影响琥珀酸脱氢酶酶促反应的因素
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实验目的√掌握影响酶作用的因素。√熟悉琥珀酸脱氢酶催化琥珀酸脱氢
实验目的 ✓掌握影响酶作用的因素。 ✓熟悉琥珀酸脱氢酶催化琥珀酸脱氢 2
实验原理√酶是生物催化剂，是活细胞产生的具有高特异性和高效性的蛋白质，几乎参与所有的生命活动过程。酶的活性受到多种因素的影响。V这些因素主要包括√酶浓度、√环境温度、√环境pH、√抑制剂V激活剂、√底物浓度等
实验原理 ✓酶是生物催化剂，是活细胞产生的具有高特异性和高 效性的蛋白质，几乎参与所有的生命活动过程。酶的 活性受到多种因素的影响。 ✓这些因素主要包括 ✓酶浓度、 ✓环境温度、 ✓环境pH、 ✓抑制剂 ✓激活剂、 ✓底物浓度等。 3
酶浓度对酶活性的影响V在酶促反应系统中，当底物浓度远远超过酶浓度时，酶促反应速度与酶浓度成正比关系。酶促反应速度随着酶浓度的增加而0酶浓度[E]加快，随着酶浓度的降低而减慢
✓在酶促反应系统中， 当底物浓度远远超过 酶浓度时，酶促反应 速度与酶浓度成正比 关系。酶促反应速度 随着酶浓度的增加而 加快，随着酶浓度的 降低而减慢。 酶浓度对酶活性的影响 酶浓度[E] 反应速度V 0 4
温度对酶活性的影响7从0℃C回到40℃C，可以恢复酶活性而从100℃到40℃，不能恢复酶活√低温时酶反应速度缓慢。当温性。度逐渐升高时，与一般化学催化剂一样，酶促反应速度随温度升高而加快。√低温时酶活性虽然很低，但酶很稳定，不容易发生变性。温度回升后，酶可以恢复活性。0反应温度T√达到某一温度时，酶促反应速度最大，酶活性最高，此温度称为酶的最适温度（optimumtemperature）√高于此温度，温度升高加速酶蛋白的变性，酶促反应速度随温度上升而减慢。S
0 反应温度T 反应速度V ✓低温时酶反应速度缓慢。当温 度逐渐升高时，与一般化学催 化剂一样，酶促反应速度随温 度升高而加快。 ✓低温时酶活性虽然很低，但酶 很稳定，不容易发生变性。温 度回升后，酶可以恢复活性。 温度对酶活性的影响 ✓达到某一温度时，酶促反应速度最大，酶活性最高，此温 度称为酶的最适温度（optimum temperature） ✓高于此温度，温度升高加速酶蛋白的变性，酶促反应速度 随温度上升而减慢。 ✓ 从0℃回到40℃，可以恢复酶活性， 而从100℃到40℃，不能恢复酶活 性。 5
pH对酶活性的影响V酶反应体系的pH可以影响酶分子的构象和稳定性，特别是影响酶分子活性中心上必需基团的解离，也影响底物和辅酶的解离状态，从而影响酶与底物的结合，影响酶活性。0反应体系pH√过酸或过碱容易使酶蛋白变性失活
0 反应体系pH 反应速度V ✓酶反应体系的pH可以影 响酶分子的构象和稳定 性，特别是影响酶分子 活性中心上必需基团的 解离 ，也影响底物和辅 酶的解离状态 ，从而影 响酶与底物的结合 ， 影 响酶活性 。 ✓过酸或过碱容易使酶蛋 白变性失活 。 pH对酶活性的影响 6
抑制剂对酶活性的影响凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白构象发生非常显著变化的化学物质称为酶的抑制剂(inhibitor)V根据抑制剂与酶结合的紧密程度和相互作用的化学本质，酶的抑制作用分为不可逆性抑制(irreversibleinhibition）和可逆性抑制(reversibleinhibition)两类。/重金属离子、有机磷化合物等是蛋白酶的抑制剂。重金属离子Hg2+是琥珀酸脱氢酶的抑制剂
✓凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白构象发 生 非常 显著变 化的化 学物 质称为 酶的抑 制剂 (inhibitor) ✓根据抑制剂与酶结合的紧密程度和相互作用的化 学本质 ， 酶的抑制作用分为 不 可 逆 性 抑 制 (irreversible inhibition) 和可逆性抑制 (reversible inhibition)两类。 ✓重金属离子、有机磷化合物等是蛋白酶的抑制剂。 重金属离子Hg2+是琥珀酸脱氢酶的抑制剂。 抑制剂对酶活性的影响 7
实验原理FADHOOCCH2—CH2COOHBH2甲烯白（无色）琥珀酸琥珀酸脱氢酶HOOCCHCH-COOHFADH爬甲烯蓝（蓝色）延胡索酸√琥珀酸脱氢酶是机体内参与三羧酸循环的一种重要脱氢酶，其辅基为FAD。琥珀酸脱氢酶催化琥珀酸脱氢，转变成延胡索酸，FAD接受脱下的2H生成FADH2°√本实验以甲烯蓝为受氢体，在无氧条件下（因为生成的甲烯白容易再被空气中的氧重新氧化为甲烯蓝），甲烯蓝接受琥珀酸脱下的氢由蓝色还原成无色的甲烯白（MBH,），以甲烯蓝褪色时间来判断琥珀酸脱氢酶活性的改变。酶活性高，则甲烯蓝褪色时间较短：酶活性降低，则甲烯蓝褪色时间延长。B
实验原理 ✓琥珀酸脱氢酶是机体内参与三羧酸循环的一种重要脱氢酶，其 辅基为FAD。琥珀酸脱氢酶催化琥珀酸脱氢，转变成延胡索酸， FAD接受脱下的2H生成FADH2。 ✓本实验以甲烯蓝为受氢体，在无氧条件下（因为生成的甲烯白 容易再被空气中的氧重新氧化为甲烯蓝），甲烯蓝接受琥珀酸 脱下的氢由蓝色还原成无色的甲烯白（MBH2），以甲烯蓝褪色 时间来判断琥珀酸脱氢酶活性的改变。酶活性高，则甲烯蓝褪 色时间较短；酶活性降低，则甲烯蓝褪色时间延长。 琥珀酸 8 延胡索酸
实验步骤√酶液的准备√猪肝30~50g，剪碎后加入500ml蒸馏水匀浆
实验步骤 ✓ 酶液的准备 9 ✓ 猪肝30~50g，剪碎后加入500ml蒸馏水 匀浆
实验步骤√1.酶浓度对酶活性的影响试管编号试剂(ml)1235640.20.40.60.8酶液1.0一1.00.80. 60. 40.2蒸馏水一pH8.0巴比妥钠一盐酸缓1. 01.01. 01.01.01.0冲液0.20. 20.20.20. 2甲烯蓝0.21.01. 01.01.01.01.00.2M琥珀酸1.01.01.01.01.01.0混匀后加液体石蜡37℃水浴保温褪色时间10
实验步骤 ✓ 1．酶浓度对酶活性的影响 10 试剂（ml） 试管编号 1 2 3 4 5 6 酶液 - 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 - pH8.0巴比妥钠-盐酸缓 冲液 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 甲烯蓝 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2M琥珀酸 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 混匀后加液体石蜡 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 37℃水浴保温 褪色时间