多克隆抗体概念 抗原通常是由多个抗原决定簇组成的,由多种抗原决定簇刺 激机体,相应地就活化多个B淋巴细胞克隆,所产生多个单克隆 抗体(McAb)的混合物,此即为多克隆抗体 实验原理 当抗原刺激机体免疫系统,B细胞在T细胞的辅助下(多数 抗原需要T细胞参与),识别抗原的B细胞表位(T细胞识别T细 胞表位)后,T细胞和B细胞均活化,由B细胞针对抗原的B细胞 表位产生的能与抗原B细胞表位结合并发挥生物学功能的兔疫球 蛋白。 人卫定曲版法
抗原通常是由多个抗原决定簇组成的,由多种抗原决定簇刺 激机体,相应地就活化多个B淋巴细胞克隆,所产生多个单克隆 抗体(McAb)的混合物,此即为多克隆抗体。 多克隆抗体概念 当抗原刺激机体免疫系统,B细胞在T细胞的辅助下(多数 抗原需要T细胞参与),识别抗原的B细胞表位(T细胞识别T细 胞表位)后,T细胞和B细胞均活化,由B细胞针对抗原的B细胞 表位产生的能与抗原B细胞表位结合并发挥生物学功能的免疫球 蛋白。 实验原理
实验器材和材料 菌种:伤寒沙门菌O901和伤寒沙门菌H901菌株。 ☆动物:体重在25kg左右的健康青年新西兰家兔。 ◇培养基:细菌普通肉汤培养基、细菌普通固体培养基。 试剂 人G、羊毛脂、石蜡油、注射用卡介苗、二甲 委酸歪里菇:箱3能街李.5%无面石 人氏卫士出版 PEOLESM DEAL PUOLRGN成
❖ 菌种:伤寒沙门菌O901和伤寒沙门菌H901菌株。 ❖ 动物:体重在2.5kg左右的健康青年新西兰家兔。 ❖ 培养基:细菌普通肉汤培养基、细菌普通固体培养基。 ❖ 试剂: 人IgG、羊毛脂、石蜡油、注射用卡介苗、二甲 苯、无菌生理盐水、0.5%无菌甲醛盐水、0.5%无菌石 灰酸盐水、2 % NaN3和3 %戊巴比妥钠等。 实验器材和材料
器械细菌接种环、16号钢质注 头(或7号置置钍 器三通阍阀 5m无 璃腐注 兔子固定 灭菌 烧(20m)和烧杯(200m)、平皿(置径9cm) -500m细菌离心瓶。 ☆仪器:37℃恒 37℃恒温气浴 摇床 低温高速大蓉量离心机(水平转字,室少能滴是5m离心 的离心)。 人卫定曲版法
❖ 器械:细菌接种环、16号钢质注射针头(或7号留置针)、 注射器三通阀、5ml无菌玻璃注射器、兔子固定架,灭菌 三角烧瓶(200 ml)和烧杯(200 ml)、平皿(直径9 cm) 等。 ❖ 其他:酒精棉、脱脂棉、塑料放血管、纱布、800ml细菌 培养用克氏培养瓶,标准麦氏比浊管和50ml圆底进口离心 管或100~500ml细菌离心瓶。 ❖ 仪器:37℃恒温培养箱、37℃恒温气浴(或水浴)摇床、 低温高速大容量离心机(水平转子,至少能满足50ml离心 管的离心)
实验方法 抗颗粒性抗原抗体制备程序 伤寒沙门菌0901、H901 0901、H901菌液 耳缘静脉注射(1×10°/ml) ↓難孟唇驛薑 免疫序第1天第5天第10第15天 免疫剂量0.5m 1.5ml l孟中里永露餐 无菌试验(37℃恒温摇床) 耳正中动脉采血 充袋 量低温高速离 哥心收集细菌 试管凝集试验鉴定 人氏卫士出版 PEOPLESUICALE忘成
抗颗粒性抗原抗体制备程序 实验方法 免疫时序 第1天 第5天 第10天 第15天 第20天 免疫剂量 0.5ml 1ml 1.5ml 2ml 2.5ml 18~24h后,用无菌生 理盐水菌苔洗下接种 伤寒沙门菌O901、H901 18~24h后,分别用无菌0.5%石灰 酸盐水和甲醛生理盐水洗下菌苔 无菌试验(37℃恒温摇床) 大容量低温高速离 心机离心收集细菌 O901、H901菌液 耳缘静脉注射(1×109 /ml ) 耳正中动脉采血 试管凝集试验鉴定
抗可溶性抗原抗体制备程序 弗氏不完全佐剂羊毛脂1份+石腊油5份 Q背部多点速射 免疫时序第周第3周 免疫剂量|1ml, 200ug 混合高压灭菌 耳缘静脉最后耳缘静脉 加強免疫 耳正中动脉 用人IgG与不完全佐剂按 弗氏完全佐剂11体积比加入,卡介苗的 终浓度为1~20mg/ml 耳缘静脉釆血 抗体效价滴定 推成油包水制剂 人卫定曲版法
羊毛脂1份 + 石腊油5份 抗可溶性抗原抗体制备程序 弗氏不完全佐剂 弗氏完全佐剂 混合高压灭菌 用人IgG与不完全佐剂按 1:1体积比加入,卡介苗的 终浓度为1~20 mg/ml。 推成油包水制剂 背部多点注射 免疫时序 第1周 第3周 第4周 第5周 免疫剂量 1ml, 200μg 1ml 100μg 1.5ml 150μg 2ml 200μg 最后耳缘静脉 注射加强免疫 耳缘静脉 耳正中动脉 耳缘静脉采血 1 2 3 4 5 6 抗体效价滴定
注意事项 选择合适的动物种属及品系;良好的抗原质量 和合适的剂量;合理的修饰;适当的佐剂、免疫强 度和免疫途径,有助于提高兔疫效果;动物的健康 状况等。 人卫定曲版法
注意事项 选择合适的动物种属及品系;良好的抗原质量 和合适的剂量;合理的修饰;适当的佐剂、免疫强 度和免疫途径,有助于提高免疫效果;动物的健康 状况等