8）、挤压法去核：在PB1附近，将透明带切开，调准切 口，固定卵母细胞，使切割针与其成垂直方向，向下 挤压除去PB1连同下面的一小部分细胞质
8）、挤压法去核：在PB1附近，将透明带切开，调准切 口，固定卵母细胞，使切割针与其成垂直方向，向下 挤压除去PB1连同下面的一小部分细胞质
9）、点击法去核：在PB1附近，将卵母细胞透明带切 开1/3，调准切口，使其与切割针成垂直方向，固定 卵母细胞，用显微针点击透明带，除去PB1连同下 面的一小部分细胞质
9）、点击法去核：在PB1附近，将卵母细胞透明带切 开1/3，调准切口，使其与切割针成垂直方向，固定 卵母细胞，用显微针点击透明带，除去PB1连同下 面的一小部分细胞质
5、激活系统 1）、化学激活 ⑴7%乙醇：处理时间5～7min ⑵离子霉素：4umol/L，5min ⑶钙离子载体（A23187）：5umol/L，5min ⑷6-DMAP：1.9～2.0mmol/L；3～5h或更长 ⑸星形胞菌素：2umol/L；15～30min 2）、电激活
5、激活系统 1）、化学激活 ⑴7%乙醇：处理时间5～7min ⑵离子霉素：4umol/L，5min ⑶钙离子载体（A23187）：5umol/L，5min ⑷6-DMAP：1.9～2.0mmol/L；3～5h或更长 ⑸星形胞菌素：2umol/L；15～30min 2）、电激活
3、移核 1）、带下注射移核法
3、移核 1）、带下注射移核法
2）、卵母细胞质内注核法
2）、卵母细胞质内注核法
4、细胞融合系统 1）、化学法 2）、仙台病毒法 3）、电融合法
4、细胞融合系统 1）、化学法 2）、仙台病毒法 3）、电融合法
融合过程
融合过程
6、核移植重构胚的培养 ➢体内培养：用琼脂包埋，移入暂时的中间受体（如羊、 兔）的输卵管内，培养4～5d后，然后回收胚胎进行 移植。 ➢体外培养：重组胚激活后，在现有的胚胎体外培养系 统中进行培养。 7、继代细胞核移植 又叫连续细胞核移植，即将核移植胚胎的卵裂球分开， 作为供核细胞，再进行连续多代的核移植，以便从一 枚胚胎得到更多的克隆胚胎。 8、克隆胚胎的移植 如牛：先做同期发情处理，然后将胚胎移到受体动物 如牛和水牛的黄体侧子宫角
6、核移植重构胚的培养 ➢体内培养：用琼脂包埋，移入暂时的中间受体（如羊、 兔）的输卵管内，培养4～5d后，然后回收胚胎进行 移植。 ➢体外培养：重组胚激活后，在现有的胚胎体外培养系 统中进行培养。 7、继代细胞核移植 又叫连续细胞核移植，即将核移植胚胎的卵裂球分开， 作为供核细胞，再进行连续多代的核移植，以便从一 枚胚胎得到更多的克隆胚胎。 8、克隆胚胎的移植 如牛：先做同期发情处理，然后将胚胎移到受体动物 如牛和水牛的黄体侧子宫角
（三）、核移植技术（克隆技术）存在的问题： ➢结果不稳定，效率低（1～6%）； ➢克隆动物怀孕期长、出生体重异常偏大、生后对 环境的适应性差； ➢存活率低； ➢细胞质的遗传问题
（三）、核移植技术（克隆技术）存在的问题： ➢结果不稳定，效率低（1～6%）； ➢克隆动物怀孕期长、出生体重异常偏大、生后对 环境的适应性差； ➢存活率低； ➢细胞质的遗传问题
（四）、核移植的应用前景 1、扩大优良畜种和稀有动物的数量 2、提高转基因动物效率 3、核-质间互作关系的研究 4、克隆技术的医学价值
（四）、核移植的应用前景 1、扩大优良畜种和稀有动物的数量 2、提高转基因动物效率 3、核-质间互作关系的研究 4、克隆技术的医学价值