《临床微生物学检验技术实验》（供四年制医学检验技术专业（技术研发方向）使用）教学大纲重庆医科大学基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室2021年10月1
1 《临床微生物学检验技术 实验》 （供四年制医学检验技术专业（技术研发方向）使用） 教 学 大 纲 重庆医科大学基础医学实验教学中心 病原生物学与免疫学实验室 2021 年 10 月
前言一、 基本信息课程名称：临床微生物检验技术实验学时学分：共56学时，3.5学分适用专业：四年制医学检验技术（技术研发方向）先修课程：临床微生物检验技术二、课程简介《临床微生物检验技术实验》是致力于从事临床微生物检验技术和相关研发的医学检验系专业学生的一门重要的专业实验课。近年来，随着全球公共卫生事件的不断发生，新的传染病的流行，微生物学检验受到极大重视。同时，随着分子生物学和免疫学的飞速发展，使得新的实验方法不断涌现，需要从事临床微生物技术研发的人员掌握更多的方法和具有创新性。通过《临床检验微生物学实验》模块二的学习，要求学生加深对实验原理的理解，建立生物安全的理念，无菌观念；掌握无菌操作基本技术，掌握常见微生物检验的基本技术；了解国家生物安全的相关政策和微生物学检验方法的进展，了解目前微生物检验中的先进仪器设备和方法。培养学生的动手能力、分析及解决实际问题的能力和创新的思维，为毕业后从事微生物学检验相关工作打下良好的基础。三、课程目标1.思想道德与职业素质目标通过本课程学习，培养学生尊重科学、实事求是、热爱医学事业、不惧艰苦、求知务实的探索精神和为医学健康服务的献身精神和良好的医学职业素养及高尚的思想品德。2.知识目标通过本课程的学习，使学生掌握原临床微生物的基本特点，熟悉生物安全规则，熟悉无菌操作技术，根据所学的临床微生物学实验知识应用于临床微生物检查工作。3.技能目标通过本课程的学习，掌握临床生物学实验特有的基本操作技术，最终达到培养学生理论联系实际、基础联系临床的思维能力，并具有自主学习能力，为后续的临床检验工作打下良好的基础。2
2 前言 一、 基本信息 课程名称：临床微生物检验技术实验 学时学分：共 56 学时，3.5 学分 适用专业：四年制医学检验技术（技术研发方向） 先修课程：临床微生物检验技术 二、课程简介 《临床微生物检验技术实验》是致力于从事临床微生物检验技术和相关研发的医 学检验系专业学生的一门重要的专业实验课。近年来，随着全球公共卫生事件的不 断发生，新的传染病的流行，微生物学检验受到极大重视。同时，随着分子生物学 和免疫学的飞速发展，使得新的实验方法不断涌现，需要从事临床微生物技术研发 的人员掌握更多的方法和具有创新性。 通过《临床检验微生物学实验》模块二的学习，要求学生加深对实验原理的理 解，建立生物安全的理念，无菌观念；掌握无菌操作基本技术，掌握常见微生物检 验的基本技术；了解国家生物安全的相关政策和微生物学检验方法的进展，了解目 前微生物检验中的先进仪器设备和方法。培养学生的动手能力、分析及解决实际问 题的能力和创新的思维，为毕业后从事微生物学检验相关工作打下良好的基础。 三、课程目标 1.思想道德与职业素质目标 通过本课程学习，培养学生尊重科学、实事求是、热爱医学事业、不惧艰苦、 求知务实的探索精神和为医学健康服务的献身精神和良好的医学职业素养及高尚 的思想品德。 2.知识目标 通过本课程的学习，使学生掌握原临床微生物的基本特点，熟悉生物安全规则， 熟悉无菌操作技术，根据所学的临床微生物学实验知识应用于临床微生物检查工作。 3.技能目标 通过本课程的学习，掌握临床生物学实验特有的基本操作技术，最终达到培养 学生理论联系实际、基础联系临床的思维能力，并具有自主学习能力，为后续的临 床检验工作打下良好的基础
四、教学要求根据课程教学大纲及目标，确保课程教学内容、教学过程（环节）、知识与能力目标的达成，同时，对学生自主学习能力进行培养。五、考核方式课程考试方式采用形成性评价方式，一般为平时成绩30%，期未成绩70%。平时成绩包括考勤、平时作业、课堂表现、操作考核、实验报告等。参与人（排名不分先后）：张光媛，邓西川，陈婷婷，刘佳执笔人（排名不分先后）：张光媛审定人：何永林教材、教辅用书与参考书目3:
3 四、教学要求 根据课程教学大纲及目标，确保课程教学内容、教学过程（环节）、知识与能 力目标的达成，同时，对学生自主学习能力进行培养。 五、考核方式 课程考试方式采用形成性评价方式，一般为平时成绩 30%，期末成绩 70%。平 时成绩包括考勤、平时作业、课堂表现、操作考核、实验报告等。 参与人（排名不分先后）： 张光媛，邓西川，陈婷婷，刘佳 执笔人（排名不分先后）：张光媛 审定人：何永林 教材、教辅用书与参考书目
一、教材选用教材为楼永良《临床微生物学检验技术实验指导》，人民卫生出版社，2015该教材是为本课程量身定制，完全符合本课程需要二、教辅用书及参考数目1.刘运德，楼永良，《临床微生物学检验技术》，人民卫生出版社，20152.陈东科，孙长贵.《实用临床微生物学检验与图谱》，人民卫生出版社，20113.周庭银，倪语星，胡继红，苏建荣，徐应春等.《临床微生物标准化操作》（ISO15189认可指导书）第三版，上海科技出版社，2015目录4
4 一、教材 选用教材为楼永良《临床微生物学检验技术实验指导》，人民卫生出版社，2015. 该教材是为本课程量身定制，完全符合本课程需要 二、教辅用书及参考数目 1.刘运德，楼永良.《临床微生物学检验技术》，人民卫生出版社，2015. 2.陈东科，孙长贵.《实用临床微生物学检验与图谱》,人民卫生出版社，2011. 3.周庭银，倪语星，胡继红，苏建荣，徐应春等《临床微生物标准化操作》（ . ISO15189 认可指导书）第三版，上海科技出版社，2015. 目 录
实验细菌基础培养基的制备实验二细菌培养的接种方法实验三细菌培养物的观察8实验四真菌的检验8实验五细菌的药敏试验*·9实验六病原性球菌的检验·10实验七分枝杆菌的检验·11实验八肠道杆菌的检验11实验九非发酵革兰阴性菌的检验12实验十尿液标本的细菌学检查·13实验十一血液标本的细菌学检查··14实验十二菌种的保存·15教学时数分配表（共56学时）5
5 实验一 细菌基础培养基的制备. 7 实验二 细菌培养的接种方法. 7 实验三 细菌培养物的观察. 8 实验四 真菌的检验. 8 实验五 细菌的药敏试验.9 实验六 病原性球菌的检验. 10 实验七 分枝杆菌的检验 .11 实验八 肠道杆菌的检验. 11 实验九 非发酵革兰阴性菌的检验. 12 实验十 尿液标本的细菌学检查.13 实验十一 血液标本的细菌学检查 .14 实验十二 菌种的保存. 15 教学时数分配表（共 56 学时）
实验序号实验学时实验题目实验类型3实验一基本方法细菌基础培养基的制备实验二3细菌的接种方法基本方法实验三2细菌培养物的观察基本方法实验四2真菌的检验验证型6实验五综合型细菌的药敏试验实验六6综合型病原性球菌的检验2实验七分枝杆菌的检验综合型8实验八综合型肠道杆菌的检验实验九非发酵革兰阴性菌的检验8综合型8综合型实验十尿液标本的细菌学检查6实验十一综合型血液标本的细菌学检查实验十一菌种的保存2综合型合计56实验一细菌基础培养基的制备6
6 实验序号 实验题目 实验学时 实验类型 实验一 细菌基础培养基的制备 3 基本方法 实验二 细菌的接种方法 3 基本方法 实验三 细菌培养物的观察 2 基本方法 实验四 真菌的检验 2 验证型 实验五 细菌的药敏试验 6 综合型 实验六 病原性球菌的检验 6 综合型 实验七 分枝杆菌的检验 2 综合型 实验八 肠道杆菌的检验 8 综合型 实验九 非发酵革兰阴性菌的检验 8 综合型 实验十 尿液标本的细菌学检查 8 综合型 实验十一 血液标本的细菌学检查 6 综合型 实验十一 菌种的保存 2 综合型 合 计 56 实验一 细菌基础培养基的制备
【实验类型】基本实验方法【目的要求】1.掌握细菌基础培养基制备所需器材的准备和灭菌：2.掌握细菌基础培养基制备的方法和技巧。【实验学时】3学时【实验内容】1.根据学生数量分组，在烧杯内融化培养基粉末，并加入适量琼脂分别制作：肉膏汤培养基、半固体培养基、琼脂斜面培养基、普通琼脂培养基（制备两瓶一瓶用于下次血平板制备，一瓶用于普通平板制备）。2.倾倒制备肉膏汤管、半固体管、琼脂斜面管。普通琼脂培养基倾倒盐水瓶。3.包装完毕，将各培养基在高压蒸汽灭菌器内消毒灭菌。备注：每组做一种培养基：每人需肉膏汤培养基、半固体培养基各1支（2m1），普通琼脂斜面1支（3ml），普通琼脂固体培养基20ml，用于后续实验。【实验分组】2-4人/组实验二细菌的接种方法【实验类型】基本实验方法【目的要求】掌握细菌在液体培养基、半固体培养基、琼脂斜面、普通琼脂平板上的接种方法。【实验学时】3学时【实验内容】1．录像：细菌的人工培养7
7 【实验类型】 基本实验方法 【目的要求】 1.掌握细菌基础培养基制备所需器材的准备和灭菌； 2.掌握细菌基础培养基制备的方法和技巧。 【实验学时】 3 学时 【实验内容】 1．根据学生数量分组，在烧杯内融化培养基粉末，并加入适量琼脂分别制 作：肉膏汤培养基、半固体培养基、琼脂斜面培养基、普通琼脂培养基（制备两瓶， 一瓶用于下次血平板制备，一瓶用于普通平板制备）。 2．倾倒制备肉膏汤管、半固体管、琼脂斜面管。普通琼脂培养基倾倒盐水 瓶。 3. 包装完毕，将各培养基在高压蒸汽灭菌器内消毒灭菌。 备注：每组做一种培养基；每人需肉膏汤培养基、半固体培养基各 1 支（2ml）， 普通琼脂斜面 1 支（3ml），普通琼脂固体培养基 20ml，用于后续实验。 【实验分组】 2-4 人/组 实验二 细菌的接种方法 【实验类型】 基本实验方法 【目的要求】 掌握细菌在液体培养基、半固体培养基、琼脂斜面、普通琼脂平板上的接 种方法。 【实验学时】 3 学时 【实验内容】 1．录像：细菌的人工培养
2.练习平板分区划线接种：空白琼脂练习3.制备普通琼脂平板（小组作），用自制的液体培养基、半固体培养基、琼脂斜面、普通琼脂平板分别接种大肠杆菌，枯草杆菌。4.将培养基放于37℃孵箱孵育18-24H。备注：每实验组接种一种菌。【实验分组】2-4人/组实验三细菌培养物的观察【实验类型】基本实验方法【目的要求】1.掌握细菌在各种培养基上/中的生长现象，细菌在琼脂平板上的菌落的特点；2.掌握革兰染色方法；3.掌握辅助判定细菌染色性的方法（拉丝实验）；【实验学时】2学时【实验内容】1.平板、斜面、液体、半固体等培养物的观察，记录。2.培养物的革兰染色镜检。3.拉丝实验：3%KOH与细菌混合同时接种环拉丝。【实验分组】2-4人/组实验四真菌检验【实验类型】经典验证型【目的要求】1.掌握真菌三种菌落形态；80
8 2.练习平板分区划线接种：空白琼脂练习 3．制备普通琼脂平板(小组作)，用自制的液体培养基、半固体培养基、琼 脂斜面、普通琼脂平板分别接种大肠杆菌，枯草杆菌。 4. 将培养基放于 37℃孵箱孵育 18-24H。 备注：每实验组接种一种菌。 【实验分组】 2-4 人/组 实验三 细菌培养物的观察 【实验类型】 基本实验方法 【目的要求】 1.掌握细菌在各种培养基上/中的生长现象，细菌在琼脂平板上的菌落的特点； 2.掌握革兰染色方法； 3.掌握辅助判定细菌染色性的方法(拉丝实验)； 【实验学时】 2 学时 【实验内容】 1.平板、斜面、液体、半固体等培养物的观察，记录。 2.培养物的革兰染色镜检。 3.拉丝实验：3%KOH 与细菌混合同时接种环拉丝。 【实验分组】 2-4 人/组 实验四 真菌检验 【实验类型】 经典验证型 【目的要求】 1.掌握真菌三种菌落形态；
2.掌握新生隐球菌、白假丝酵母菌的形态特征；3.掌握皮肤真菌的形态特征。【实验学时】3学时【实验内容】1.录像：真菌的检验2.三种真菌菌落形态观察（示教）3.新型隐球菌墨汁染色图片形态观察（示教）4.白假丝酵母菌形态观察（示教）5.霉菌涂片观察：直接压片法，高倍镜观察真菌孢子和菌丝。6.皮肤真菌的检察（小组作）。【实验分组】2-4人/组实验五细菌的药敏试验【实验类型】综合型实验【目的要求】1.掌握细菌药物敏感性试验K-B法和微孔板稀释法的操作方法和结果判断。2.熟悉细菌药物敏感性试验的方法和临床意义；熟悉麦氏比浊管的使用方法3.了解药敏试验的质量控制和新方法。【实验学时】3+3学时【实验内容】1.氏比浊法制备0.5麦氏浓度的金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌菌液。2.K-B法测定分别测定青霉素、庆大霉素、新诺明、环丙沙星四种抗生素对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的药物敏感性。3.微孔稀释法测定庆大霉素对大肠埃希菌的MIC。4.微孔稀释法测定青霉素对金葡菌的MIC。9
9 2.掌握新生隐球菌、白假丝酵母菌的形态特征； 3.掌握皮肤真菌的形态特征。 【实验学时】 3 学时 【实验内容】 1.录像：真菌的检验 2.三种真菌菌落形态观察（示教） 3.新型隐球菌墨汁染色图片形态观察（示教） 4.白假丝酵母菌形态观察（示教） 5.霉菌涂片观察：直接压片法，高倍镜观察真菌孢子和菌丝。 6.皮肤真菌的检察（小组作）。 【实验分组】 2-4 人/组 实验五 细菌的药敏试验 【实验类型】 综合型实验 【目的要求】 1.掌握细菌药物敏感性试验 K-B 法和微孔板稀释法的操作方法和结果判断。 2.熟悉细菌药物敏感性试验的方法和临床意义；熟悉麦氏比浊管的使用方法 3.了解药敏试验的质量控制和新方法。 【实验学时】 3+3 学时 【实验内容】 1.氏比浊法制备 0.5 麦氏浓度的金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌菌液。 2.K-B 法测定分别测定青霉素、庆大霉素、新诺明、环丙沙星四种抗生素对 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的药物敏感性。 3.微孔稀释法测定庆大霉素对大肠埃希菌的 MIC。 4.微孔稀释法测定青霉素对金葡菌的 MIC
5.讨论药敏实验的质量控制和新方法。【实验分组】2-4人/组实验六病原性球菌的检验【实验类型】综合型实验【目的要求】1.熟悉病原性球菌的分离鉴定程序及临床意义；2.掌握血琼脂平板的制备方法；3.掌握3种葡萄球菌、草绿色链球菌、化性链球菌、肺炎链球菌、淋球菌的形态特点和鉴定方法；4.熟悉鉴定细菌的动物实验。【实验学时】3+3学时【实验内容】第一次实验1.录像：病原性球菌2.制备血琼脂平板（小组作，每人一个血平板）3.空白琼脂练习分区划线。4.金葡、表葡、腐葡、草绿色链球菌、化脓性链球菌、肺炎链球菌血琼脂平板分区划线，培养。肺炎链球菌Optochin敏感试验5淋球菌形态特点观察（示教片）第二次试验1细菌菌落观察，记录。2.培养物涂片革兰染色显微镜观察细菌形态排列和染色性3.培养物生化试验：触酶试验（玻片法），凝固酶实验（玻片法），胆汁溶菌试验（平板法）4.葡萄球菌检验方法讨论。-
10 5.讨论药敏实验的质量控制和新方法。 【实验分组】 2-4 人/组 实验六 病原性球菌的检验 【实验类型】 综合型实验 【目的要求】 1.熟悉病原性球菌的分离鉴定程序及临床意义； 2.掌握血琼脂平板的制备方法； 3.掌握 3 种葡萄球菌、草绿色链球菌、化脓性链球菌、肺炎链球菌、淋球菌 的形态特点和鉴定方法； 4.熟悉鉴定细菌的动物实验。 【实验学时】 3+3 学时 【实验内容】 第一次实验 1.录像：病原性球菌 2.制备血琼脂平板（小组作,每人一个血平板） 3.空白琼脂练习分区划线。 4.金葡、表葡、腐葡、草绿色链球菌、化脓性链球菌、肺炎链球菌血琼脂平板 分区划线，培养。肺炎链球菌 Optochin 敏感试验 5 淋球菌形态特点观察（示教片） 第二次试验 1 细菌菌落观察，记录。 2.培养物涂片革兰染色显微镜观察细菌形态排列和染色性 3.培养物生化试验：触酶试验(玻片法)，凝固酶实验（玻片法)，胆汁溶菌试 验（平板法） 4.葡萄球菌检验方法讨论