实验一间接免疫荧光法检测血清中抗核抗体
实验一 间接免疫荧光法 检测血清中抗核抗体
间接免疫荧光技术原理免疫荧光技术是免疫标记技术中发展最早的技术本实验是利用荧光标记第一抗体（羊抗人IgG）检测未知抗体（一抗）的方法。以检测人血清中抗核抗体（ANA）为例。病人血清中ANA（Ab）能与各种系细胞核成分（Ag）特异性结合，此种结合的Ab（IgG型）能与荧光标记的羊抗人IgG（二抗）结合福在荧光显微镜下，细胞核显示荧光，提示血清中ANA的存在
本实验是利用荧光标记第二抗体（羊抗人IgG） 检测未知抗体（一抗）的方法。以检测人血清 中抗核抗体（ANA）为例。 病人血清中ANA（Ab）能与各种系细胞核成 分（Ag）特异性结合，此种结合的Ab（IgG 型）能与荧光标记的羊抗人IgG（二抗）结合， 在荧光显微镜下，细胞核显示荧光，提示血清 中ANA的存在。 间接免疫荧光技术原理 免疫荧光技术是免疫标记技术中发展最早的技术
荧光1标记抗原1个抗体抗体光原间接免疫荧光法原理示意图
间接免疫荧光法原理示意图 抗原 抗体 标记 抗体 光原 荧光
免疫荧光检测制备的总体方法标本制作荧光抗体染色荧光显微镜检查
免疫荧光检测制备的总体方法 标本制作 荧光抗体染色 荧光显微镜检查
标本的制作标本类型组织切片：冷冻切片、石蜡切片（最常用）印片：肝、脾等细胞涂片：各种体液、穿刺液、细菌培养物和细胞悬液等
组织切片：冷冻切片、石蜡切片（最常用） 印片：肝、脾等细胞 涂片：各种体液、穿刺液、细菌培养物和细胞悬 液等 标本类型 标本的制作
荧光抗体染色间接法显示荧光激发光持异性抗体与相应荧光素标记抗体抗原反应，荧光素抗原的抗抗体X记的抗抗体再与第一抗体结合。间接荧光抗体染色法示意图
间接法 特异性抗体与相应 抗原反应，荧光素 标记的抗抗体再与 第一抗体结合。 间接荧光抗体染色法示意图 荧光抗体染色
实验总体步骤待测血清小鼠肝细胞印片(ANA?)荧光标记的37C30洗涤羊抗人IgG37C30荧光显微镜检测洗涤
实验总体步骤 小鼠肝细胞 印片 待测血清 （ANA?） 荧光标记的 羊抗人IgG 37℃30′ 荧光显微镜检测 洗涤 37℃30′ 洗涤
实验步骤1.小鼠断颈处死取肝，PBS或NS漂洗，剪取肝横断面印片于玻片上，左右各一处，自然干燥：滴加无水乙醇固定室温凉干；2.左右印片处分别盖上一片小纸片，分别滴加阳性血清和阴性血清各1滴，37℃30；3.去除纸片，PBS冲洗10S×3次，吸干水分：4.左右印片处分别盖上一片小纸片，并滴加荧光标记羊抗人IgG（二抗）各1滴，37℃30；5.去除纸片，PBS漂洗10S×3次，吸干水分6.荧光显微镜镜检
1.小鼠断颈处死取肝， PBS或NS漂洗，剪取肝横断面印 片于玻片上，左右各一处，自然干燥；滴加无水乙醇固定， 室温凉干； 2.左右印片处分别盖上一片小纸片，分别滴加阳性血清和 阴性血清各1滴，37℃30′； 3.去除纸片，PBS冲洗10S×3次，吸干水分； 4.左右印片处分别盖上一片小纸片，并滴加荧光标记羊抗 人IgG（二抗）各1滴，37℃30′； 5.去除纸片，PBS漂洗10S×3次，吸干水分； 6.荧光显微镜镜检。 实验步骤
结果判断阳性：明亮、清晰、圆点状荧光、大小不一均在肝细胞上阴性：模糊、黯淡、片状或块状荧光，无细胞形，为非特异性干扰荧光。周边型、阳性结果可分为均质型斑点型（颗粒型）、核仁型，其中以均质型/颗粒型多见
阳性： 明亮、清晰、圆点状荧光、大小不一。 均在肝细胞上。 阴性：模糊、黯淡、片状或块状荧光，无细胞 形，为非特异性干扰荧光。 阳性结果可分为均质型、周边型、斑点型(颗粒 型）、核仁型，其中以均质型/颗粒型多见。 结果判断
荧光抗体技术的应用①自身抗体检测抗核抗体（核膜型）抗核抗体（斑点型）抗核抗体（均质型）
①自身抗体检测 抗核抗体(均质型) 抗核抗体(斑点型) 抗核抗体(核膜型) 荧光抗体技术的应用