第六章黄酮类化合物 课次 课题:第六章黄酮类化合物 第一节黄酮类化合物的结构、分类及生物活性 第二节黄酮类化合物的性质 教学目的: 1.说出黄酮类化合物的基本母核结构、分类、分布及生物活性。 2.简述黄酮类的基本性状 3.阐述不同黄酮类化合物的特殊结构对其性质的影响 、教学内容: 1.黄酮类的结构、分类,基本分布和主要生物活性 2.黄酮类化合物的性质。 、重点 1.黄酮类化合物的基本母核结构、分类、分布及生物活性 2.黄酮类的基本性状 四、难点: 1.不同黄酮类化合物的特殊结构对其性质的影响 五、教学内容分析及教法设计 六、教学过程: 1.组织教学:检查学生出勤,填写教学日志,随机应变,组织好课堂纪律。 2.课程引入: 3.展示目标 4.进行新课 第六章黄酮 黄酮类化合物广泛存在于自然界,是一类重要的天然有机化合物。其不同的颜色为天然 色素家族添加了更多的色彩。这类含有氧杂环的化合物多存在于高等植物及羊齿类植物中 苔类中含有的黄酮类化合物为数不多,而藻类、微生物、细菌中没有发现黄酮类化合物。黄 酮类化合物的存在形式既有与糖结合成苷的,也有游离体。 黄酮类化合物如此广泛分布于植物界中,而且生理活性多种多样,据不完全统计,其主 要生理活性表现在:①对心血管系统的作用。②抗肝脏毒作用。③抗炎作用。④雌性激素样 作用。⑤抗菌及抗病毒作用。③泻下作用。①解痉作用等。因而引起了国内外的广泛重视, 研究进展很快。仅截止到1974年,国内外报道发现的黄酮类化合物共1674个(主要是天然 黄酮类,也有少部分为合成品,其中苷元902个,苷722个),并以黄酮醇类最多;约占总 数的三分之一,其次为黄酮类,占总数的四分之一以上,其余则较少。至于双黄酮类多局限 分布于裸子植物,尤其松柏纲、银杏纲和凤尾纲等植物中。截止到1993年统计,黄酮类化 合物总数已超过4000个。 第一节结构与分类 定义:凡两个苯环(A环、B环)通过三碳链相互联结而成的一类成分称为黄酮类化合 大多具有6C-3C-6C的基本骨架,且常有羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等取代基
第六章 黄酮类化合物 课 次：15、16 课 题：第六章 黄酮类化合物 第一节 黄酮类化合物的结构、分类及生物活性 第二节 黄酮类化合物的性质 一、教学目的： 1．说出黄酮类化合物的基本母核结构、分类、分布及生物活性。 2．简述黄酮类的基本性状。 3．阐述不同黄酮类化合物的特殊结构对其性质的影响。 二、教学内容： 1．黄酮类的结构、分类，基本分布和主要生物活性。 2．黄酮类化合物的性质。 三、重点： 1．黄酮类化合物的基本母核结构、分类、分布及生物活性。 2．黄酮类的基本性状。 四、难点： 1．不同黄酮类化合物的特殊结构对其性质的影响。 五、教学内容分析及教法设计： 六、教学过程： 1．组织教学：检查学生出勤，填写教学日志，随机应变，组织好课堂纪律。 2．课程引入： 3．展示目标： 4．进行新课： 第六章 黄酮 黄酮类化合物广泛存在于自然界，是一类重要的天然有机化合物。其不同的颜色为天然 色素家族添加了更多的色彩。这类含有氧杂环的化合物多存在于高等植物及羊齿类植物中。 苔类中含有的黄酮类化合物为数不多，而藻类、微生物、细菌中没有发现黄酮类化合物。黄 酮类化合物的存在形式既有与糖结合成苷的，也有游离体。 黄酮类化合物如此广泛分布于植物界中，而且生理活性多种多样，据不完全统计，其主 要生理活性表现在：①对心血管系统的作用。②抗肝脏毒作用。③抗炎作用。④雌性激素样 作用。⑤抗菌及抗病毒作用。③泻下作用。①解痉作用等。因而引起了国内外的广泛重视， 研究进展很快。仅截止到 1974 年，国内外报道发现的黄酮类化合物共 1674 个（主要是天然 黄酮类，也有少部分为合成品，其中苷元 902 个，苷 722 个），并以黄酮醇类最多；约占总 数的三分之一，其次为黄酮类，占总数的四分之一以上，其余则较少。至于双黄酮类多局限 分布于裸子植物，尤其松柏纲、银杏纲和凤尾纲等植物中。截止到 1993 年统计，黄酮类化 合物总数已超过 4000 个。 第一节 结构与分类 定义：凡两个苯环（A 环、B 环）通过三碳链相互联结而成的一类成分称为黄酮类化合 物。大多具有 6C-3C-6C 的基本骨架，且常有羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等取代基。 1 2 3 5 4 6 7 8 1' 2' 3' 4' 6' 5' O A B C
黄酮苷元的结构和分类根据B环连接位置(2为或3为)、C环氧化程度、C环是否成 环等将黄酮类化合物分为以下七大类 1.黄酮和黄酮醇 R=H 黄酮 R=OH黄酮醇 这里指的是狭义的黄酮,即2一苯基色原酮(2-苯基苯并γ吡喃酮)类,此类化合物 数量最多,尤其是黄酮醇。如芫花中的芹菜素、金银花中的木犀草素属于黄酮类;银杏中的 山奈素和槲皮素属于黄酮醇类。 OH OH OH O 芹菜素 木犀草素 山奈素 槲皮 2.二氢黄酮和二氢黄酮醇 R=H 氢黄酮 R=OH二氢黄酮醇 与黄酮和黄酮醇相比,其结构中C环C-C3位双键被饱和,他们在植物体内常与相应的 黄酮和黄酮醇共存。如甘草中的甘草素、橙皮中的橙皮苷均属于二氢黄酮类;满山红中的二 氢槲皮素、桑枝中的二氢桑色素均属于二氢黄酮醇类。 OCH3 OH 甘草素 橙皮苷 OH O 二氢槲皮素 氢桑色素 3.异黄酮和二氢异黄酮 异黄酮类为具有3一苯基色原酮基本骨架的化合物,与黄酮相比其B环位置连接不同。 如葛根中的葛根素、大豆苷及大豆素均为异黄酮
一、黄酮苷元的结构和分类 根据 B 环连接位置（2 为或 3 为）、C 环氧化程度、C 环是否成 环等将黄酮类化合物分为以下七大类。 1．黄酮和黄酮醇 O R O 这里指的是狭义的黄酮，即 2－苯基色原酮（2-苯基苯并 γ 吡喃酮）类，此类化合物 数量最多，尤其是黄酮醇。如芫花中的芹菜素、金银花中的木犀草素属于黄酮类；银杏中的 山奈素和槲皮素属于黄酮醇类。 O O OH OH HO O O OH OH OH OH 芹菜素 木犀草素 O O OH OH OH OH O O OH OH OH OH OH 山奈素 槲皮素 2．二氢黄酮和二氢黄酮醇 O R O 与黄酮和黄酮醇相比，其结构中 C 环 C2-C3 位双键被饱和，他们在植物体内常与相应的 黄酮和黄酮醇共存。如甘草中的甘草素、橙皮中的橙皮苷均属于二氢黄酮类；满山红中的二 氢槲皮素、桑枝中的二氢桑色素均属于二氢黄酮醇类。 O O OH OH O O OCH3 OH OH O O OH OH OH O CH2 OH OH OH CH3 O 甘草素 橙皮苷 O O OH OH OH OH OH O O OH OH OH OH HO 二氢槲皮素 二氢桑色素 3．异黄酮和二氢异黄酮 异黄酮类为具有 3－苯基色原酮基本骨架的化合物，与黄酮相比其 B 环位置连接不同。 如葛根中的葛根素、大豆苷及大豆素均为异黄酮。 R=H 黄酮 R=OH 黄酮醇 R=H 二氢黄酮 R=OH 二氢黄酮醇
大豆素R=R2=R3H 大豆苷R=R=HR2=gl 葛根素R=R=HRl=glc 二氢异黄酮类可看作是异黄酮类C2和C3双键被还原成单键的一类化合物。如中药广豆 根中的紫檀素就属于二氢异黄酮的衍生物 CH3O 紫檀素 4.查耳酮和二氢查耳酮类 查耳酮的主要结构特点是C环未成环,另外定位也与其他黄酮不同。其可以看作是二氢 黄酮在碱性条件下C环开环的产物,两者互为同分异构体,常在植物体内共存。同时两者的 转变伴随着颜色的变化。 二氢查耳酮在植物界分布极少。 二氢黄酮 2-羟基查耳酮 中药红花中的红花苷为查耳酮类。红花在开花初期时,花中主要成分为无色的新红花苷 (二氢黄酮类)及微量红花苷,故花冠是淡黄色;开花中期花中主要成分为黄色的红花苷, 故花冠为深黄色:开花后期则变成红色的醌式红花苷,故花冠为红色 ①= 新红花苷(无色) 红花苷(黄色) 醌式红花苷(红色) 5.橙酮类 结构特点:可看作是黄酮的C环分出一个碳原子变成五元环,其余部位不变,但C原子 定位也有所不同。是黄酮的同分异构体,属于苯骈呋喃的衍生物,又名噢唪。如黄花波斯菊 花中含有的硫磺菊素就属于此类 烂=CH-1 橙酮基本结构 硫磺菊素 6.花色素和黄烷醇类 色原烯 2-苯基色原烯(花色素母核)
O OR3 R1 R2O O 二氢异黄酮类可看作是异黄酮类 C2 和 C3 双键被还原成单键的一类化合物。如中药广豆 根中的紫檀素就属于二氢异黄酮的衍生物。 CH3O O O O O 紫檀素 4．查耳酮和二氢查耳酮类 查耳酮的主要结构特点是 C 环未成环，另外定位也与其他黄酮不同。其可以看作是二氢 黄酮在碱性条件下 C 环开环的产物，两者互为同分异构体，常在植物体内共存。同时两者的 转变伴随着颜色的变化。 二氢查耳酮在植物界分布极少。 O O OH O H + OH - 二氢黄酮 2-羟基查耳酮 中药红花中的红花苷为查耳酮类。红花在开花初期时，花中主要成分为无色的新红花苷 （二氢黄酮类）及微量红花苷，故花冠是淡黄色；开花中期花中主要成分为黄色的红花苷， 故花冠为深黄色；开花后期则变成红色的醌式红花苷，故花冠为红色。 O OH O HO HO glc O OH OH O HO HO glc O O OH O O HO glc O 异构化 氧化酶 SO2 5．橙酮类 结构特点：可看作是黄酮的 C 环分出一个碳原子变成五元环，其余部位不变，但 C 原子 定位也有所不同。是黄酮的同分异构体，属于苯骈呋喃的衍生物，又名噢哢。如黄花波斯菊 花中含有的硫磺菊素就属于此类。 O CH O 2 3 4 5 6 1' 2' 3' 6' 1 7 4' 5' A B O CH O HO 2 3 4 5 6 1' 2' 3' 6' 1 7 4' 5' 6．花色素和黄烷醇类 O O + 大豆素 R1=R2=R3=H 大豆苷 R1=R3=H R2=glc 葛根素 R2=R3=H R1=glc 新红花苷(无色) 红花苷(黄色) 醌式红花苷(红色) 橙酮基本结构 硫磺菊素 色原烯 2-苯基色原烯 (花色素母核)
花色素类是一类以离子形式存在的色原烯的衍生物。广泛存在于植物的花、果、叶、茎 等部位,是形成植物蓝、红、紫色的色素。由于花色素多以苷的形式存在,故又称花色苷 如矢车菊素、飞燕草素、天竺葵素等属于此类。 oH飞燕草素R1=R2=OH 矢车菊素R1=OHR2=H R2 天竺葵素R1=R2=H 黄烷醇类生源上是由二氢黄酮醇类还原而来,可看成是脱去C位羰基氧原子后的二氢 黄酮醇类。 黄烷-3-醇 黄烷-3-醇在植物界分布很广,如(+)儿茶素( catechin)和(-)表儿茶素( epicatechin 故又称为儿茶素类。儿茶素为中药儿茶的有效成分,具有一定的抗癌活性 (+)儿茶 (-)表儿茶 7.其他黄酮类:此类化合物大多不符合C6-C3-C6的基本骨架,但因具有苯并γ-吡喃 酮结构,我们也将其归为黄酮类化合物。 双黄酮类:是由二分子黄酮衍生物通过C-C键或C-0C键聚合而成的二聚物。如银杏叶 中含有的银杏素即为CC键相结合的双黄酮衍生物 CH3o OCH 银杏素 高异黄酮:和异黄酮相比,其B环和C环之间多了一个—CH2一,如中药麦冬中存在的 麦冬高异黄酮A( ophiopogonone A 麦冬高异黄酮A 呋喃色原酮:即色原酮的C—C位并上一个呋喃环。如凯刺种子和果实中得到的凯林属 于此类
花色素类是一类以离子形式存在的色原烯的衍生物。广泛存在于植物的花、果、叶、茎 等部位，是形成植物蓝、红、紫色的色素。由于花色素多以苷的形式存在，故又称花色苷。 如矢车菊素、飞燕草素、天竺葵素等属于此类。 HO O OH OH R2 R1 OH + 黄烷醇类生源上是由二氢黄酮醇类还原而来，可看成是脱去 C4 位羰基氧原子后的二氢 黄酮醇类。 O OH 黄烷-3-醇在植物界分布很广，如（+）儿茶素(catechin)和（–）表儿茶素(epicatechin）。 故又称为儿茶素类。儿茶素为中药儿茶的有效成分，具有一定的抗癌活性。 HO O OH H OH H OH OH HO O OH H OH OH OH H 7．其他黄酮类：此类化合物大多不符合 C6-C3-C6 的基本骨架，但因具有苯并γ-吡喃 酮结构，我们也将其归为黄酮类化合物。 双黄酮类：是由二分子黄酮衍生物通过 C-C 键或 C-O-C 键聚合而成的二聚物。如银杏叶 中含有的银杏素即为 C-C 键相结合的双黄酮衍生物。 O OH CH3O OCH3 O OH OH HO O O 高异黄酮：和异黄酮相比，其 B 环和 C 环之间多了一个—CH2—，如中药麦冬中存在的 麦冬高异黄酮 A(ophiopogonone A)。 O O HO O HO O 呋喃色原酮：即色原酮的 C6—C7 位并上一个呋喃环。如凯刺种子和果实中得到的凯林属 于此类。 飞燕草素 R1=R2=OH 矢车菊素 R1=OH R2=H 天竺葵素 R1=R2=H 黄烷-3-醇 （+）儿茶素 （-）表儿茶素 麦冬高异黄酮 A 银杏素
O、CH3 苯色原酮:即色原酮的C6-C位并上一个苯环。如决明子中含有的红镰酶素属于此类 红镰酶素 黄酮苷的糖的结构分类 天然黄酮类化合物多以苷类形式存在,并且由于糖的种类、数量、联接位置及联接方式 不同,可以组成各种各样的黄酮苷类。组成黄酮苷的糖类主要有 单糖类:D一葡萄糖、D一半乳糖、D一木糖、L一鼠李糖、L一阿拉伯糖及D一葡萄糖醛 酸等。 双糖类:槐糖(glcl-2glc)。龙胆二糖(glC1-6glc)、答香糖(rhal-6glc)、新橙皮粔 (rhal-6glC)、刺槐二糖(rhal-6gal等 三糖类:龙胆三糖(glcl-6glcl-2fru)、槐三糖(glcl-2glcl-2g1c)等。 酰化糖类:;2一—乙酰葡萄糖、咖啡酰基葡萄糖等。 黄酮类化合物的主要结构类型对比: 黄酮类黄酮醇类二氢黄酮类二氢黄酮醇类花色素类黄烷一3,4一二醇类双 苯吡酮类(汕酮类)黄烷一3一醇类异黄酮类二氢异黄酮类查耳酮类二氢査耳酮 类橙酮类高异黄酮类 注:这里板书并对比各类黄酮结构进行说明 黄酮苷中糖联接位置与苷元的结构类型有关。如黄酮醇类常形成3、5、3′、4’单糖 苷或3,7、3,4’、7,4’双糖链苷等。 除0-苷外,天然黄酮类化合物中还发现有C-苷,如葛根黄素、葛根黄素单糖苷,为中 药葛根中的扩张冠状动脉血管的有效成分 第二节理化性质 不论在黄酮类化合物的提取分离方面还是在其结构测定的研究方面,黄酮类化合物的理 化性质及其显色反应都发挥着谱学技术所替代不了的作用。下面仅就其与分离和结构测定密 切相关的性质进行简要介绍 性状 黄酮类化合物多为结晶性固体,少数(如黄酮苷类)为无定形粉末。游离的各种苷元母 核中,除二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及黄烷醇有族光性外,其余则无光学活性。苷类由于 在结构中引入糖的分子,故均有旋光性,且多为左旋。黄酮类化合物的颜色与分子中是否存 在交叉共轭体系及助色团(一OH、一0CH3等)的种类、数目以及取代位置有关。以黄酮为 例,其色原酮部分原本元色;但在2位上引入苯环后,即形成交叉共轭体系,并通过电子转 移、重排,使共轭链延长,因而显现出颜色。一般情况下,黄酮、黄酮醇及其苷类多显灰黄 黄色,査耳酮为黄~橙黄色,而二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮类,因不具有交叉共轭体系 或共轭链短,故不显色(二氢黄酮及二氢黄酮醇)或显微黄色(异黄酮)。显然,在上述黄 酮、黄酮醇分子中,尤其在7位及4’位引入一OH及-0CH3等助色团后,则因促进电子移
O CH3 OCH3 OCH3 O O 凯林 苯色原酮：即色原酮的 C6—C7 位并上一个苯环。如决明子中含有的红镰酶素属于此类。 HO O CH3 OCH3 OH O 红镰酶素 二、黄酮苷的糖的结构分类 天然黄酮类化合物多以苷类形式存在，并且由于糖的种类、数量、联接位置及联接方式 不同，可以组成各种各样的黄酮苷类。组成黄酮苷的糖类主要有： 单糖类；D－葡萄糖、D－半乳糖、D－木糖、L－鼠李糖、L－阿拉伯糖及 D－葡萄糖醛 酸等。 双糖类：槐糖（glc1-2glc）。龙胆二糖（glC1-6glc）、答香糖（rha1-6glc）、新橙皮糖 （rha1－6glC）、刺槐二糖（rha1－6gal 等 。 三糖类：龙胆三糖（glc1－6glc1－2fru）、槐三糖（glc1－2glc1－2glc）等。 酰化糖类；2－乙酰葡萄糖、咖啡酰基葡萄糖等。 黄酮类化合物的主要结构类型对比： 黄酮类 黄酮醇类 二氢黄酮类 二氢黄酮醇类 花色素类 黄烷－3，4－二醇类 双 苯吡酮类（汕酮类） 黄烷－3－醇类 异黄酮类 二氢异黄酮类 查耳酮类 二氢查耳酮 类 橙酮类 高异黄酮类 注：这里板书并对比各类黄酮结构进行说明。 黄酮苷中糖联接位置与苷元的结构类型有关。如黄酮醇类常形成 3、5、3’、4’单糖 苷或 3，7、3，4’ 、7，4’双糖链苷等。 除 O-苷外，天然黄酮类化合物中还发现有 C-苷，如葛根黄素、葛根黄素单糖苷，为中 药葛根中的扩张冠状动脉血管的有效成分。 第二节 理化性质 不论在黄酮类化合物的提取分离方面还是在其结构测定的研究方面，黄酮类化合物的理 化性质及其显色反应都发挥着谱学技术所替代不了的作用。下面仅就其与分离和结构测定密 切相关的性质进行简要介绍。 一、性状 黄酮类化合物多为结晶性固体，少数（如黄酮苷类）为无定形粉末。游离的各种苷元母 核中，除二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及黄烷醇有族光性外，其余则无光学活性。苷类由于 在结构中引入糖的分子，故均有旋光性，且多为左旋。黄酮类化合物的颜色与分子中是否存 在交叉共轭体系及助色团（－OH、－OCH3 等）的种类、数目以及取代位置有关。以黄酮为 例，其色原酮部分原本元色；但在 2 位上引入苯环后，即形成交叉共轭体系，并通过电子转 移、重排，使共轭链延长，因而显现出颜色。一般情况下，黄酮、黄酮醇及其苷类多显灰黄～ 黄色，查耳酮为黄～橙黄色，而二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮类，因不具有交叉共轭体系 或共轭链短，故不显色（二氢黄酮及二氢黄酮醇）或显微黄色（异黄酮）。显然，在上述黄 酮、黄酮醇分子中，尤其在 7 位及 4’位引入－OH 及－OCH3 等助色团后，则因促进电子移
位、重排,而使化合物的颜色加深。但-OH、一0CH3,引入其他位置则影响较小。 花色素及其苷元的颜色随p不同而改变,一般显红(pH8.5)等颜色。 、溶解性 黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态(苷和苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷)不同 而有很大差异。一般游离苷元难溶或不溶于水,易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙醇等有机 溶剂及稀碱水溶液中。其中黄酮、黄酮醇、查耳酮等平面性强的分子,因分子与分子间排列 紧密,分子间引力较大,故更难溶于水;而二氢黄酮及二氢黄酮醇等,因系非平面性分子, 故分子与分子间排列不紧密,分子间引力降低,有利于水分子进入,溶解度稍大。 至于花色苷元(花青素)类虽也为平面性结构,但因以离子形式存在,具有盐的通性, 故亲水性较强,水中溶解度较大。 黄酮类苷元分子中引入羟基,将增加在水中的溶解度:而羟基经甲基化后,则增加在有 机溶剂中的溶解度。例如,一般黄酮类化合物不溶于石油醚中,故可与脂溶性杂质分开,但 川陈皮素(5,6,7,8,3’,4’一六甲氧基黄酮)却可溶于石油醚 黄酮类化合物的羟基糖苷化后,水中溶解度即相应加大,而在有机溶剂中的溶解度则相 应减小。黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中:但难溶或不溶于苯、氯仿等有 机溶剂中。糖链越长,则水中溶解度越大 另外,糖的结合位置不同,对苷的水中溶解度也有一定影响:以棉黄素(3,5,7,8, 3’,4’一六羟基黄酮)为例,其3一0一葡萄糖苷的水中溶解度大于7一0—葡萄糖苷。 三、酸性与碱性 (一)酸性 黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基,故显酸性,可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及 甲基甲酰胺中 由于酚羟基数目及位置不同,酸性强弱也不同,以黄酮为例,其酚羟基酸性强弱顺序依 次为 7,4’一二羟基>7或4'一羟基>一般酚羟基>5—羟基 例如C-Ⅷ因为处于C=0的对位,在p一共轭效应的影响下,酸性较强,可溶于碳酸 钠水溶液中,此性质可用于提取、分离及鉴定工作 (二)碱性 7一吡喃环上的1位氧原子,因有未共用的电子对,故表现微弱的碱性,可与强无机酸, 如浓硫酸、盐酸等生成盐,但生成的样盐极不稳定,加水后即可分解。 黄酮类化合物溶于浓硫酸中生成的样盐,常常表现出特殊的颜色,可用于鉴别。某些甲 氧基黄酮溶于浓盐酸中显深黄色,且可与生物碱沉淀试剂生成沉淀。 四、显色反应 黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚羟基及γ~吡喃酮环有关 (一)还原试验 1.盐酸一镁粉(或锌粉)反应这是鉴定黄酮类化合物最常用的颜色反应。方法是将 样品溶于1.0m1甲醇或乙醇中,加入少许镁粉(或锌粉)振摇,滴加几滴浓盐酸,1~2min 内(必要时微热)即可显色。多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红至 紫红色。少数显紫至蓝色,当B环上有一或一0CH3取代时,呈现的颜色随之加深。但查 耳酮、橙酮、儿茶素类则无该显色反应。异黄酮类除少数例外,也不显色 由于花青素及部分橙酮、查耳酮等在单纯浓盐酸中也会发生色变,故须预先作空白对照 实验(在供试液中仅加入浓盐酸进行观察)。 另外,在用植物粗提取液进行预试时,为了避免提取液本身颜色的干扰,可注意观察加
位、重排，而使化合物的颜色加深。但－OH、－OCH3，引入其他位置则影响较小。 花色素及其苷元的颜色随 pH 不同而改变，一般显红（ pH ＜ 7）、紫（ pH＝ 8．5）蓝 （ pH＞ 8．5）等颜色。 二、溶解性 黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷和苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷）不同 而有很大差异。一般游离苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙醇等有机 溶剂及稀碱水溶液中。其中黄酮、黄酮醇、查耳酮等平面性强的分子，因分子与分子间排列 紧密，分子间引力较大，故更难溶于水；而二氢黄酮及二氢黄酮醇等，因系非平面性分子， 故分子与分子间排列不紧密，分子间引力降低，有利于水分子进入，溶解度稍大。 至于花色苷元（花青素）类虽也为平面性结构，但因以离子形式存在，具有盐的通性， 故亲水性较强，水中溶解度较大。 黄酮类苷元分子中引入羟基，将增加在水中的溶解度；而羟基经甲基化后，则增加在有 机溶剂中的溶解度。例如，一般黄酮类化合物不溶于石油醚中，故可与脂溶性杂质分开，但 川陈皮素（5，6，7，8，3’，4’－六甲氧基黄酮）却可溶于石油醚。 黄酮类化合物的羟基糖苷化后，水中溶解度即相应加大，而在有机溶剂中的溶解度则相 应减小。黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中；但难溶或不溶于苯、氯仿等有 机溶剂中。糖链越长，则水中溶解度越大。 另外，糖的结合位置不同，对苷的水中溶解度也有一定影响：以棉黄素（3，5，7，8， 3’，4’－六羟基黄酮）为例，其 3－O－葡萄糖苷的水中溶解度大于 7－O－葡萄糖苷。 三、酸性与碱性 （一）酸性 黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显酸性，可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及 二甲基甲酰胺中。 由于酚羟基数目及位置不同，酸性强弱也不同，以黄酮为例，其酚羟基酸性强弱顺序依 次为： 7，4’－二羟基＞7 或 4'－羟基＞一般酚羟基＞5－羟基 例如 C7－OH 因为处于 C＝O 的对位，在 p－共轭效应的影响下，酸性较强，可溶于碳酸 钠水溶液中，此性质可用于提取、分离及鉴定工作。 （二）碱性 7－吡喃环上的 1 位氧原子，因有未共用的电子对，故表现微弱的碱性，可与强无机酸， 如浓硫酸、盐酸等生成盐，但生成的样盐极不稳定，加水后即可分解。 黄酮类化合物溶于浓硫酸中生成的样盐，常常表现出特殊的颜色，可用于鉴别。某些甲 氧基黄酮溶于浓盐酸中显深黄色，且可与生物碱沉淀试剂生成沉淀。 四、显色反应 黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚羟基及 γ～吡喃酮环有关。 （一）还原试验 1．盐酸－镁粉（或锌粉）反应 这是鉴定黄酮类化合物最常用的颜色反应。方法是将 样品溶于 1．0 ml 甲醇或乙醇中，加入少许镁粉（或锌粉）振摇，滴加几滴浓盐酸，1～2 min 内（必要时微热）即可显色。多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红至 紫红色。少数显紫至蓝色，当 B 环上有－OH 或－OCH3 取代时，呈现的颜色随之加深。但查 耳酮、橙酮、儿茶素类则无该显色反应。异黄酮类除少数例外，也不显色。 由于花青素及部分橙酮、查耳酮等在单纯浓盐酸中也会发生色变，故须预先作空白对照 实验（在供试液中仅加入浓盐酸进行观察）。 另外，在用植物粗提取液进行预试时，为了避免提取液本身颜色的干扰，可注意观察加
入浓盐酸后升起的泡沫颜色。如泡沫为红色,即示阳性 盐酸一镁粉反应的机理过去解释为由于生成了花色苷元所致,现在认为是因为生成了阳 碳离子缘故 2.四氢硼钠(钾)反应NaBH4是对二氢黄酮类化合物专属性较高的一种还原剂。 与二氢黄酮类化合物产生红至紫色。其他黄酮类化合物均不显色,可与之区别。方法是 在试管中加入0.1ml含有样品的乙醇液,再加等量2%NaBH4的甲醇液,1min后,加浓盐 酸或浓硫酸数滴,生成紫色至紫红色。 另外,近来报道二氢黄酮可与磷钼酸试剂反应呈现棕褐色,也可作为二氢黄酮类化合物 的特征鉴别反应 (二)金属盐类试剂的络合反应 黄酮类化合物中常含有下列结构单元,故常可与铝盐、铅盐、诸盐、镁盐等试剂反应, 生成有色络合物 1.铝盐常用试剂为1%三氯化铝或硝酸铝溶液。生成的络合物多为黄色,并有荧光, 可用于定性及定量分析 2.铅盐常用工%醋酸铅及碱式醋酸铅水溶液,可生成黄至红色沉淀。 黄酮类化合物与铅盐生成沉淀的色泽,因羟基数目及位置不同而异。其中,醋酸铅只能 与分子中具有邻二酚羟基或兼有3一羟基、4一酮基或5一羟基、4一酮基结构的化合物反应 生成沉淀。但碱式醋酸铅的沉淀能力要大得多,一般酚类化合物均可与其发生沉淀,依此不 仅可用于鉴定,也可用于提取及分离工作。 3.锆盐多用2%二氯氧锆甲醇溶液黄酮类化合物分子中有游离的3一或5一羟基存 在时,均可与该试剂反应生成黄色的锆络合物。但两种锆络合物对酸的稳定性不同。3一羟 基,4一酮基络合物的稳定性比5一羟基,4一酮基络合物的稳定性强(仅二氢黄酮醇除外) 故当反应液中接着加入枸椽酸后,5一羟基黄酮的黄色溶液显著褪色,而3一羟基黄酮溶液 仍呈鲜黄色(锆一枸椽酸反应)。方法是取样品0.5~1.0ng,用10.0ml甲醇加热溶解, 加1.0ml2%二氯氧锆( Zrocl2)甲醇液,呈黄色后再加入2%枸椽酸甲醇溶液,观察颜色 变化 上述反应也可在纸上进行,得到的锆盐络合物多呈黄绿色,并带荧光 4.镁盐常用醋酸镁甲醇溶液为显色剂,本反应可在纸上进行。试验时在纸上滴加 一滴供试液,喷以醋酸镁的甲醇溶液,加热干燥,在紫外光灯下观察。二氢黄酮、二氢 黄酮醇类可显天蓝色荧光,若具有C3-OH,色泽更为明显。而黄酮、黄酮醇及异黄酮类等则 显黄一橙黄一褐色。 5.氯化锶(SrCl2) 在氨性甲醇溶液中,氯化锶可与分子中具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物生成绿色至 棕色乃至黑色沉淀 具有邻二酚羟基的黄酮类化合物与SrCl2的反应试验时,取约1.0m检品置小试管中 加入1.0ml甲醇使溶(必要时可在水浴上加热),加入3滴0.01mol/L。氯化铝的甲醇溶 液,再加3滴已用氨蒸气饱和的甲醇溶液,注意观察有无沉淀生成 6.三氯化铁三氯化铁水溶液或醇溶液为常用的酚类显色剂。多数黄酮类化合物因分 子中含有酚羟基,故可产生阳性反应,但一般仅在含有氢键缔合的酚羟基时,才呈现明显反 (三)硼酸显色反应 当黄酮类化合物分子中有下列结构时,在无机酸或有机酸存在条件下,可与硼酸反应, 生成亮黄色。显然,5一羟基黄酮及2一羟基査耳酮类结构可以满足上述要求,故可与其他 类型区别。一般在草酸存在下显黄色并具有绿色荧光,但在枸椽酸丙酮存在的条件下,则只
入浓盐酸后升起的泡沫颜色。如泡沫为红色，即示阳性。 盐酸－镁粉反应的机理过去解释为由于生成了花色苷元所致，现在认为是因为生成了阳 碳离子缘故。 2．四氢硼钠（钾）反应 NaBH4 是对二氢黄酮类化合物专属性较高的一种还原剂。 与二氢黄酮类化合物产生红至紫色。其他黄酮类化合物均不显色，可与之区别。方法是 在试管中加入 0.1ml 含有样品的乙醇液，再加等量 2％ NaBH4 的甲醇液，lmin 后，加浓盐 酸或浓硫酸数滴，生成紫色至紫红色。 另外，近来报道二氢黄酮可与磷钼酸试剂反应呈现棕褐色，也可作为二氢黄酮类化合物 的特征鉴别反应。 （二）金属盐类试剂的络合反应 黄酮类化合物中常含有下列结构单元，故常可与铝盐、铅盐、诸盐、镁盐等试剂反应， 生成有色络合物。 1．铝盐 常用试剂为 1％三氯化铝或硝酸铝溶液。生成的络合物多为黄色，并有荧光， 可用于定性及定量分析。 2．铅盐 常用工％醋酸铅及碱式醋酸铅水溶液，可生成黄至红色沉淀。 黄酮类化合物与铅盐生成沉淀的色泽，因羟基数目及位置不同而异。其中，醋酸铅只能 与分子中具有邻二酚羟基或兼有 3－羟基、4－酮基或 5－羟基、4－酮基结构的化合物反应 生成沉淀。但碱式醋酸铅的沉淀能力要大得多，一般酚类化合物均可与其发生沉淀，依此不 仅可用于鉴定，也可用于提取及分离工作。 3．锆盐 多用 2％二氯氧锆甲醇溶液 黄酮类化合物分子中有游离的 3－或 5－羟基存 在时，均可与该试剂反应生成黄色的锆络合物。但两种锆络合物对酸的稳定性不同。3－羟 基，4－酮基络合物的稳定性比 5－羟基，4－酮基络合物的稳定性强（仅二氢黄酮醇除外） 故当反应液中接着加入枸椽酸后，5－羟基黄酮的黄色溶液显著褪色，而 3－羟基黄酮溶液 仍呈鲜黄色（锆－枸椽酸反应）。方法是取样品 0.5～1.0 mg，用 10.0 ml 甲醇加热溶解， 加 1.0ml2％二氯氧锆（ ZrOCl2）甲醇液，呈黄色后再加入 2％枸椽酸甲醇溶液，观察颜色 变化。 上述反应也可在纸上进行，得到的锆盐络合物多呈黄绿色，并带荧光。 4．镁盐 常用醋酸镁甲醇溶液为显色剂，本反应可在纸上进行。试验时在纸上滴加 一滴供试液，喷以醋酸镁的甲醇溶液，加热干燥，在紫外光灯下观察。二氢黄酮、二氢 黄酮醇类可显天蓝色荧光，若具有 C3-OH，色泽更为明显。而黄酮、黄酮醇及异黄酮类等则 显黄－橙黄－褐色。 5．氯化锶（SrCl2） 在氨性甲醇溶液中，氯化锶可与分子中具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物生成绿色至 棕色乃至黑色沉淀。 具有邻二酚羟基的黄酮类化合物与 SrCl2 的反应试验时，取约 1.0 mg 检品置小试管中， 加入 1.0 ml 甲醇使溶（必要时可在水浴上加热），加入 3 滴 0.01 mol／L。氯化铝的甲醇溶 液，再加 3 滴已用氨蒸气饱和的甲醇溶液，注意观察有无沉淀生成。 6．三氯化铁 三氯化铁水溶液或醇溶液为常用的酚类显色剂。多数黄酮类化合物因分 子中含有酚羟基，故可产生阳性反应，但一般仅在含有氢键缔合的酚羟基时，才呈现明显反 应。 （三）硼酸显色反应 当黄酮类化合物分子中有下列结构时，在无机酸或有机酸存在条件下，可与硼酸反应， 生成亮黄色。显然，5－羟基黄酮及 2－羟基查耳酮类结构可以满足上述要求，故可与其他 类型区别。一般在草酸存在下显黄色并具有绿色荧光，但在枸椽酸丙酮存在的条件下，则只
显黄色而无荧光 (四)碱性试剂显色反应 在日光及紫外光下,通过纸斑反应,观察样品用碱性试剂处理后的颜色变化情况,对于 鉴别黄酮类化合物有一定意义。其中,用氨蒸气处理后呈现的颜色变化置空气中随即褪去 但经碳酸钠水溶液处理而呈现的颜色置空气中却不褪色 此外,利用碱性试剂的反应还可帮助鉴别分子中某些结构特征。例如 (1)二氢黄酮类易在碱液中开环,转变成相应的异构体一査耳酮类化合物,显橙至黄 (2)黄酮醇类在碱液中先呈黄色,通入空气后变为棕色,因此可与其他黄酮类区别 (3)黄酮类化合物当分子中有邻二酚羟基取代或3,4’一二羟基取代时,在碱液中不 稳定,易被氧化,由黄色一深红色一绿棕色沉淀 五、黄酮类化合物的色谱检识 (一)纸色谱法 纸色谱适合分离检识各种类型黄酮类化合物,包括苷和苷元。双向纸色谱能检识植物粗 提物中黄酮类化合物存在的最好方法之一。用双向纸色谱分离检识黄酮类化合物时,第一向 通常用一种“醇性”展开剂,第二如t-BuOH-HOAc-H0(3:1:1)等;向通常用一种“水性” 展开剂,如2%~5%HOAc等 检识黄酮类化合物苷元,通常用“醇性”展开剂。检识苷往往用“水性”展开剂。 (二)薄层色谱法 薄层色谱法仍然是分离和检出植物粗提物中黄酮类化合物的重要方法之一。一般采用吸 附薄层,吸附剂大多用硅胶和聚酰胺。 硅胶薄层主要用于分离大多数苷元,也可用于分离苷。 聚酰胺薄层色谱用于分离含游离酚羟基的苷与苷元较好。由于聚酰胺对黄酮类化合物吸 附能力较强,因此,展开剂需要较强的极性。在展开剂中大多含有醇、酸或水,或兼有两者 纤维素薄层色谱分离黄酮苷元的溶剂系统有苯一乙酸一水(125:72:3)或氯仿一乙酸 水(10:9:1)。经典的溶剂系统即5%~40%乙酸、正丁醇一乙酸一水(4:1:5)等 亦经常用于分离黄酮类化合物 (三)高效液相色谱法 黄酮类成分的色谱条件可分为正相色谱和反相色谱二类,正相色谱采用硅胶为固定相, 亲脂性溶剂为流动相,主要检识亲脂性较强的黄酮。也可采用氰基键合担体为固定相。反相 色谱多用C8键合柱为担体,流动相常用甲醇一水或乙腈一水,或甲醇一乙腈一水,有时以 定pH的酸水或缓冲溶液代替水加入
显黄色而无荧光。 （四）碱性试剂显色反应 在日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样品用碱性试剂处理后的颜色变化情况，对于 鉴别黄酮类化合物有一定意义。其中，用氨蒸气处理后呈现的颜色变化置空气中随即褪去， 但经碳酸钠水溶液处理而呈现的颜色置空气中却不褪色。 此外，利用碱性试剂的反应还可帮助鉴别分子中某些结构特征。例如： （1）二氢黄酮类易在碱液中开环，转变成相应的异构体－查耳酮类化合物，显橙至黄 色。 （2）黄酮醇类在碱液中先呈黄色，通入空气后变为棕色，因此可与其他黄酮类区别。 （3）黄酮类化合物当分子中有邻二酚羟基取代或 3，4’－二羟基取代时，在碱液中不 稳定，易被氧化，由黄色－深红色－绿棕色沉淀。 五、黄酮类化合物的色谱检识 （一）纸色谱法 纸色谱适合分离检识各种类型黄酮类化合物，包括苷和苷元。双向纸色谱能检识植物粗 提物中黄酮类化合物存在的最好方法之一。用双向纸色谱分离检识黄酮类化合物时，第一向 通常用一种“醇性”展开剂，第二如 t-BuOH─HOAc─H2 O(3:1:1)等；向通常用一种“水性” 展开剂，如 2％～5％HOAc 等。 检识黄酮类化合物苷元，通常用“醇性”展开剂。检识苷往往用“水性”展开剂。 （二）薄层色谱法 薄层色谱法仍然是分离和检出植物粗提物中黄酮类化合物的重要方法之一。一般采用吸 附薄层，吸附剂大多用硅胶和聚酰胺。 硅胶薄层主要用于分离大多数苷元，也可用于分离苷。 聚酰胺薄层色谱用于分离含游离酚羟基的苷与苷元较好。由于聚酰胺对黄酮类化合物吸 附能力较强，因此，展开剂需要较强的极性。在展开剂中大多含有醇、酸或水，或兼有两者。 纤维素薄层色谱分离黄酮苷元的溶剂系统有苯－乙酸－水（125∶72∶3）或氯仿－乙酸 －水（10∶9∶1）。经典的溶剂系统即 5％～40％乙酸、正丁醇－乙酸－水（4∶1∶5）等 亦经常用于分离黄酮类化合物。 （三）高效液相色谱法 黄酮类成分的色谱条件可分为正相色谱和反相色谱二类，正相色谱采用硅胶为固定相， 亲脂性溶剂为流动相，主要检识亲脂性较强的黄酮。也可采用氰基键合担体为固定相。反相 色谱多用 C18 键合柱为担体，流动相常用甲醇－水或乙腈－水，或甲醇－乙腈－水，有时以 一定 pH 的酸水或缓冲溶液代替水加入
课次:17、18 课题:第六章黄酮类化合物 第三节黄酮类化合物的提取和分离 第四节黄酮类化合物的检识 第五节黄酮类化合物的结构测定 、教学目的: 1.举例说明黄酮类化合物的几个特征检识反应 2.简述层析检识中黄酮类化合物结构与其Rf值的关系 3.说出黄酮类化合物的提取与分离基本原则。 4.介绍黄酮类化合物的结构测定 、教学内容: 1.黄酮类的检识。 2.黄酮类的提取分离 、重点 1.黄酮类化合物的几个特征检识反应。 2.层析检识中黄酮类化合物结构与其Rf值的关系 四、难点: 1.黄酮检识之还原反应、荧光检识。 五、教学内容分析及教法设计 六、教学过程: 1.组织教学:检查学生出勤,填写教学日志,随机应变,组织好课堂纪律。 2.课程引入: 3.展示目标 4.进行新课 第三节提取与分离 提取 黄酮类化合物在花、叶、果等组织中,一般多以苷的形式存在,而在木部坚硬组织中, 则多以游离苷元形式存在 黄酮苷类以及极性稍大的苷元(如羟基黄酮、双黄酮、橙酮、査耳酮等),一般可用丙 酮、醋酸乙酯、乙醇、水或某些极性较大的混合溶剂进行提取。其中用得最多的是甲醇一水 (1:1)或甲醇。一些多糖苷类则可以用沸水提取。在提取花青素类化合物时,可加入少量 酸(如0.1%盐酸)。但提取一般黄酮苷类成分时,则应当慎用,以免发生水解反应。为了 避免在提取过程中黄酮苷类发生水解,常按一般提取苷的方法事先破坏酶的活性。大多数黄 酮苷元宜用极性较小的溶剂,如氯仿、乙醚、醋酸乙酯等提取,对多甲氧基黄酮的游离苷元, 可用苯进行提取 对得到的粗提取物可进行精制处理,常用的方法有: (一)溶剂萃取法:利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同,选用不同溶剂进行萃取 可达到精制纯化目的。例如植物叶子的醇浸液,可用石油醚处理,以便除去叶绿素、胡萝 素等脂溶性色素。而某些提取物的水溶液经浓缩后则可加入多倍量浓醇,以沉淀除去蛋白质、 多糖类等水溶性杂质。 有时溶剂萃取过程也可以用逆流分配法连续进行。常用的溶剂系统有:水一醋酸乙酯, 正丁醇一石油醚等。 溶剂萃取过程在除去杂质的同时,往往还可以收到分离苷和苷元或极性苷元与非极性苷 元的效果
课 次：17、18 课 题： 第六章 黄酮类化合物 第三节 黄酮类化合物的提取和分离 第四节 黄酮类化合物的检识 第五节 黄酮类化合物的结构测定 一、教学目的： 1．举例说明黄酮类化合物的几个特征检识反应。 2．简述层析检识中黄酮类化合物结构与其 Rf 值的关系。 3．说出黄酮类化合物的提取与分离基本原则。 4．介绍黄酮类化合物的结构测定 二、教学内容： 1．黄酮类的检识。 2．黄酮类的提取分离。 三、重点： 1．黄酮类化合物的几个特征检识反应。 2．层析检识中黄酮类化合物结构与其Rf值的关系。 四、难点： 1．黄酮检识之还原反应、荧光检识。 五、教学内容分析及教法设计： 六、教学过程： 1．组织教学：检查学生出勤，填写教学日志，随机应变，组织好课堂纪律。 2．课程引入： 3．展示目标： 4．进行新课： 第三节 提取与分离 一、提取 黄酮类化合物在花、叶、果等组织中，一般多以苷的形式存在，而在木部坚硬组织中， 则多以游离苷元形式存在。 黄酮苷类以及极性稍大的苷元（如羟基黄酮、双黄酮、橙酮、查耳酮等），一般可用丙 酮、醋酸乙酯、乙醇、水或某些极性较大的混合溶剂进行提取。其中用得最多的是甲醇－水 （1∶1）或甲醇。一些多糖苷类则可以用沸水提取。在提取花青素类化合物时，可加入少量 酸（如 0.1％盐酸）。但提取一般黄酮苷类成分时，则应当慎用，以免发生水解反应。为了 避免在提取过程中黄酮苷类发生水解，常按一般提取苷的方法事先破坏酶的活性。大多数黄 酮苷元宜用极性较小的溶剂，如氯仿、乙醚、醋酸乙酯等提取，对多甲氧基黄酮的游离苷元， 可用苯进行提取。 对得到的粗提取物可进行精制处理，常用的方法有： （一）溶剂萃取法：利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选用不同溶剂进行萃取 可达到精制纯化目的。例如植物叶子的醇浸液，可用石油醚处理，以便除去叶绿素、胡萝卜 素等脂溶性色素。而某些提取物的水溶液经浓缩后则可加入多倍量浓醇，以沉淀除去蛋白质、 多糖类等水溶性杂质。 有时溶剂萃取过程也可以用逆流分配法连续进行。常用的溶剂系统有：水一醋酸乙酯， 正丁醇一石油醚等。 溶剂萃取过程在除去杂质的同时，往往还可以收到分离苷和苷元或极性苷元与非极性苷 元的效果
(二)碱提取酸沉淀法 黄酮苷类虽有一定极性,可溶于水,但却难溶于酸性水,易溶于碱性水,故可用碱性水 提取,再将碱水提取液调成酸性,黄酮苷类即可沉淀析出。此法简便易行,如芦丁、橙皮苷、 黄芩苷提取都应用了这个方法。现以从槐米中提取芦丁为例说明该法的操作过程。 槐米(槐树 SOphora japonica L.花蕾)加约6倍量水,煮沸,在搅拌下缓缓加入石 灰乳至p8~9,在此p条件下微沸20~30min,趁热抽滤,残渣再加4倍量的水煎 次,趁热抽滤。合并滤液,在60~τ0t的条件下,用浓盐酸将合并滤液调至PH为5,搅匀 后静置24h,抽滤。用水将沉淀物洗至中性,60℃干燥得芦丁粗品,用沸水重结晶,70 80℃干燥后得芦丁纯品 在用碱酸法进行提取纯化时,应当注意所用碱液浓度不宜过离,以免在强碱性下,尤其 加热时破坏黄酮母核。在加酸酸化时,酸性也不宜过强,以免生成样盐,致使析出的黄酮类 化合物又重新溶解,降低产品收率。当药材中含有大量果胶、粘液等水溶性杂质时,如花 果类药材,宜用石灰乳或石灰水代替其他碱性水溶液进行提取,以使上述含羧基的杂质生成 钙盐沉淀,不被溶出。这将有利于黄酮类化合物的纯化处理。 (三)炭粉吸附法 主要适于苷类的精制工作。通常,在植物的甲醇粗提取物中,分次加入活性炭,搅拌, 静置,直至定性检査上清液无黄酮反应时为止。过滤,收集吸附苷的炭末,依次用沸水、佛 甲醇、7%酚一水、15%酚一醇溶液进行洗脱。对各部分洗脱液进行定性检査(或用PPC鉴 定)。通过对 BaPtisia lecontei中黄酮类化合物的研究证明,大部分黄酮耷类可用7%酚 水洗下。洗脱液经减压蒸发浓缩至小体积,再用乙酸振摇除去残留的酚,余下水层减压浓 缩即得较纯的黄酮苷类成分。 分离 现将较常用的分离方法介绍如下: (一)柱色谱法 分离黄酮类化合物常用的吸附剂或载体有硅胶、聚酰胺及纤维素粉等。此外,也有用氧 化铝、氧化镁及硅藻土等 1.硅胶柱色谱此法应用范围最广,主要适于分离异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及离 度甲基化(或乙醇化)的黄酮及黄酮醇类。少数情况下,在加水去活化后也可用于分离极性 较大的化合物,如多羟基黄酮醇及其苷类等。供试硅胶中混存的微量金属离子,应预先用浓 盐酸处理除去,以免干扰分离效果 2.聚酰胺柱色谱对分离黄酮类化合物来说,聚酰胺是较为理想的吸附剂。其吸附强 度主要取决于黄酮类化合物分子中羟基的数目与位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之 间形成氢键缔合能力的大小。聚酰胺柱色谱可用于分离各种类型的黄酮类化合物,包括苷及 苷元、査耳酮与二氢黄酮等。以 Baptisialecontei为例:黄酮类化合物从聚酰胺柱上洗脱 时大体有下述规律: (1)苷元相同,洗脱先后顺序一般是:叁糖苷、双糖苷、单糖苷、苷元 (2)母核上增加羟基,洗脱速度即相应减慢。当分子中羟基数目相同时,羟基位置对 吸附也有影响,聚酰胺对处于羰基间位或对位的羟基吸附力大于邻位羟基,故洗脱顺序为: 具有邻位羟基黄酮,具有对位(或间位)羟基黄酮 (3)不同类型黄酮化合物,先后流出顺序一般是:异黄酮、二氢黄酮醇、黄酮、黄酮 醇。 (4)分子中芳香核、共轭双键多者易被吸附,故査耳酮往往比相应的二氢黄酮难于洗 脱。上述规律也适用于黄酮类化合物在聚酰胺薄层色谱上的行为。 3.葡聚糖凝胶( Sephadex gel)柱色谱对于黄酮类化合物的分离,主要用两种型号的
（二）碱提取酸沉淀法 黄酮苷类虽有一定极性，可溶于水，但却难溶于酸性水，易溶于碱性水，故可用碱性水 提取，再将碱水提取液调成酸性，黄酮苷类即可沉淀析出。此法简便易行，如芦丁、橙皮苷、 黄芩苷提取都应用了这个方法。现以从槐米中提取芦丁为例说明该法的操作过程。 槐米（槐树 SOphora japonica L．花蕾）加约 6 倍量水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石 灰乳至 pH 8～9，在此 pH 条件下微沸 20～30 min，趁热抽滤，残渣再加 4 倍量的水煎一 次，趁热抽滤。合并滤液，在 60～70t 的条件下，用浓盐酸将合并滤液调至 PH 为 5，搅匀 后静置 24 h，抽滤。用水将沉淀物洗至中性， 60℃干燥得芦丁粗品，用沸水重结晶， 70 一 80℃干燥后得芦丁纯品。 在用碱酸法进行提取纯化时，应当注意所用碱液浓度不宜过离，以免在强碱性下，尤其 加热时破坏黄酮母核。在加酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成样盐，致使析出的黄酮类 化合物又重新溶解，降低产品收率。当药材中含有大量果胶、粘液等水溶性杂质时，如花、 果类药材，宜用石灰乳或石灰水代替其他碱性水溶液进行提取，以使上述含羧基的杂质生成 钙盐沉淀，不被溶出。这将有利于黄酮类化合物的纯化处理。 （三）炭粉吸附法 主要适于苷类的精制工作。通常，在植物的甲醇粗提取物中，分次加入活性炭，搅拌， 静置，直至定性检查上清液无黄酮反应时为止。过滤，收集吸附苷的炭末，依次用沸水、佛 甲醇、7％酚一水、15％酚一醇溶液进行洗脱。对各部分洗脱液进行定性检查（或用 PPC 鉴 定）。通过对 BaPtisia lecontei 中黄酮类化合物的研究证明，大部分黄酮耷类可用 7％酚 一水洗下。洗脱液经减压蒸发浓缩至小体积，再用乙酸振摇除去残留的酚，余下水层减压浓 缩即得较纯的黄酮苷类成分。 二、分离 现将较常用的分离方法介绍如下： （一）柱色谱法 分离黄酮类化合物常用的吸附剂或载体有硅胶、聚酰胺及纤维素粉等。此外，也有用氧 化铝、氧化镁及硅藻土等。 1．硅胶柱色谱此法应用范围最广，主要适于分离异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及离 度甲基化（或乙醇化）的黄酮及黄酮醇类。少数情况下，在加水去活化后也可用于分离极性 较大的化合物，如多羟基黄酮醇及其苷类等。供试硅胶中混存的微量金属离子，应预先用浓 盐酸处理除去，以免干扰分离效果。 2．聚酰胺柱色谱 对分离黄酮类化合物来说，聚酰胺是较为理想的吸附剂。其吸附强 度主要取决于黄酮类化合物分子中羟基的数目与位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之 间形成氢键缔合能力的大小。聚酰胺柱色谱可用于分离各种类型的黄酮类化合物，包括苷及 苷元、查耳酮与二氢黄酮等。以 Baptisialecontei 为例：黄酮类化合物从聚酰胺柱上洗脱 时大体有下述规律： （1）苷元相同，洗脱先后顺序一般是：叁糖苷、双糖苷、单糖苷、苷元。 （2）母核上增加羟基，洗脱速度即相应减慢。当分子中羟基数目相同时，羟基位置对 吸附也有影响，聚酰胺对处于羰基间位或对位的羟基吸附力大于邻位羟基，故洗脱顺序为： 具有邻位羟基黄酮，具有对位（或间位）羟基黄酮。 （3）不同类型黄酮化合物，先后流出顺序一般是：异黄酮、二氢黄酮醇、黄酮、黄酮 醇。 （4）分子中芳香核、共轭双键多者易被吸附，故查耳酮往往比相应的二氢黄酮难于洗 脱。上述规律也适用于黄酮类化合物在聚酰胺薄层色谱上的行为。 3．葡聚糖凝胶（Sephadex gel）柱色谱对于黄酮类化合物的分离，主要用两种型号的
