酶的竞争性抑制作用一丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用
酶的竞争性抑制作用 ——丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用
【实验目的】1掌握酶竞争性抑制作用的特点。2.验证丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用
【实验目的】 1．掌握酶竞争性抑制作用的特点。 2．验证丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用
底物K1KpK2中间复合物（ES)产物(p)游离酶（E）
發S-E+PEESVEI
（实验原理）某些物质的化学结构与酶作用的底物结构相似可与底物竞争结合酶的活性中心。当其占据了酶的活性中心以后，底物就不能与酶的活性中心结合，从而阻碍酶-底物复合物的形成，使酶的活性降低甚至丧失
【实验原理】 某些物质的化学结构与酶作用的底物结构相似， 可与底物竞争结合酶的活性中心。当其占据了酶 的活性中心以后，底物就不能与酶的活性中心结 合，从而阻碍酶-底物复合物的形成，使酶的活 性降低甚至丧失
琥珀酸脱氢酶是机体内参与三羧酸循环的一种重要脱氢酶，其辅基为FAD。在体外实验中，利用甲烯蓝作为受氢体，反应生成的FADH2可以将蓝色的甲烯蓝（氧化型）还原为无色的甲烯白（还原型）。丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂
琥珀酸脱氢酶是机体内参与三羧酸循环的一种 重要脱氢酶，其辅基为FAD。在体外实验中， 利用甲烯蓝作为受氢体，反应生成的FADH2可 以将蓝色的甲烯蓝（氧化型）还原为无色的甲 烯白（还原型）。 丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂
CHCOOH琥珀酸FADMBH甲烯白（无色）CH一COOH琥珀酸脱氢酶CHCOOHFADH,B甲烯蓝（蓝色）=延胡索酸HOOCCH琥珀酸脱氢酶活性检测原理
琥珀酸脱氢酶活性检测原理 琥珀酸 延胡索酸
本实验以甲烯蓝为受氢体，在无氧条件下（因为生成的甲烯白容易再被空气中的氧重新氧化为甲烯蓝），以甲烯蓝褪色时间来判断琥珀酸脱氢酶活性的改变。酶活性高，则甲烯蓝褪色时间较短；酶活性降低，则甲烯蓝褪色时间延长。以此观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用
本实验以甲烯蓝为受氢体，在无氧条件下（因为生 成的甲烯白容易再被空气中的氧重新氧化为甲烯 蓝），以甲烯蓝褪色时间来判断琥珀酸脱氢酶活性 的改变。酶活性高，则甲烯蓝褪色时间较短；酶活 性降低，则甲烯蓝褪色时间延长。以此观察丙二酸 对琥珀酸脱氢酶的抑制作用
制备琥珀酸脱氢酶提取液肝匀浆猪肝+生理盐水匀浆器生理盐水：1/15mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）/ml
制备琥珀酸脱氢酶提取液 猪肝 + 生理盐水 肝匀浆 匀浆器 生理盐水： 1/15 mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）/ml
试管编号试剂5234622#酶提取液/ml22的竞争性抑制作用21/15mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）/ml888880.2mol/L琥珀酸溶液/滴0.02mol/L琥珀酸溶液/滴80.2mol/L丙二酸溶液/滴0.02mol/L丙二酸溶液/滴8蒸馏水/滴883333甲烯蓝/滴33各管溶液立即混匀，沿管壁加入液体石蜡8-10滴，使其在反应液面上形成一薄层以达到隔绝空气的作用。各管置于37℃水浴中保温，切勿摇动试管。随时观察比较各管颜色的变化情况，记录褪色所需时间。#6号试管中，酶提取液先在100C水浴加热煮沸5min
试剂 试管编号 1 2 3 4 5 6 酶提取液/ml 2 2 2 2 — 2 # 1/15 mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）/ml — — — — 2 — 0.2 mol/L琥珀酸溶液/滴 8 8 8 — 8 8 0.02 mol/L琥珀酸溶液/滴 — — — 8 — — 0.2 mol/L丙二酸溶液/滴 — — 8 8 — 0.02 mol/L丙二酸溶液/滴 — 8 — — — — 蒸馏水/滴 8 — — — 8 8 甲烯蓝/滴 3 3 3 3 3 3 各管溶液立即混匀，沿管壁加入液体石蜡8-10滴，使其在反应液面 上形成一薄层以达到隔绝空气的作用。 各管置于37℃水浴中保温，切勿摇动试管。随时观察比较各管颜色 的变化情况，记录褪色所需时间。 # 6号试管中，酶提取液先在100℃水浴加热煮沸5 min。 酶 的 竞 争 性 抑 制 作 用