实验六细菌的生理生化试验 山东理工大学生命科学学院 微生物学教研组 2019年4月 04/06/2025
实验六 细菌的生理生化试验 山东理工大学生命科学学院 微生物学教研组 2019年4月 04/06/2025 1
提纲 1实验目的 2实验原理 3实验材料 4实验步骤 5注意事项 04/06/2025
提 纲 2 1 实验目的 2 实验原理 3 实验材料 4 实验步骤 5 注意事项 04/06/2025
1实验目的 1、巩固微生物无菌接种技术 2、了解细菌鉴定中常用的生理生化反应 原理和方法 3、学习利用生理生化反应鉴别菌种 04/06/2025
1、巩固微生物无菌接种技术 2、了解细菌鉴定中常用的生理生化反应 原理和方法 3、学习利用生理生化反应鉴别菌种 1 实验目的 04/06/2025 3
2实验原理 ◆微生物代谢与其他生物代谢有许多相似之处，也有 不同之处。 ◆微生物代谢重要特征之一，就是代谢类型的多样性， 因此使微生物在自然界的物质循环中起重要的作用， 同时也为人类开发利用微生物资源提供更多的机会 与途径。 ◆人们在微生物的分类鉴定工作中，常利用其生理生 化反应作用作为重要依据。 04/06/2025
◆ 微生物代谢与其他生物代谢有许多相似之处，也有 不同之处。 ◆ 微生物代谢重要特征之一，就是代谢类型的多样性， 因此使微生物在自然界的物质循环中起重要的作用， 同时也为人类开发利用微生物资源提供更多的机会 与途径。 ◆ 人们在微生物的分类鉴定工作中，常利用其生理生 化反应作用作为重要依据。 2 实验原理 04/06/2025 4
(1)淀粉水解试验 ◆微生物对大分子物质如淀粉等不能直接利用，必需 依靠胞外酶将大分子分解后才能利用。 ◆淀粉酶将淀粉水解为小分子的糊精、双糖和单糖 加入碘液后，在菌落周围产生变色圈。 04/06/2025
（1）淀粉水解试验 ◆ 微生物对大分子物质如淀粉等不能直接利用，必需 依靠胞外酶将大分子分解后才能利用。 ◆ 淀粉酶将淀粉水解为小分子的糊精、双糖和单糖， 加入碘液后，在菌落周围产生变色圈。 04/06/2025 5
(2)糖发酵试验 ◆糖发酵产生丙酮酸，丙酮酸裂解生成乙酰C0A与 甲酸。 ◆甲酸在甲酸氢解酶作用下可进一步裂解生成H2和 C02—产酸产气。 ◆缺少甲酸氢解酶—产酸不产气。 04/06/2025 6
（2）糖发酵试验 ◆ 糖发酵产生丙酮酸，丙酮酸裂解生成乙酰CoA与 甲酸。 ◆ 甲酸在甲酸氢解酶作用下可进一步裂解生成H2和 CO2—— 产酸产气。 ◆ 缺少甲酸氢解酶——产酸不产气。 04/06/2025 6
(3)甲基红试验(MR试验) ◆微生物进行混合酸发酵，产生各种有机酸→pH下 降→加入甲基红指示剂→显红色。 04/06/2025
（3）甲基红试验（MR试验） ◆ 微生物进行混合酸发酵，产生各种有机酸 → pH下 降→ 加入甲基红指示剂→ 显红色。 04/06/2025 7
(4)伏普试验(V.P.实验) CI CH CH CH 葡猫榭—一2(C0(02 (0 -CO; o 21I CHOH (C()1O)I1 COOH CHOH CHOH C CH CH, 丙刷酸 乙酰乳酸 乙酰甲基甲碎 2,3-丁二刚 4O11 -2H CH, CO fo 二乙庇 CH +HN-C H NH N=C≤N=C二C+2o CH 二乙酰 肌基 红色化合物 04/06/2025 8
（4）伏普试验（V.P.实验） 04/06/2025 8
(5)引哚试验 引哚试验用来检测引哚的产生。有些细 菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨 酸产生吲哚和丙酮酸。吲引哚与对二甲基氨 基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲引哚。 04/06/2025
吲哚试验用来检测吲哚的产生。有些细 菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨 酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨 基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。 （5）吲哚试验 04/06/2025 9
3实验材料 (1)培养基：淀粉培养基、糖发酵培养基、葡萄糖蛋白胨水 培养基、蛋白陈水培养基（每组配制1种培养基，供4个组使 用)。 (2)指示剂：卢戈碘液、甲基红指示剂、400g/LKoH、50g/儿 0-萘酚、乙醚、吲引哚试剂。 (3)实验菌种：枯草芽孢杆菌、 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、 绿脓杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌。 (4)实验器具：立式高压蒸汽灭菌锅，瓷量杯，量筒，玻 璃棒，天平，药匙，pH试纸，试管，德汉小管，胶塞，锥 形瓶，封口膜，平皿，报纸，马克笔，线绳，皮筋，胶管， 10mL注射器、超净工作台、恒温培养箱。 04/06/2025 10
（1）培养基：淀粉培养基、糖发酵培养基、葡萄糖蛋白胨水 培养基、蛋白胨水培养基（每组配制1种培养基，供4个组使 用）。 （2）指示剂：卢戈碘液、甲基红指示剂、400g/L KOH、50g/L -萘酚、乙醚、吲哚试剂。 （3）实验菌种： 枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、 绿脓杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌。 （4）实验器具： 立式高压蒸汽灭菌锅，瓷量杯，量筒，玻 璃棒，天平，药匙，pH试纸，试管，德汉小管，胶塞，锥 形瓶，封口膜，平皿，报纸，马克笔，线绳，皮筋，胶管， 10mL注射器、超净工作台、恒温培养箱。 3 实验材料 04/06/2025 10