生化分子生物学实验三酰甘油浓度的测定（乙酰丙酮显色法）
三酰甘油浓度的测定 （乙酰丙酮显色法） 生化分子生物学实验
实验目的掌握血清甘油三酯化学法测定的基本原理熟悉本法的操作过程与血清甘油三酯的参考范围
实 验 目 的 熟悉本法的操作过程与血清甘油三酯的参 考范围。 掌握血清甘油三酯化学法测定的基本原理
实验原理1CH2—O—CR1CH2OH0060-70℃3R-CH-O-C—R2+ KOH-C-O-K+HOCH皂化20min0CH2OHICH2—O—C—R3甘油甘油三酯钾皂氧化CH2OH0HIO4 2H-C-HHO-CHCH2OH甘油甲醛显色00H3C-CH3NH+H-CH+CH3--CH2--CH3H3CHCH3甲醛乙酰丙酮3,5-二乙酰-2,6二甲基吡啶（黄色）
甘油三酯 KOH 60-70℃ 20min 钾皂 甘油 + + HIO4 + NH4 + 甲醛 乙酰丙酮 3,5-二乙酰-2,6 二甲基吡啶 （黄色） 甘油 甲醛 皂化 氧化 显色 3 2 实 验 原 理
实验步骤试剂/管号空白管（B)标准管(S)测定管血清(T)血清0.20.2标准液蒸馏水0.20.2抽提抽提剂2.52.32.50.50.50.540mmol/LH,SO4边加边摇，用力振摇15秒，静置10min分层分别准确吸取上清液于另外3支试管中上清液0.30.30.3异丙醇1.01.01.0皂化皂化剂0.30.30.3充分混匀，556水浴保温5min氧化剂1.01.01.0氧化显色剂1.01.01.0显色充分混匀，56C水浴保温25min取出试管，流水/室温冷却，测420nm的吸光度以空白管调零
试剂/管号 空白管（B） 标准管(S) 测定管血清(T) 抽提 血清 - - 0.2 标准液 - 0.2 - 蒸馏水 0.2 0.2 - 抽提剂 2.5 2.3 2.5 40mmol/L H2SO4 0.5 0.5 0.5 边加边摇，用力振摇15秒，静置10min分层 分别准确吸取上清液于另外3支试管中 皂化 上清液 0.3 0.3 0.3 异丙醇 1.0 1.0 1.0 皂化剂 0.3 0.3 0.3 充分混匀，56℃水浴保温5min 氧化 显色 氧化剂 1.0 1.0 1.0 显色剂 1.0 1.0 1.0 充分混匀，56℃水浴保温25min 取出试管，流水/室温冷却，测420nm的吸光度 以空白管调零 实验步骤
实验结果A样品XC样品TG浓度(mg/ml)标准品A标准品mg/mlmmol/LX 1000国际单位摩尔质量g/mol(885)正常参考值为：0.1~1.5mg/ml0.11~1.69mmol/L
正常参考值为：0.1~1.5mg/ml 0.11~1.69mmol/L mmol/L 国际单位 mg/ml ————————— ×1000 摩尔质量g/mol (885) 实 验 结 果 ——— A样品 × C标准品 A标准品 样品TG浓度(mg/ml) =
方法评价本法测定范围较宽在0.28mmol/L-12.93mmol/L之间具有良好的线性关系回收率100.4%-117.3%.批内变异系数为2.49%.批间变异系数为2.18%能满足临床检验方法学的要求。过碘酸氧化甘油生成甲醛的反应是非特异的,血清中磷脂、葡萄糖、游离甘油等也会被非特异地氧化。本实验方法中采用了分溶抽提TG分配在正庚烷相中，而磷脂等则分配在异丙醇-水相中，提高了反应的特异性
本法测定范围较宽在0.28mmol/L-12.93 mmol/L之 100.4%-117.3%, 批内 变异系数为2.49%, 批间变异系数为2.18%, 能满足临床 检验方法学的要求。 过碘酸氧化甘油生成甲醛的反应是非特异的, 血清 中磷脂、葡萄糖、游离甘油等也会被非特异地氧化。 本实验方法中采用了分溶抽提TG分配在正庚烷相 中, 而磷脂等则分配在异丙醇-水相中, 提高了反应的特 异性。 方法评价
注意事项本实验操作步骤较多，在操作过程中注意试剂加入的体积和顺序抽提时摇匀静置，待完全分层后才能吸取上层液，吸取上层液时不能吸入下层液；反应结束后应尽快进行比色，故可用流水冷却反应产物，缩短冷却时间，提高检测准确性；实验完成后，试管和比色杯必须用皂粉洗干净，不能有油污，将水甩干，倒置晾干；
注 意 事 项 抽提时摇匀静置，待完全分层后才能吸取上层液， 吸取上层液时不能吸入下层液； 实验完成后，试管和比色杯必须用皂粉洗干净， 不能有油污，将水甩干，倒置晾干； 本实验操作步骤较多，在操作过程中注意试剂加入的 体积和顺序 反应结束后应尽快进行比色，故可用流水冷却反应 产物，缩短冷却时间，提高检测准确性；
临床应用血脂： I血甘油三酯、血胆固醇餐后甘油三酯会增高，检香时一定要空腹抽血饮酒可引起血清甘油三酯浓度急性、短暂性升高抽血前几天禁止饮酒正常人血清甘油三酯水平有随年龄增高的趋势血清甘油三酯水平升高多见于糖尿病、肾病综合征急性胰腺炎、原发性高甘油三酯血症及动脉粥样硬化等
血脂：血甘油三酯、血胆固醇 临 床 应 用 餐后甘油三酯会增高，检查时一定要空腹抽血 饮酒可引起血清甘油三酯浓度急性、短暂性升高， 抽血前几天禁止饮酒 正常人血清甘油三酯水平有随年龄增高的趋势 血清甘油三酯水平升高多见于糖尿病、肾病综合征、 急性胰腺炎、原发性高甘油三酯血症及动脉粥样硬 化等