环境条件 在植物组织培养中温度、光照、湿度等 各种环境条件,培养基组成、pH值、渗 透压等各种化学环境条件都会影响组织 培养育苗的生长和发育
二 环境条件 • 在植物组织培养中温度、光照、湿度等 各种环境条件，培养基组成、pH值、渗 透压等各种化学环境条件都会影响组织 培养育苗的生长和发育
温度( temperature) 因为温度是植物组织培养中的重要因素,所以植物组织培养在最 适宜的温度 各才菜理多级时处 植物组织会表现生长停止,高于35℃时对植物生长不利。但是, 植物培养的适温 百合的最适温度 27℃、番茄是28℃。温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度, 也影响碁分化增殖以及器官建成等发育进程。如烟草芽的形成以 8℃为最好 成率皆最低。 不同培养目标采用的培养温度也不同,自合鳞片在30℃以下再生 发叶速度和 桃胚在2 5℃条件进行一定时间的低温处理,有利于提高胚培养成活率。用 35℃处理草莓的茎尖分生组织35d,可得到无病毒苗
温度(temperature) • 因为温度是植物组织培养中的重要因素，所以植物组织培养在最 适宜的温度下生长分化才能表现良好，大多数植物组织培养都是 在23～27℃之间进行，一般采用25±2℃。低于15℃℃时培养， 植物组织会表现生长停止，高于35℃时对植物生长不利。但是， 不同植物培养的适温不同，百合的最适温度是20℃、月季足25- 27℃、番茄是28℃。温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度， 也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。如烟草芽的形成以 28℃为最好，在120℃以下，33℃以上形成率皆最低。 • 不同培养目标采用的培养温度也不同，百合鳞片在30℃以下再生 的小鳞茎的发叶速度和百分率都比在25℃以下的高。桃胚在2— 5℃条件进行一定时间的低温处理，有利于提高胚培养成活率。用 35℃处理草莓的茎尖分生组织3—5d，可得到无病毒苗
光照(ight) 設蕉时 中光照也是重要的条件之一,主要表现在光强、光质 面 光照强度( light intensity) 光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响,从月前的 研究情况看,光照强度对外植体及细胞的最初分裂有明显的影响。 说,光照强度较强,幼苗生长的粗壮,而光照强度较弱幼 苗容易徒长 2.光质( light wave 光质对愈伤组织诱量,培养组织的增殖以及器官的分化都有明显 百合珠芽在红光下培养,8周后,分化 在蓝光下培养,几周后才出现愈伤组织,而唐菖蒲子球块接种 ,在蓝光下培养首先出现芽,形成的幼苗生长旺盛,而白光 幼苗纤细。 3.光周期( light period) ·试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养,最常用的 周期是16h的光照,8h的 研究表明,对短日照敏感的品种的 器官组织,在短日照下易分化,而在长日照 愈伤组织 时需要暗培养,尤其是冖些植物的愈伤组织在暗下比在光下更好
光照(light) • 组织培养中光照也是重要的条件之一，主要表现在光强、光质、 以及光照时间方面 • 1．光照强度(light intensity) • 光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响，从目前的 研究情况看，光照强度对外植体及细胞的最初分裂有明显的影响。 一般来说，光照强度较强，幼苗生长的粗壮，而光照强度较弱幼 苗容易徒长。 • 2．光质(light wave) • 光质对愈伤组织诱导，培养组织的增殖以及器官的分化都有明显 的影响。如百合珠芽在红光下培养，8周后，分化出愈伤组织。但 在蓝光下培养，几周后才出现愈伤组织，而唐菖蒲子球块接种15d 后，在蓝光下培养首先出现芽，形成的幼苗生长旺盛，而白光下 幼苗纤细。 • 3．光周期(light period) • 试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养，最常用的 周期是16h的光照，8h的黑暗。研究表明，对短日照敏感的品种的 器官组织，在短日照下易分化，而在长日照下产生愈伤组织，有 时需要暗培养，尤其是一些植物的愈伤组织在暗下比在光下更好。 如红花、乌饭树的愈伤组织
湿度( humidity) 湿度的影响包括培养容器保持和环境的湿度条件,容器内主要受 培养基水分含量和封口材料的影响。前者又受琼脂含量的影响。 在冬季应适当减少琼脂用量,否则,将使培养基干硬,以致不利 于外植体接触或插进培养基,导致生长发育受阻。封口材料直接 影响容器内湿度情况,但封闭性较髙的封口材料易引起透气性受 阻,也会导致植物生长发育受影响。 环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发,一般要求70 80%的相对湿度,常用加湿器或经常洒水的方法来调节湿度。湿 度过低会使培养基丧失大量水分,导致培养基各种成分浓度的改 变和渗透压的升高,进而影响组织培养的正常进行。湿度过高时, 易引起棉塞长霉,造成污染
湿度 (humidity) • 湿度的影响包括培养容器保持和环境的湿度条件，容器内主要受 培养基水分含量和封口材料的影响。前者又受琼脂含量的影响。 在冬季应适当减少琼脂用量，否则，将使培养基干硬，以致不利 于外植体接触或插进培养基，导致生长发育受阻。封口材料直接 影响容器内湿度情况，但封闭性较高的封口材料易引起透气性受 阻，也会导致植物生长发育受影响。 • 环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发，一般要求70%— 80%的相对湿度，常用加湿器或经常洒水的方法来调节湿度。湿 度过低会使培养基丧失大量水分，导致培养基各种成分浓度的改 变和渗透压的升高，进而影响组织培养的正常进行。湿度过高时， 易引起棉塞长霉，造成污染
渗透压( penetrating pressure) 培养基中由于有添加的盐类、蔗糖等化 合物,因此,而影响到渗透压的变化。 通常1—2个大气压对植物生长有促进作 用,2个大气压以上就对植物生长有阻碍 作用,而5-6个大气压植物生长就会完 全停止,6个大气压植物细胞就不能生存
渗透压(penetrating pressure) • 培养基中由于有添加的盐类、蔗糖等化 合物，因此，而影响到渗透压的变化。 通常1—2个大气压对植物生长有促进作 用，2个大气压以上就对植物生长有阻碍 作用，而5—6个大气压植物生长就会完 全停止，6个大气压植物细胞就不能生存
pH值( pH value 不同的植物对培养基最适pH值的要求也是不同的(表 大多在5、6.5左 般培养基皆要求5.8, 这基本能适应大多植物培养的需要 pH值适度因材料而异,也因培养基的组成而不同。以 硝态氮作氮源和以铵态氮作氮源就不一样,后者较高 些。一般来说当pH值高于6.5时,培养基全变硬 低于5时,琼脂不能很好地凝固。因为高温灭菌会降低 pH值(约02-03个pH偵因此在配制时常提高pH值 0.20.3单位。pH值大小调整可用0.1M的NaOH和 IM的HCI来调整。lm的NaOH可使pH值升高0.2单 位,Iml的HC可使pH值降低0.2单位。调节时一定要 充分搅拌均匀
pH值 (pH value) • 不同的植物对培养基最适pH值的要求也是不同的(表 2—1)，大多在5、6．5左右，一般培养基皆要求5.8， 这基本能适应大多植物培养的需要。 • pH值适度因材料而异，也因培养基的组成而不同。以 硝态氮作氮源和以铵态氮作氮源就不一样，后者较高 一些。一般来说当pH值高于6．5时，培养基全变硬； 低于5时，琼脂不能很好地凝固。因为高温灭菌会降低 pH值(约0.2—0.3个pH值)因此在配制时常提高pH值 0．2—0．3单位。pH值大小调整可用0．1M的NaOH和 0．IM的HCI来调整。lml的NaOH可使pH值升高0．2单 位，lml的HCl可使pH值降低0．2单位。调节时一定要 充分搅拌均匀
不同植物的最适pH值 种类 最适pH值 种类 最适pH值 杜鹃 4.0 月季 5.8 越桔 胡萝卜、石刁柏 6.0 蚕豆 桃 7.0 番茄
种类 最适pH值 种类 最适pH值 杜鹃 4.0 月季 5.8 越桔 4.5 胡萝卜、石刁柏 6.0 蚕豆 5.5 桃 7.0 番茄 5.7 不同植物的最适pH值
氧气( oxygen) 氧气是组织培养中必需的因素,瓶盖封 闭时要考虑通气问题,可用附有滤气膜 的封口材料。通气最好的是棉塞封闭瓶 口,但棉塞易使培养基干燥,夏季易引 起污染。固体培养基可加进活性炭来增 加通气度,以利于发根。培养室要经常 换气,改善室内的通气状况。液体振荡 培养时,要考虑振荡的次数、振幅等 同时要考虑容器的类型、培养基等
氧气(oxygen) • 氧气是组织培养中必需的因素，瓶盖封 闭时要考虑通气问题，可用附有滤气膜 的封口材料。通气最好的是棉塞封闭瓶 口，但棉塞易使培养基干燥，夏季易引 起污染。固体培养基可加进活性炭来增 加通气度，以利于发根。培养室要经常 换气，改善室内的通气状况。液体振荡 培养时，要考虑振荡的次数、振幅等， 同时要考虑容器的类型、培养基等
第二节培养基的制备 母液 stock solution)的配制和保存 在植物组织培养工作中,配制培养基是日常必备的工作。为简便 起见,通常先配制二系列母液,即贮备液,所谓母液是欲配制液 的浓缩液, 不但 各物质成分的准确性及 速移取,而且还便于 母液配成比所需浓度高10 100倍。母液配制时可分别配成大 微量元素、铁盐、有机 物和激素类等。配制时注意一些离子之间易发生沉淀,如Ca2+ 和S042+,Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后, 生沉淀,一定 要充分溶解再放入母液中。配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。 药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。药品的称量及定容都要 准确。各种药品先以少量水让其充分溶解,然后依次混 配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液,其中维生素 氨基酸类可以 制:,也可以混在一起。母液配好后放人冰箱 ,用时再按比例稀释
第二节 培养基的制备 • 一、母液(stock solution)的配制和保存 • 在植物组织培养工作中，配制培养基是日常必备的工作。为简便 起见，通常先配制一系列母液，即贮备液。所谓母液是欲配制液 的浓缩液，这样不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快 速移取，而且还便于低温保藏。一般母液配成比所需浓度高10- 100倍。母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机 物和激素类等。配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+ • 和S042+，Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定 要充分溶解再放入母液中。配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。 药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。药品的称量及定容都要 准确。各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。一般 配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液，其中维生素、 氨基酸类可以分别配制，也可以混在一起。母液配好后放人冰箱 内低温保存，用时再按比例稀释
母液的配制方法: 单配法:将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的 母液。一般用a:b表示,即每b毫升溶液中含有a毫克溶质 混配法:将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数称 ,分别溶解后每一类混合在一起定容到一定体积配成混 合母液,浓度可用amgL表示,即配制一升培养基吸取该 母液aml 生长素配制时可先用少量95%酒精助溶。2,4D可用 O.lmol/L的NaOH或KOH助溶,加入温水定容。生长素 常配成lmg/ml的溶液贮于冰箱中备用。 细胞分裂素类一般先用少量1N盐配溶解后,再加入温水冷 却后定容, ·铁盐配法(MS为例):在装有400ml蒸馏水的烧杯中加入 2粒苛性钠,溶解后加入3.73 g EDTA-Na2,加热使其全部溶 解,然后边搅拌边慢慢加入2.78 g Feso4.7H2O直至全部溶 解,冷却后定容至500ml,置于冰箱中备用
母液的配制方法： • 单配法：将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的 母液。一般用a:b表示，即每b毫升溶液中含有a毫克溶质。 • 混配法：将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数称 量，分别溶解后每一类混合在一起定容到一定体积配成混 合母液，浓度可用a mg/L表示，即配制一升培养基吸取该 母液a ml. • 生长素配制时可先用少量95%酒精助溶。2，4—D可用 O．1mol／L的NaOH或KOH助溶，加入温水定容。生长素 常配成1mg／ml的溶液贮于冰箱中备用。 • 细胞分裂素类一般先用少量1N盐配溶解后，再加入温水冷 却后定容， • 铁盐配法（MS为例）：在装有400ml 蒸馏水的烧杯中加入 2粒苛性钠，溶解后加入3.73g EDTA-Na2，加热使其全部溶 解，然后边搅拌边慢慢加入2.78g FeSO4.7H2O直至全部溶 解，冷却后定容至500ml，置于冰箱中备用