第六节 动物 胚胎干细胞的分离培养技术 Embryonic Stem cells（ES cells） 一、概述 二、胚胎干细胞研究的意义 三、胚胎干细胞研究的历史 四、胚胎干细胞分离培养的基本程序 五、胚胎干细胞技术目前存在的问题和发展远 景
第六节 动物 胚胎干细胞的分离培养技术 Embryonic Stem cells（ES cells） 一、概述 二、胚胎干细胞研究的意义 三、胚胎干细胞研究的历史 四、胚胎干细胞分离培养的基本程序 五、胚胎干细胞技术目前存在的问题和发展远 景
第六节 胚胎干细胞技术 Embryonic Stem cells (ES cells) 一、概述 ➢哺乳动物胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES细胞）一般是指从早期胚胎经体外分化抑 制培养分离出来的具有全能性的细胞。 ➢ES细胞是由Evans和Kauf-man1981年首次从 延迟小鼠囊胚中分离出来的多能性细胞，当 时称之为EK细胞。以后称之为胚胎干细胞
第六节 胚胎干细胞技术 Embryonic Stem cells (ES cells) 一、概述 ➢哺乳动物胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES细胞）一般是指从早期胚胎经体外分化抑 制培养分离出来的具有全能性的细胞。 ➢ES细胞是由Evans和Kauf-man1981年首次从 延迟小鼠囊胚中分离出来的多能性细胞，当 时称之为EK细胞。以后称之为胚胎干细胞
人胚胎干细胞分离技术途径 ICM PGCs
人胚胎干细胞分离技术途径 ICM PGCs
ES细胞的特点： ➢ES细胞具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为 体积小、核大，核仁突出，培养时呈克隆状生 长；在功能上，ES细胞具有发育的全能性，即 具有分化为成年动物体内任何一种细胞类型的 能力。 ➢ES细胞具有细胞系的特征，在饲养层上能维持 未分化状态并实现自我更新。因为可无限增殖， 也可冷冻保存
ES细胞的特点： ➢ES细胞具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为 体积小、核大，核仁突出，培养时呈克隆状生 长；在功能上，ES细胞具有发育的全能性，即 具有分化为成年动物体内任何一种细胞类型的 能力。 ➢ES细胞具有细胞系的特征，在饲养层上能维持 未分化状态并实现自我更新。因为可无限增殖， 也可冷冻保存
二、胚胎干细胞研究的意义 ➢ES细胞在哺乳动物个体发生发育规律的研究 中极有价值的工具； ➢ES细胞是研究细胞分化的理想手段；图 ➢ES细胞是研究基因功能的首选细胞； ➢Es细胞作为生产转基因动物的主要途径之一； ➢ES细胞治疗技术将引起一场医学革命； ➢ES细胞可用于研究细胞癌变机理和新药物的 筛选
二、胚胎干细胞研究的意义 ➢ES细胞在哺乳动物个体发生发育规律的研究 中极有价值的工具； ➢ES细胞是研究细胞分化的理想手段；图 ➢ES细胞是研究基因功能的首选细胞； ➢Es细胞作为生产转基因动物的主要途径之一； ➢ES细胞治疗技术将引起一场医学革命； ➢ES细胞可用于研究细胞癌变机理和新药物的 筛选
• 二、胚胎干细胞研究的历史 1、1981年 Evans 和 Kaufman 获得小鼠ES细胞系 2、1988年 Doetschman获得仓鼠ES细胞系 3、1994年 Wheeler 和Robert获得猪ES细胞系 4、1998年 Thomson获得人的ES细胞系 5、 2007年 日本的Yamanaka研究小组和美国的James Thomson 研究小组分别获得诱导多能性干 细胞 （induced pluripotent stem cell，iPS 细胞）
• 二、胚胎干细胞研究的历史 1、1981年 Evans 和 Kaufman 获得小鼠ES细胞系 2、1988年 Doetschman获得仓鼠ES细胞系 3、1994年 Wheeler 和Robert获得猪ES细胞系 4、1998年 Thomson获得人的ES细胞系 5、 2007年 日本的Yamanaka研究小组和美国的James Thomson 研究小组分别获得诱导多能性干 细胞 （induced pluripotent stem cell，iPS 细胞）
• 四、胚胎干细胞分离培养的基本程序 • (一)选择抑制细胞分化的培养体系 • 1、饲养层培养体系 • 2、条件培养体系 • 3、培养液中添加分化抑制因子体系
• 四、胚胎干细胞分离培养的基本程序 • (一)选择抑制细胞分化的培养体系 • 1、饲养层培养体系 • 2、条件培养体系 • 3、培养液中添加分化抑制因子体系
• 四、胚胎干细胞分离培养的基本程序 • （二）早期胚胎的选择 • （三）胚胎干细胞的分离 • （四）胚胎干细胞的保持 • （五）胚胎干细胞的鉴定 • （六）胚胎干细胞的分化潜力验证
• 四、胚胎干细胞分离培养的基本程序 • （二）早期胚胎的选择 • （三）胚胎干细胞的分离 • （四）胚胎干细胞的保持 • （五）胚胎干细胞的鉴定 • （六）胚胎干细胞的分化潜力验证
五、胚胎干细胞技术目前存在的问题和发展远景 • 1、根据细胞的分化特点建立更有效的培养体 系 • 2、加强胚胎干细胞体外诱导分化研究 • 3、提高家畜胚胎干细胞的分离水平 • 4、加速胚胎干细胞在医学上的应用
五、胚胎干细胞技术目前存在的问题和发展远景 • 1、根据细胞的分化特点建立更有效的培养体 系 • 2、加强胚胎干细胞体外诱导分化研究 • 3、提高家畜胚胎干细胞的分离水平 • 4、加速胚胎干细胞在医学上的应用
第七节 嵌合体 Chimera 嵌合体动物：指由2个以上不同的受精卵或3个 以上的配子相结合，有不同基因型的细胞群 所构成的复合体。 嵌合体动物制作方法： 1、集合（凝集）法：在卵裂阶段使2个以上的 胚胎发生粘着和结合。 2、注入法：在临近着床的胚泡期，用显微操作 方法将另一个体的细胞注入到囊胚腔中
第七节 嵌合体 Chimera 嵌合体动物：指由2个以上不同的受精卵或3个 以上的配子相结合，有不同基因型的细胞群 所构成的复合体。 嵌合体动物制作方法： 1、集合（凝集）法：在卵裂阶段使2个以上的 胚胎发生粘着和结合。 2、注入法：在临近着床的胚泡期，用显微操作 方法将另一个体的细胞注入到囊胚腔中