第八章营养缺陷型菌株的筛选
第八章 营养缺陷型菌株的筛选
营养缺陷型菌株 从自然界分离到的微生物在其发生突变前的原始菌株， 称为野生型菌株(wild type strain)。 野生型菌株经过人工诱变或自发突变失去合成某种营 养（氨基酸、维生素、核酸等）的能力，只有在基本培养基 上补充所缺乏的营养因子才能生长，这类菌称为营养缺陷 型菌株(auxotroph strain)。 营养缺陷型菌株经回复突变或重组变异后产生的菌株 其营养要求在表型上与野生型相同，称为原养型 (prototroph)
从自然界分离到的微生物在其发生突变前的原始菌株， 称为野生型菌株(wild type strain)。 野生型菌株经过人工诱变或自发突变失去合成某种营 养(氨基酸、维生素、核酸等)的能力，只有在基本培养基 上补充所缺乏的营养因子才能生长，这类菌称为营养缺陷 型菌株(auxotroph strain)。 营养缺陷型菌株经回复突变或重组变异后产生的菌株， 其 营 养 要 求 在 表 型 上 与 野 生 型 相 同 ， 称 为 原养型 (prototroph)。 营养缺陷型菌株
在筛选营养缺陷型菌株过程中，有关的培养基有三类。 ①基本培养基(minimal medium,MM):仅能满足野生型 菌株生长需要的培养基，称为基础培养基，有时用“[-]”表 示。不同微生物的基本培养基是不相同的。 ②完全培养基(complete medium,CM):可满足一切营养 缺陷型菌株营养需要的天然或半合成培养基，称为完全培养 基，有时用“[+]”表示。完全培养基营养丰富、全面，一般 可在基本培养基中加入富含氨基酸、维生素和碱基之类的天 然物质配制而成。 ③补充培养基(supplemental medium,SM):只能满足相 应的营养缺陷型生长需要的合成培养基，称为补充培养基。 它是在基本培养基中加入该菌株不能合成的营养因子而组成 的。根据所加营养因子的种类不同而用[A)或[B]等来表示
在筛选营养缺陷型菌株过程中，有关的培养基有三类。 ①基本培养基(minimal medium，MM)：仅能满足野生型 菌株生长需要的培养基，称为基础培养基，有时用“[-]”表 示。不同微生物的基本培养基是不相同的。 ②完全培养基(complete medium，CM)：可满足一切营养 缺陷型菌株营养需要的天然或半合成培养基，称为完全培养 基，有时用“[+]”表示。完全培养基营养丰富、全面，一般 可在基本培养基中加入富含氨基酸、维生素和碱基之类的天 然物质配制而成。 ③补充培养基(supplemental medium，SM)：只能满足相 应的营养缺陷型生长需要的合成培养基，称为补充培养基。 它是在基本培养基中加入该菌株不能合成的营养因子而组成 的。根据所加营养因子的种类不同而用[A]或[B]等来表示
第一节、营养缺陷型菌株的分离和 筛选
第一节、营养缺陷型菌株的分离和 筛选
一、营养缺陷型的诱变 用于诱发营养缺陷型的诱变剂有亚硝基胍、紫外 线、亚硝酸等。其中亚硝基肌胍诱发频率极高，一般 可达10%
一、营养缺陷型的诱变 用于诱发营养缺陷型的诱变剂有亚硝基胍、紫外 线、亚硝酸等。其中亚硝基胍诱发频率极高，一般 可达10％
二、淘汰野生型菌株 常用的方法有抗生素法和菌丝过滤法等。 1.抗生素法 常用于细菌和真菌营养缺陷型菌株的富集，前者 用青霉素法，后者用制霉菌素法
二、淘汰野生型菌株 常用的方法有抗生素法和菌丝过滤法等。 1．抗生素法 常用于细菌和真菌营养缺陷型菌株的富集，前者 用青霉素法，后者用制霉菌素法
青霉素的作用： G+细菌肽聚糖结构 Labnine D-glutamine L-Lysine D-ahnine N-乙酰葡糖胺 bridge N-乙酰胞壁酸 Staphylococcus aureus peptidoglycan 青霉素作用点
G+细菌肽聚糖结构 N-乙酰葡糖胺 N-乙酰胞壁酸 青霉素作用点 青霉素的作用：
青霉素法的原理： 细菌细胞壁的主要成分为肽聚糖类，而青霉素能抑 制细胞壁肽聚糖链之间的交链，阻止合成完整的细 胞壁。处在生长繁殖过程的细菌对青霉素十分敏感 因而被抑制或杀死，但不能抑制或杀死处于静止状 态的细菌。将诱变处理后的菌悬液接种到加有抗生 素的基本培养基中，培养后野生型细胞由于正常生 长繁殖而被杀死，营养缺陷型细胞因不能生长而被 保留下来，达到富集目的
青霉素法的原理： 细菌细胞壁的主要成分为肽聚糖类，而青霉素能抑 制细胞壁肽聚糖链之间的交链，阻止合成完整的细 胞壁。处在生长繁殖过程的细菌对青霉素十分敏感， 因而被抑制或杀死，但不能抑制或杀死处于静止状 态的细菌。将诱变处理后的菌悬液接种到加有抗生 素的基本培养基中，培养后野生型细胞由于正常生 长繁殖而被杀死，营养缺陷型细胞因不能生长而被 保留下来，达到富集目的
制霉菌素法的原理： 制霉菌素作用于真菌细胞膜上的甾醇，引起细胞膜 的损伤，杀死生长繁殖过程的真菌，起到富集营养 缺陷型菌株的作用
制霉菌素法的原理： 制霉菌素作用于真菌细胞膜上的甾醇，引起细胞膜 的损伤，杀死生长繁殖过程的真菌，起到富集营养 缺陷型菌株的作用
采用青霉素法淘汰野生型细菌的步骤： (1)将诱变处理后的菌体用完全培养基振荡培养 2-3代以结束表型延迟现象，达到稳定的表型和 生理状况。 (2)将经完全培养基培养后的菌体进行离心、洗 涤，转移到无氮基本培养中进行饥饿培养4-6h， 以消耗从完全培养基中摄取并储存在体内的氮素 营养，使其停止生长，防止被以后加入的青霉素 杀死
(1)将诱变处理后的菌体用完全培养基振荡培养 2-3代以结束表型延迟现象，达到稳定的表型和 生理状况。 (2)将经完全培养基培养后的菌体进行离心、洗 涤，转移到无氮基本培养中进行饥饿培养4-6h， 以消耗从完全培养基中摄取并储存在体内的氮素 营养，使其停止生长，防止被以后加入的青霉素 杀死。 采用青霉素法淘汰野生型细菌的步骤 ：