实验二、实验三ELISA试剂配制、包被ELISA间接法检测抗结核抗体
实验二、实验三 ELISA试剂配制、包被 ELISA间接法检测抗结核抗体
免疫标记技术定义：将抗原-抗体反应与标记技术相结合，用放射性同位素、酒酶或荧光素标记的已知抗体或抗原，通过检测标记物，间接测定未知的抗原或抗体。分类：放射免疫测定法：1311，32P免疫荧光技术：FITC，PE免疫酶测定法：HRP，AP
免疫标记技术 定义： 将抗原-抗体反应与标记技术相结合，用放射 性同位素、酶或荧光素标记的已知抗体或抗原，通 过检测标记物，间接测定未知的抗原或抗体。 分类： ✓ 放射免疫测定法：131I， 32P ✓ 免疫荧光技术：FITC，PE ✓ 免疫酶测定法：HRP，AP
免疫标记技术用标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应借以提高免疫学诊断的敏感性荧光素：异硫氰酸荧光素（黄放射性同酶：辣根过氧化物酶绿色荧光）、藻红蛋白、罗丹性磷酸酶125I、131I明（红色荧光）HRPRadioimmunoassayEnzyme-linkedImmnuofluorescence(RIA)immunosorbentand cytofluorimetryassay (ELISA)免疫荧光检测法(IFA)(EIA)(RIA)酶免疫检测法放射免疫检测法液相（ELISA）、固相（免疫组化技术）
用标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应借以提高免 疫学诊断的敏感性 荧光素：异硫氰酸荧光素（黄 绿色荧光）、藻红蛋白、罗丹 明（红色荧光） 放射性同位素： 125I、 131I 酶：辣根过氧化物酶、 硷性磷酸酶 放射免疫检测法（RIA） 酶免疫检测法（EIA） 免疫荧光检测法（IFA） 免疫标记技术 液相（ELISA）、固相（免疫组化技术）
酶免疫测定法(EnzymeImmunoAssay, EIA)·用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。-辣根过氧化物酶（HRP），碱性磷酸酶（AP)·特点：高度特异性：保持抗原抗体反应的特异性高灵敏度：酶催化底物显色的高效性，可定性定量检测：反应液颜色深浅或光密度值·分类：酶联免疫吸附试验：用于检测可溶性抗原或抗体酶免疫组化法：用于检测组织中或细胞表面的抗原
酶免疫测定法 (Enzyme ImmunoAssay,EIA) • 用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。 – 辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶(AP) • 特点： ✓ 高度特异性：保持抗原抗体反应的特异性 ✓ 高灵敏度：酶催化底物显色的高效性，可定性定量检测：反 应液颜色深浅或光密度值 • 分类： ✓ 酶联免疫吸附试验：用于检测可溶性抗原或抗体 ✓ 酶免疫组化法： 用于检测组织中或细胞表面的抗原
酶联免疫吸附试验(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)1.定义用酶标记抗原或抗体检测液体（血液、细胞液）中未知抗体或抗原的方法。2.分类直接法（directELISA）间接法（IndirectELISA）将已知抗原吸附于固相载体，酶标记二抗检测液相中未知抗体双抗体夹心法（SandwichELISA）竞争法（CompetitiveELISA）：
酶联免疫吸附试验 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA) 用酶标记抗原或抗体检测液体（血液、细胞液） 中未知抗体或抗原的方法。 1.定义 2.分类 ➢ 直接法（ direct ELISA）： ➢ 间接法（Indirect ELISA）： • 将已知抗原吸附于固相载体，酶标记二抗 • 检测液相中未知抗体 ➢ 双抗体夹心法（Sandwich ELISA)： ➢ 竞争法（Competitive ELISA) ：
ELISA间接法--主要用于检测抗体将特异性抗原与固相载体相连，加入合适的抗体（待测标本），使之与抗原结合。结合的抗体再用酶标抗人IgG（二抗）进行检测，最后通过显色情况来判断标本中有无抗体及量的多少，从而进行定性及定量检测
将特异性抗原与固相载体相连，加入合适 的抗体（待测标本），使之与抗原结合。结合 的抗体再用酶标抗人IgG（二抗）进行检测， 最后通过显色情况来判断标本中有无抗体及量 的多少，从而进行定性及定量检测。 ELISA间接法-主要用于检测抗体
间接ELISA(a)IndirectELISAwashwashwashAddspecificAddenzymeAddsubstrate(S)Antigencoated wellantibodytobeconjugatedandmeasurecolormeasuredsecondaryantibody
间接ELISA
原理（以间接ELISA为例）待测抗体抗原洗涤洗涤F人人人人人底物酶标二抗+substrate洗涤显色这一文→久
原理（以间接ELISA为例）： 显色
1、已知抗原吸1、已知抗体吸附于载体表面附于载体表面2、加待检物2、加待检物无抗体与抗原结合有抗体与抗原结合洗涤洗涤3、加酶标的抗Ig3、加酶标抗IgG抗体与抗体结合洗涤洗涤4、加酶作用的底物4、加酶作用的底物众人人不产生颜色产生颜色间接法测抗体
间接法测抗体 - E E E E E E E E E +
实验步骤：包被Ag→洗涤封闭加待测血清Ab洗涤洗涤加酶标抗抗体1→终止显色I酶标仪测OD值(在492 nm波长下)
实验步骤： 显色 包被Ag 洗涤 封闭 加待测血清 Ab 洗涤 加酶标抗抗体 洗涤 终止 酶标仪测OD值 (在492 nm 波长下)