
昆虫学研究技术实验指导(植保专业适用)
昆虫学研究技术实验指导 (植保专业适用)

目录实验一昆虫形态特征的文字描述..(1)实验二昆虫形态构造的科学绘图.(4)实验三昆虫的饲养及生活史观察....)实验四昆虫乙酰胆碱酯酶活性的测定....(8)实验五蛋白质含量测定(考马斯亮蓝G-250法)..(9)实验六聚丙烯酰胺凝胶电泳..(.11)实验七微小昆虫玻片标本的制作..(14)实验八昆虫学文献的网络检索.(16)附录主要参考书及参考文献...(18)
目 录 实验一 昆虫形态特征的文字描述.(1) 实验二 昆虫形态构造的科学绘图.(4) 实验三 昆虫的饲养及生活史观察.(6) 实验四 昆虫乙酰胆碱酯酶活性的测定.(8) 实验五 蛋白质含量测定(考马斯亮蓝 G-250 法).(9) 实验六 聚丙烯酰胺凝胶电泳.(11) 实验七 微小昆虫玻片标本的制作.(14) 实验八 昆虫学文献的网络检索.(16) 附录 主要参考书及参考文献.(18)

实验一昆虫形态特征的文字描述一、实验目的通过细心观察常见种类昆虫形态结构,应用昆虫形态学和科学名词方面的知识,正确运用文字,真实、准确的描述和记载昆虫的形态特征。二、实验材料1.浸渍标本:蝗虫、蜜蜂、家蝇、菜粉蝶幼虫、家蚕幼虫,供解剖观察。2.针插标本:蝗虫或蟋蜂、步行虫(步甲)、蝉,供观察头型。3.玻片标本:各类型触角、足及口器横切面。三、实验内容及方法:1.体驱外形的观察和描述一观察蝗虫浸渍标本。感觉和取食中心:体表为坚硬的外骨骼,整个体驱分头、胸、腹三部分。头部各体节愈合,成为坚硬的头壳,上具一对触角,一对复眼,三个单眼和由三对附肢特化而成的口器(注意着生部位)。行动中心:胸部有前胸、中胸、后胸三个体节(胸节),腹侧方各具足(附肢)一对,中后胸背侧方各具翅一对。生殖和代谢中心:腹部由十一个体节(腹节)组成,内藏各种内脏器官,第8,9腹节(早)或第9腹节()具外生殖器,第11腹节具有尾须1对。2.头部的形式:昆虫的头部,根据口器的位置,可分为三种形式:(1)下口式:观察蝗虫或蟋蜂,口器向下,与体驱纵轴垂直。(2)前口式:观察步行虫,口器向前,与体驱纵轴成一锐角。(3)后口式:观察蝉,口器伸向下后方,与体驱纵轴成一锐角。3.触角的基本构造及变化类型:观察昆虫触角各类玻片标本。昆虫的触角由三部分组成:基部的柄节,第二节的梗节,其余各节统称为鞭节。鞭节的节数和形状变化很大,形成各种类型,这是识别昆虫种类和性别的重要依据。(1)丝形(线形):细长如丝,各节长筒形,如蝗虫。(2)串珠形(念珠形):各节如珠,连接如一串珠,如白蚁。(3)鬃形(刚毛形):触角很短,基部一、二节较大,其余各节突然缩小,尖细如鬃毛,如叶蝉、蝉、蜻蜓。1
1 实验一 昆虫形态特征的文字描述 一、实验目的 通过细心观察常见种类昆虫形态结构,应用昆虫形态学和科学名词方面的知识,正确运 用文字,真实、准确的描述和记载昆虫的形态特征。 二、实验材料 1.浸渍标本:蝗虫、蜜蜂、家蝇、菜粉蝶幼虫、家蚕幼虫,供解剖观察。 2.针插标本:蝗虫或蟋蟀、步行虫(步甲)、蝉,供观察头型。 3.玻片标本:各类型触角、足及口器横切面。 三、实验内容及方法: 1.体躯外形的观察和描述—观察蝗虫浸渍标本。 感觉和取食中心:体表为坚硬的外骨骼,整个体躯分头、胸、腹三部分。头部各体节愈 合,成为坚硬的头壳,上具一对触角,一对复眼,三个单眼和由三对附肢特化而成的口器(注 意着生部位)。 行动中心:胸部有前胸、中胸、后胸三个体节(胸节),腹侧方各具足(附肢)一对, 中后胸背侧方各具翅一对。 生殖和代谢中心:腹部由十一个体节(腹节)组成,内藏各种内脏器官,第 8,9 腹节 (♀)或第 9 腹节(♂)具外生殖器,第 11 腹节具有尾须 1 对。 2.头部的形式: 昆虫的头部,根据口器的位置,可分为三种形式: (1)下口式:观察蝗虫或蟋蟀,口器向下,与体躯纵轴垂直。 (2)前口式:观察步行虫,口器向前,与体躯纵轴成一锐角。 (3)后口式:观察蝉,口器伸向下后方,与体躯纵轴成一锐角。 3.触角的基本构造及变化类型: 观察昆虫触角各类玻片标本。昆虫的触角由三部分组成:基部的柄节,第二节的梗节, 其余各节统称为鞭节。鞭节的节数和形状变化很大,形成各种类型,这是识别昆虫种类和性 别的重要依据。 (1)丝形(线形):细长如丝,各节长筒形,如蝗虫。 (2)串珠形(念珠形):各节如珠,连接如一串珠,如白蚁。 (3)鬃形(刚毛形):触角很短,基部一、二节较大,其余各节突然缩小,尖细如鬃毛, 如叶蝉、蝉、蜻蜓

(4)棒形(球杆形):基部各节细如杆,至端部渐次膨大,如蝶类。(5)锤形:端部数节突然膨大,形状如锤,如小蠹虫、皮蠹、米露尾虫。(6)锯齿形:各节端部一角向一侧突出,似锯齿,如头虫、绿豆象(早)。(7)栉齿形(梳形):各节一侧突起成细枝状,如绿豆象()。(8)羽形(双栉齿形):各节两侧均突起成成细枝状,如家蚕蛾,天蚕蛾。(9)鳃叶形:端部数节侧扁成片状,并合如鳃片,如金龟子。(10)膝形:柄节长,与梗节及鞭节间折成膝肘状,如蜜蜂、蚂蚁。(11)环毛形:各节轮生长毛,如雄蚊。(12)具芒形:粗短,仅三节,第三节上有一触角芒,如蝇类。4.口器观察昆虫口器各类玻片标本。(1)咀嚼式口器咀嚼式口器是昆虫口器的原始类型,适于咀嚼固体食物其它口器都是由其演化而来的。观察蝗虫口器玻片标本,认识各部的基本构造,了解各自与附肢的同源关系及功能(2)刺吸式口器适于刺吸液态食物,各部构造均特化。观察蝉的喙横断面示范标本,理解下唇、上颚、下颚的嵌合方式及食物道,涎管的组成及取食方式的改变和口器各部的特化。(3)嚼吸式口器嚼吸式口器是咀嚼式口器和刺吸式口器的中间类型,其构造和摄食方式也正是两者兼有。观察蜜蜂口器玻片标本,认识喙的各部特征。(4)虹吸式口器适于吸收液体食物,构造简单,为蝶、蛾成虫所特有,以菜粉蝶为例进行观察。(5)吸式口器为蝇类特有,以家蝇头部及其口器玻片标本进行观察。整个口器在头部下方,呈粗筒状,自基部至端部可分喙节(基喙)、节(中喙)、口盘(端喙)三部分。(6)锉吸式口器观察蓟马口器玻片标本。头部下方有一短喙,由上颚、下颚一部分和下唇合并特化而成,喙内具三枚口针,二枚为下颚口针,一枚为左上颚口针(右上常退化)。口针能上下收缩取食时先以左上颚口针锉破植物表皮,然后以下颚口针组成食物道吸取液汁。5.昆虫形态特征的文字描述(1)记载文体对于形态描述记载要做到文本简明扼要,尽可能做到“增一字嫌多,减一字则少”:正确使用标点符号:要遵循陈述的逻辑测序。(2)性状的次序2
2 (4)棒形(球杆形):基部各节细如杆,至端部渐次膨大,如蝶类。 (5)锤形:端部数节突然膨大,形状如锤,如小蠹虫、皮蠹、米露尾虫。 (6)锯齿形:各节端部一角向一侧突出,似锯齿,如叩头虫、绿豆象(♀)。 (7)栉齿形(梳形):各节一侧突起成细枝状,如绿豆象(♂)。 (8)羽形(双栉齿形):各节两侧均突起成成细枝状,如家蚕蛾,天蚕蛾。 (9)鳃叶形:端部数节侧扁成片状,并合如鳃片,如金龟子。 (10)膝形:柄节长,与梗节及鞭节间折成膝肘状,如蜜蜂、蚂蚁。 (11)环毛形:各节轮生长毛,如雄蚊。 (12)具芒形:粗短,仅三节,第三节上有一触角芒,如蝇类。 4.口器 观察昆虫口器各类玻片标本。 (1)咀嚼式口器 咀嚼式口器是昆虫口器的原始类型,适于咀嚼固体食物;其它口器都是由其演化而来 的。观察蝗虫口器玻片标本,认识各部的基本构造,了解各自与附肢的同源关系及功能。 (2)刺吸式口器 适于刺吸液态食物,各部构造均特化。观察蝉的喙横断面示范标本,理解下唇、上颚、 下颚的嵌合方式及食物道,涎管的组成及取食方式的改变和口器各部的特化。 (3)嚼吸式口器 嚼吸式口器是咀嚼式口器和刺吸式口器的中间类型,其构造和摄食方式也正是两者兼有。 观察蜜蜂口器玻片标本,认识喙的各部特征。 (4)虹吸式口器 适于吸收液体食物,构造简单,为蝶、蛾成虫所特有,以菜粉蝶为例进行观察。 (5)舐吸式口器 为蝇类特有,以家蝇头部及其口器玻片标本进行观察。整个口器在头部下方,呈粗筒状, 自基部至端部可分喙节(基喙)、吮节(中喙)、口盘(端喙)三部分。 (6)锉吸式口器 观察蓟马口器玻片标本。头部下方有一短喙,由上颚、下颚一部分和下唇合并特化而成, 喙内具三枚口针,二枚为下颚口针,一枚为左上颚口针(右上颚常退化)。口针能上下收缩, 取食时先以左上颚口针锉破植物表皮,然后以下颚口针组成食物道吸取液汁。 5.昆虫形态特征的文字描述 (1)记载文体 对于形态描述记载要做到文本简明扼要,尽可能做到“增一字嫌多,减一字则少”;正确 使用标点符号;要遵循陈述的逻辑测序。 (2)性状的次序

根据记载目的不同,记载的性状次序也有所不同。①鉴别性记载:按照性状在鉴别上的重要程度依次叙述。这将便于很快的识别。②完整的记载:通常按照标准化的自然顺序依次叙述。例如记载时把虫体分段叙述,如头、胸、腹、翅、生殖器.,且由前到后,由背到腹。(3)记载的方位①昆虫体驱的记载:将昆虫体背在上,腹在下,头在前,翅展开。通常在胸部和腹部的交界处设一想象的中心点。各个器官组织的近中点部分称为基部,远中心点的部分称端部。再假设一条纵行的中轴线,不但可以以此区分左右,还可将近轴者记载为内,远轴者为外。②昆虫翅的记载:一般是将右侧翅取下,将翅分为三个角,即肩角、顶角、臀角和三个缘,即前缘、外缘、后缘。再以翅脉的走向,区分为纵脉与横脉以及翅面上的斑纹位置。(4)数字资料记载数字资料是测量性状,需用测量工具,因数字性状在同种昆虫的个体间是有差异的,所以需要多测一些个体,记录其伸缩范围。记录时需注意以下几点:①体长记载以头顶至腹末为准,不应包括触角及尾须。②翅展一般记录一对前翅的拉伸宽度。③身体的宽度应写明度量的位置,是胸部还是腹部。(5)颜色记载在许多类群中,颜色是重要的鉴别性状之一。为了记载的一致,应以新鲜标本为准并参考国家标准色谱给予描述。因为颜色深浅是一种连续特征,可记一个颜色范围。这些都需根据鉴别的要求,灵活掌握。四、思考题1.观察所给标本,认识昆虫体驱外形的一般特征。2.观察所给标本,任选一标本昆虫对其形态进行描述,描述要包括该昆虫的体型大小、头部形式、触角及口器类型、有无单眼、前胸背板情况、翅的长度和类型、足的分节及类型、腹部节数及特征。3
3 根据记载目的不同,记载的性状次序也有所不同。 ①鉴别性记载:按照性状在鉴别上的重要程度依次叙述。这将便于很快的识别。 ②完整的记载:通常按照标准化的自然顺序依次叙述。例如记载时把虫体分段叙述,如头、 胸、腹、翅、生殖器.,且由前到后,由背到腹。 (3)记载的方位 ①昆虫体躯的记载:将昆虫体背在上,腹在下,头在前,翅展开。通常在胸部和腹部的交界 处设一想象的中心点。各个器官组织的近中点部分称为基部,远中心点的部分称端部。再假 设一条纵行的中轴线,不但可以以此区分左右,还可将近轴者记载为内,远轴者为外。 ②昆虫翅的记载:一般是将右侧翅取下,将翅分为三个角,即肩角、顶角、臀角和三个缘, 即前缘、外缘、后缘。再以翅脉的走向,区分为纵脉与横脉以及翅面上的斑纹位置。 (4)数字资料记载 数字资料是测量性状,需用测量工具,因数字性状在同种昆虫的个体间是有差异的,所 以需要多测一些个体,记录其伸缩范围。记录时需注意以下几点: ①体长记载以头顶至腹末为准,不应包括触角及尾须。 ②翅展一般记录一对前翅的拉伸宽度。 ③身体的宽度应写明度量的位置,是胸部还是腹部。 (5)颜色记载 在许多类群中,颜色是重要的鉴别性状之一。为了记载的一致,应以新鲜标本为准并参考国 家标准色谱给予描述。因为颜色深浅是一种连续特征,可记一个颜色范围。这些都需根据鉴 别的要求,灵活掌握。 四、思考题 1.观察所给标本,认识昆虫体躯外形的一般特征。 2.观察所给标本,任选一标本昆虫对其形态进行描述,描述要包括该昆虫的体型大小、头部 形式、触角及口器类型、有无单眼、前胸背板情况、翅的长度和类型、足的分节及类型、腹 部节数及特征

实验二昆虫形态构造的科学绘图一、实验目的掌握应用科学绘图(生物科学绘图要求以科学性为标准,所谓科学性就是要求形态正确,比例正确,倍数正确,色彩正确,其次要求画面清洁和精细美观)的方法描述昆虫的形态特征。二、实验材料1-3H铅笔、橡皮、量尺、画板、两脚规、放大镜、绘图小钢笔、九宫格透明胶片和硫酸纸及绘图墨水、昆虫针插标本。三、描绘草图的方法1.蒙绘这种方法适用于大型、平展的昆虫,如大型蝶或蛾。将展好翅不带虫针的标本安放在平面上,四周加垫,在垫上放平板玻璃,然后在玻璃上用墨笔勾画轮廓,色斑界线。取下玻璃,在透光的位置蒙以白纸或硫酸纸描出图形。2.反射描绘适用于大型昆虫,如蝶类、蛾、蝗虫等。在桌子上竖直的放一块玻璃,在玻璃的左边放置要画的标本,玻璃的右边铺一张纸。光线从右侧照射,绘图人的头略偏玻璃的左面,眼睛透过玻璃及可看到右侧纸面上有标本的映射影像,用铅笔勾画出影像即可得到与原物同样大小的影像图,它的左右与实物相反。3.九宫格法应用现有的九营格绘图纸,也可应用使用透明胶片制作的九宫格。将方格平放在虫体上,四角用与虫体一样厚度的软木塞填充,以免压坏标本。依据所要放大的倍数在图纸上用铅笔也轻轻地划上方格,通过方格观察昆虫,把看到的分块画到纸上相应的方格中。四、图稿上墨和着色铅笔草图完成后,需要上墨和看色。上墨主要采用黑墨点线画法1.点线结合绘图,用点表示不同颜色和身体的凹凸,用线表示节间或骨片的分界、毛和刺等,同时还可以表现节与节、面与面的分界、表现阴阳、色彩、质地和远近。2.点要点得圆、点得匀,粗细、疏密应符合虫体浓淡明睹的要求。点的排列,要保持整齐、均匀,同时又要在整齐、均匀中求变化,明的、色淡的部分,点小些、稀些,暗的与色深的部分,点要大些、密些。4
4 实验二 昆虫形态构造的科学绘图 一、实验目的 掌握应用科学绘图(生物科学绘图要求以科学性为标准,所谓科学性就是要求形态正确, 比例正确,倍数正确,色彩正确,其次要求画面清洁和精细美观)的方法描述昆虫的形态特 征。 二、实验材料 1-3H 铅笔、橡皮、量尺、画板、两脚规、放大镜、绘图小钢笔、九宫格透明胶片和硫 酸纸及绘图墨水、昆虫针插标本。 三、描绘草图的方法 1.蒙绘 这种方法适用于大型、平展的昆虫,如大型蝶或蛾。将展好翅不带虫针的标本安放在平 面上,四周加垫,在垫上放平板玻璃,然后在玻璃上用墨笔勾画轮廓,色斑界线。取下玻璃, 在透光的位置蒙以白纸或硫酸纸描出图形。 2.反射描绘 适用于大型昆虫,如蝶类、蛾、蝗虫等。在桌子上竖直的放一块玻璃,在玻璃的左边放 置要画的标本,玻璃的右边铺一张纸。光线从右侧照射,绘图人的头略偏玻璃的左面,眼睛 透过玻璃及可看到右侧纸面上有标本的映射影像,用铅笔勾画出影像即可得到与原物同样大 小的影像图,它的左右与实物相反。 3.九宫格法 应用现有的九宫格绘图纸,也可应用使用透明胶片制作的九宫格。将方格平放在虫体上, 四角用与虫体一样厚度的软木塞填充,以免压坏标本。依据所要放大的倍数在图纸上用铅笔 也轻轻地划上方格,通过方格观察昆虫,把看到的分块画到纸上相应的方格中。 四、图稿上墨和着色 铅笔草图完成后,需要上墨和着色。上墨主要采用黑墨点线画法。 1.点线结合绘图,用点表示不同颜色和身体的凹凸,用线表示节间或骨片的分界、毛和刺等, 同时还可以表现节与节、面与面的分界、表现阴阳、色彩、质地和远近。 2.点要点得圆、点得匀,粗细、疏密应符合虫体浓淡明睹的要求。点的排列,要保持整齐、 均匀,同时又要在整齐、均匀中求变化,明的、色淡的部分,点小些、稀些,暗的与色深的 部分,点要大些、密些

五、思考题1.根据所给标本,应用本实验介绍的任意一种昆虫绘图方法,绘制出一张完整的昆虫标本图,要求铅笔绘制草图同时用点线法着墨。2.思考成功绘制昆虫形态结构图的关键要素。5
5 五、思考题 1.根据所给标本,应用本实验介绍的任意一种昆虫绘图方法,绘制出一张完整的昆虫标本图, 要求铅笔绘制草图同时用点线法着墨。 2.思考成功绘制昆虫形态结构图的关键要素

实验三昆虫的饲养及生活史观察一、实验目的通过观察和饲养昆虫,掌握昆虫饲养的技术和不同虫态、变态等特征,了解昆虫生活史提高动手能力。二、实验材料寄主植物或人工饲料、养虫笼(盒)、虫源。三、实验内容和方法(一)亚洲小车蝗1.材料准备(1)寄主植物:小麦苗或者玉米苗。(2)养虫笼(盒):透气、透光、防逃逸。(3)虫源:卵、蝗。2.饲养与生活史观察(1)卵:孵化后接入养虫笼(2)蝗蜻:将小麦苗等放在养虫盒中,然后接入低龄蝗楠。根据需要加入寄主植物,观察蝗虫生长发育情况。(二)小菜蛾1.材料准备青菜种子,生物有机复合肥,养虫杯,智能人工气候箱,养虫笼。2.饲养与生活史观察(1)卵的收集将长至4cm左右的菜苗放入成虫的养虫笼中,待成虫产卵。(2)卵的孵化及幼虫观察将更换出的带虫卵的菜苗放入人工气候箱(温度24℃,光周期L:D=14:10)待卵孵化后,观察幼虫的生长发育过程。(3)蛹的收集将绿色的老熟幼虫用毛笔收集起来,放入干净并垫有滤纸的培养皿中,皿内放入少量甘蓝叶片,再用保鲜膜将培养皿封住,并用昆虫针在保鲜膜上扎数孔。2-3天后,大部分虫将化蛹。(4)羽化6
6 实验三 昆虫的饲养及生活史观察 一、实验目的 通过观察和饲养昆虫,掌握昆虫饲养的技术和不同虫态、变态等特征,了解昆虫生活史, 提高动手能力。 二、实验材料 寄主植物或人工饲料、养虫笼(盒)、虫源。 三、实验内容和方法 (一)亚洲小车蝗 1.材料准备 (1)寄主植物:小麦苗或者玉米苗。 (2)养虫笼(盒):透气、透光、防逃逸。 (3)虫源:卵、蝗蝻。 2.饲养与生活史观察 (1)卵:孵化后接入养虫笼 (2)蝗蝻:将小麦苗等放在养虫盒中,然后接入低龄蝗蝻。根据需要加入寄主植物,观察 蝗虫生长发育情况。 (二)小菜蛾 1.材料准备 青菜种子,生物有机复合肥,养虫杯,智能人工气候箱,养虫笼。 2.饲养与生活史观察 (1)卵的收集 将长至 4cm 左右的菜苗放入成虫的养虫笼中,待成虫产卵。 (2)卵的孵化及幼虫观察 将更换出的带虫卵的菜苗放入人工气候箱(温度 24℃,光周期 L:D=14:10)待卵孵化 后,观察幼虫的生长发育过程。 (3)蛹的收集 将绿色的老熟幼虫用毛笔收集起来,放入干净并垫有滤纸的培养皿中,皿内放入少量甘 蓝叶片,再用保鲜膜将培养皿封住,并用昆虫针在保鲜膜上扎数孔。2-3 天后,大部分虫将 化蛹。 (4)羽化

将蛹放入养虫箱内羽化。四、思考题1.设计表格详细记录亚洲小车蝗或小菜蛾各发育阶段的变化(体长、体色、生活习性等)?2.各组分别统计分析亚洲小车蝗或小菜蛾的卵孵化率,化蛹率(仅小菜蛾),羽化率?7
7 将蛹放入养虫箱内羽化。 四、思考题 1.设计表格详细记录亚洲小车蝗或小菜蛾各发育阶段的变化(体长、体色、生活习性等)? 2.各组分别统计分析亚洲小车蝗或小菜蛾的卵孵化率,化蛹率(仅小菜蛾),羽化率?

实验四昆虫乙酰胆碱酯酶活性的测定一、实验目的:掌握昆虫乙酰胆碱酯酶活性测定的方法、原理。二、实验材料1.供试昆虫:桃蚜(或其他昆虫)2.供试药剂:碘化硫代乙酰胆碱(acetylthiocholineiodide,ATCh),5.5-二硫双硝基苯甲酸(5,5'-dithio-bis-2-nitrobenzoicacid,DTNB),TritonX-100,牛血清白蛋白(BSA)、考马斯亮蓝G-250。3.仪器:分光光度计三、实验方法1.酶液制备:取桃蚜成虫(或其他昆虫)若干,用适量预冷的0.02mol/L,pH7.0(含0.1%TritonX-100)的磷酸盐缓冲液匀浆。4℃,10000×g离心15min,取上清液为酶源。2.乙酰胆碱酯酶比活力的测定取待测酶液0.25μL与0.25μLATCh混匀,30℃反应15min后加入0.9mL显色剂(DTNB)并中止反应,在412nm测定光密度(OD)值。AChE催化ATCh水解产生硫代胆碱和乙酸。硫代胆碱与DTNB结合生成黄色的5-硫-2-硝基苯甲酸盐离子,此物质在412nm处有最大吸收峰。按AChE的比活力(μmol-minmg)=(AOD/mg×V)/exL,计算棉蚜AChE的比活力值。其中:△OD=OD/反应时间(单位为min):V为反应总体积(单位为mL);ε为产物与DTNB络合物的摩尔消光系数=13600L/moL/cm;L为比色杯的光程=1cm。四、思考题1.思考用分光光度法测定乙酰胆碱酯酶比活力的原理?2.按实验方法和步骤测定给定昆虫的乙酰胆碱酯酶比活力值?8
8 实验四 昆虫乙酰胆碱酯酶活性的测定 一、实验目的: 掌握昆虫乙酰胆碱酯酶活性测定的方法、原理。 二、实验材料 1.供试昆虫:桃蚜(或其他昆虫) 2.供试药剂:碘化硫代乙酰胆碱(acetylthiocholine iodide, ATCh),5,5’-二硫双硝基苯甲酸 (5,5’-dithio-bis-2-nitrobenzoic acid, DTNB),Triton X-100,牛血清白蛋白 (BSA)、考马斯亮 蓝 G-250。 3.仪器:分光光度计 三、实验方法 1.酶液制备: 取桃蚜成虫(或其他昆虫)若干,用适量预冷的 0.02mol/L,pH7.0(含 0.1% Triton X- 100) 的磷酸盐缓冲液匀浆。4℃,10000×g 离心 15min,取上清液为酶源。 2.乙酰胆碱酯酶比活力的测定 取待测酶液 0.25 μL 与 0.25 μL ATCh 混匀,30 ℃ 反应 15min 后加入 0.9 mL 显色剂 (DTNB)并中止反应,在 412 nm 测定光密度(OD)值。AChE 催化 ATCh 水解产生硫代胆 碱和乙酸。硫代胆碱与 DTNB 结合生成黄色的 5-硫-2-硝基苯甲酸盐离子,此物质在 412 nm 处有最大吸收峰。 按 AChE 的比活力(μmol·min-1 ·mg -1)=(∆OD/mg×V) /ε×L, 计算棉蚜 AChE 的比活力 值。 其中:∆OD=OD/反应时间(单位为 min);V 为反应总体积(单位为 mL);ε 为产物与 DTNB 络合物的摩尔消光系数=13600 L/moL/cm;L 为比色杯的光程=1 cm。 四、思考题 1.思考用分光光度法测定乙酰胆碱酯酶比活力的原理? 2.按实验方法和步骤测定给定昆虫的乙酰胆碱酯酶比活力值?