第二十章高效液相色谱法high performance liquidchromatograph HPLC
第二十章 高效液相色谱法 high performance liquid chromatograph HPLC
口慢色谱分离中等●快淋洗液川RTemporal串course8豆
慢 中等 快 色谱分离 Temporal course 淋洗液
由于液体与气体性质的以下差异： 溶质在液体中的扩散系数处比它在气体中小105倍左右 液体粘度比气体约大102倍 液体表面张力比气体大104倍左右 液体密度比气体约大103倍 液体不可压缩 我们通常所说的高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography)实际也是高压液相色谱(High Pressure Liquid Chromatography),因为没有很高的压力 就不可能产生很高的分离效率
由于液体与气体性质的以下差异： •溶质在液体中的扩散系数比它在气体中小105倍左右 •液体粘度比气体约大102倍 •液体表面张力比气体大104倍左右 •液体密度比气体约大103倍 •液体不可压缩 我们通常所说的高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography)实际也是高压液相色谱(High Pressure Liquid Chromatography),因为没有很高的压力 就不可能产生很高的分离效率
一、HPLC与GC差别 ·相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 。 主要差别：分析对象和流动相的差别 1.分析对象 GC:能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品 高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及 高聚物的样品不可检测 占有机物的20% HPLC:溶解后能制成溶液的样品 不受样品挥发性和热稳定性的限制 分子量大、难气化、热稳定性差及高分子 和离子型样品均可检测 用途广泛，占有机物的80%
一、HPLC与GC差别 • 相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 • 主要差别：分析对象和流动相的差别 1．分析对象 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品， 高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及 高聚物的样品不可检测 占有机物的20% HPLC：溶解后能制成溶液的样品， 不受样品挥发性和热稳定性的限制 分子量大、难气化、热稳定性差及高分子 和离子型样品均可检测 用途广泛，占有机物的80%
2.流动相差别&GC：流动相为情性气体·组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用HPLC：流动相为液体流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性改善分离度增加了因素，对分离起很大作用流动相种类较多，选余地厂流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相可以增大分离选择性3.操作条件差别GC：加温操作HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）
2．流动相差别 ❖ GC：流动相为惰性气体 • 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 ❖ HPLC：流动相为液体 • 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、 改善分离度增加了因素，对分离起很大作用 • 流动相种类较多，选择余地广 • 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 可以增大分离选择性 3．操作条件差别 GC：加温操作 HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）
、HPLC与经典LC区别主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段1.经典LC：仅做为一种分离手段柱内径1-3cm，固定相粒径>100μm且不均匀常压输送流动相柱效低（H↑，nl）分析周期长无法在线检测2.HPLC分离和分析柱内径2-6mm，固定相粒径<10um球形，匀浆装柱高压输送流动相柱效高（HI，n）分析时间大大缩短公司以在线检测
二、HPLC与经典LC区别 ✓ 主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段 1．经典LC：仅做为一种分离手段 柱内径1－3cm，固定相粒径>100μm 且不均匀 常压输送流动相 柱效低（H↑，n↓） 分析周期长 无法在线检测 2．HPLC：分离和分析 柱内径2－6mm，固定相粒径<10μm 球形，匀浆装柱 高压输送流动相 柱效高（H↓，n↑） 分析时间大大缩短 可以在线检测
三、HPLC的特点"一广“四高”·高效理论塔板数104~105·高速完成一次分离只需几分钟到几十分钟·高灵敏度最小检测量可达10-9~10-11g·高度自动化应用范围广泛（可分析80%有机化合物）
三、HPLC的特点 • 高效 理论塔板数104～105 • 高速 完成一次分离只需几分钟到几十分钟 • 高灵敏度 最小检测量可达10－9～10－11g • 高度自动化 • 应用范围广泛（可分析80%有机化合物） “四高” “一广
应用：各种药物及其制剂的分析测定，生物样品、中药等复杂体系的成分分离分析有极其重要的作用；同时与多种仪器由技术连用，得到更广泛的应用和发展
应用： 各种药物及其制剂的分析测定，生 物样品、中药等复杂体系的成分分离分 析有极其重要的作用；同时与多种仪器 由技术连用，得到更广泛的应用和发展
第一节高效液相色谱的分类按溶质在分离过程中的原理：吸附色谱分配色谱离子交换色谱体积排阻色谱亲和色谱
第一节 高效液相色谱的分类 按溶质在分离过程中的原理： • 吸附色谱 • 分配色谱 • 离子交换色谱 • 体积排阻色谱 • 亲和色谱
1、液-固吸附色谱liquid-solid adsorption chromatography固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5~10m的硅胶吸附剂；流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；
1、液-固吸附色谱 liquid-solid adsorption chromatography 固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的 是5～10μm的硅胶吸附剂； 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能 团的化合物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；