵羊红细胞可被溶解，出现溶血现象。 ⚫ 溶血程度与血清中补体量正相关，呈一S形曲线。 ⚫ 在50%溶血附近，稍微改变补体量，溶血程度变化明 显（溶血程度与补体量之间呈明显线性关系），因此 以50％溶血率来判定终点较100％更为敏感，所以该 试验称为50％溶血试验-CH50
100%溶血70%溶面50%血30%溶血补体（面1）0.001ml0.002mlCH50实验原理示意图
CH50实验原理示意图
CH50实验临床意义CH50实验是反映补体经典途径的溶血活性，检测的主要是C1一C9所有组分的综合水平。临床多用于诊断和分析补体系统缺失病、某些自身免疫病、超敏反应性疾病和传染性疾病等
⚫ CH50实验是反映补体经典途径的溶血活性， 检测的主要是C1-C9所有组分的综合水平。 ⚫ 临床多用于诊断和分析补体系统缺失病、某 些自身免疫病、超敏反应性疾病和传染性疾 病等。 CH50实验临床意义
CH50实验方法1.制备1:20待测血清抽静脉血3ml凝固一500-1000rpm×5min，离心一→分出血清，用BB液进行1：20稀释2.制备2%SRBC取抗凝保存羊血（SRBC）用5-10倍NS洗涤2次，第一次2000rpm×5min，最后一次2500rpm×10min一→按压积用B.B液配成2%悬液：取2ml压积（沉淀）+98mlB.B液配成2%SRBC悬液，并进行验证：2%SRBC悬液0.2ml+BB液5ml混匀后倒入0.5cm比色杯542nm比色，调T为38%~42%
CH50实验方法 ⚫ 1. 制备1:20待测血清 抽静脉血3ml凝固→ 500-1000rpm×5min,离心 →分出血清，用BB液进行1：20稀释 ⚫ 2.制备2％SRBC 取抗凝保存羊血（SRBC）用5-10倍NS洗涤2次， 第一次2000rpm×5min,最后一次 2500rpm×10min→ 按压积用B.B液配成2%悬液： 取2ml压积(沉淀）+98mlB.B液 配成2%SRBC悬 液，并进行验证： 2%SRBC悬液0.2ml+BB液5ml,混匀后倒入0.5cm 比色杯542nm比色，调T为38%~42%
CH50实验方法3.制备50%溶血标准管取调整好的2%SRBC悬液2ml+DW(双蒸水）8ml配成100%全溶管，然后取全溶管上清2.5ml+B.B液2.5ml，即为50%溶血标准管4.CH50测定按下表加各试剂一摇勺一37C水浴30min一离心一与50%溶血标准管进行目视及比色比较一计算出每ml血清中总补体活性（u)
CH50实验方法 ⚫ 3. 制备50%溶血标准管 取调整好的2％SRBC悬液 2ml+ DW(双蒸水） 8ml配成100%全溶管，然后取全溶管上清2.5ml + B.B液2.5ml，即为50%溶血标准管 ⚫ ⒋ CH50测定 按下表加各试剂→摇匀→37℃水浴30min→离心→ 与50%溶血标准管进行目视及比色比较→计算出 每ml血清中总补体活性（u)
血清总补体溶血活性测定管号B.B液1：20稀释血清溶血素CH502%SRBC(ml)(ml)(ml)(U/ml)(ml)10.50.52000.101.4021.350.50.51330.1530.50.51000.201.304801.250.50.50.2551.200.50.50.3066.660.351.150.50.557.17500.50.50.401.1080.50.50.451.0544.490.50.5400.501.00101.500.50.5---2.5ml体系
管号 1：20稀释血清 （ml） B.B液 （ml） 溶血素 （ml） 2%SRBC （ml） CH50 （U/ml） 1 0.10 1.40 0.5 0.5 200 2 0.15 1.35 0.5 0.5 133 3 0.20 1.30 0.5 0.5 100 4 0.25 1.25 0.5 0.5 80 5 0.30 1.20 0.5 0.5 66.6 6 0.35 1.15 0.5 0.5 57.1 7 0.40 1.10 0.5 0.5 50 8 0.45 1.05 0.5 0.5 44.4 9 0.50 1.00 0.5 0.5 40 10 - 1.50 0.5 0.5 - 血清总补体溶血活性测定 2.5ml体系
结果判断取各管离心后与50%溶血标准管做目视比较观察溶血程度。选择与标准管最接近一管的稀释血清量按下列公式计算CH50活性。1血清总补体活性三血清量×血清烯释倍数正常值为50-100U/ml
结果判断 ⚫ 取各管离心后与50%溶血标准管做目视比较，观察 溶血程度。选择与标准管最接近一管的稀释血清量， 按下列公式计算CH50活性。 1 ⚫ 血清总补体活性＝血清量×血清稀释倍数 ⚫ 正常值为50-100 U/ml
操作注意事项待检血清标本必须新鲜，如室温放置2h以上，会使补体活性下降。待检血清标本应无溶血、无乳糜、无污染。缓冲液、致敏SRBC均应新鲜配制。缓冲液若被细菌污染，会导致自发溶血。实验所用玻璃器血。一定要清洁，酸碱均能影响测定的准确性。控制好温育时间
⚫ 待检血清标本必须新鲜，如室温放置2h以上，会 使补体活性下降。 ⚫ 待检血清标本应无溶血、无乳糜、无污染。 ⚫ 缓冲液、致敏SRBC均应新鲜配制，缓冲液若被细 菌污染，会导致自发溶血。 ⚫ 实验所用玻璃器皿，一定要清洁，酸碱均能影响 测定的准确性。 ⚫ 控制好温育时间。 操作注意事项