《动物繁殖学》实验指导 动物科学、动物医学专用 杨素芳黄凤玲蒋如明陆凤花编 广西大学动物科技学院 2005年10月
1 《动物繁殖学》实验指导 动物科学、动物医学专用 杨素芳 黄凤玲 蒋如明 陆凤花编 广西大学动物科技学院 2005 年 10 月
目录 实验一采精 实验二精子活率、密度、畸形率和精液PH值的测定 6 实验三公畜精液的稀释及低温保存. 10 实验四精液的冷冻保存 实验五活体母牛的直肠触诊及直肠把握输精 16 实验六母牛的发情鉴定 实验七妊娠诊断 实验八兔的超数排卵和卵子、胚胎的收集 29
2 目 录 实验一 实验二 实验三 实验四 实验五 实验六 实验七 实验八 采精……………………………………………………………………….3 精子活率、密度、畸形率和精液 PH 值的测定………………………..6 公畜精液的稀释及低温保存…………………………………………….10 精液的冷冻保存…………………………………………………………13 活体母牛的直肠触诊及直肠把握输精…………………………………16 母牛的发情鉴定…………………………………………………………22 妊娠诊断…………………………………………………………………25 兔的超数排卵和卵子、胚胎的收集……………………………………29
实验一采精 实验目的 认识各种动物(尤其是家畜)的采精器具:了解假阴道的构造及其各部分的用途;初 步掌握假阴道的安装方法;练习各种动物采精的操作过程,为以后独立采精打下基础 材料和设备 各种动物(尤其是家畜)的假阴道、75%酒精棉球、0.1%高锰酸钾溶液、消毒用的医 用中性石腊油、长柄钳、漏斗、量杯、温度计、镊子、玻片、玻棒、肥皂、毛巾、脸盆、 提桶、麻绳、配种架、采精台、台畜、经调教好采精用的种公畜(牛、羊、猪、兔)、显微 保温箱等。 方法 教师讲解假阴道组成部件的名称和用途,比较各种动物(尤其是家畜)假阴道的异同, 做假阴道安装的示范,并讲解各种动物(尤其是家畜)的采精方法和步骤;然后学生分组 练习假阴道的安装及采精方法,最后教师做各种动物(牛、羊、猪、兔)的采精示范。 四、内容 (一)假阴道的构成 各种家畜的假阴道的大小和形状有所不同,但都由外壳、内胎、胶漏斗、集精瓶、气 嘴、固定圈等组成。 、外壳:由硬质橡胶制成(亦可用其他原料如塑料、竹筒等代替),中间有一注水孔 2、内胎:由一长筒形的优质橡胶制成,其和外壳共同起到容纳热水和空气的作用 3、胶漏斗:由内胎加工而成,上面有一气孔或缝,其作用是将精液导入集精瓶。 4、集精瓶:一般由有色玻璃构成〔亦可用其他容器代替),其作用是贮存精液。 5、气嘴:由电木或其他材料制成,起到气体开关作用
3 实验一 采精 一、实验目的 认识各种动物（尤其是家畜）的采精器具；了解假阴道的构造及其各部分的用途；初 步掌握假阴道的安装方法；练习各种动物采精的操作过程，为以后独立采精打下基础。 二、材料和设备 各种动物（尤其是家畜）的假阴道、75％酒精棉球、0.1%高锰酸钾溶液、消毒用的医 用中性石腊油、长柄钳、漏斗、量杯、温度计、镊子、玻片、玻棒、肥皂、毛巾、脸盆、 提桶、麻绳、配种架、采精台、台畜、经调教好采精用的种公畜（牛、羊、猪、兔)、显微 镜、保温箱等。 三、 方法 教师讲解假阴道组成部件的名称和用途，比较各种动物（尤其是家畜）假阴道的异同， 做假阴道安装的示范，并讲解各种动物（尤其是家畜）的采精方法和步骤；然后学生分组 练习假阴道的安装及采精方法，最后教师做各种动物（牛、羊、猪、兔）的采精示范。 四、内容 （一）假阴道的构成 各种家畜的假阴道的大小和形状有所不同，但都由外壳、内胎、胶漏斗、集精瓶、气 嘴、固定圈等组成。 1、外壳：由硬质橡胶制成（亦可用其他原料如塑料、竹筒等代替），中间有一注水孔。 2、内胎：由一长筒形的优质橡胶制成，其和外壳共同起到容纳热水和空气的作用。 3、胶漏斗：由内胎加工而成，上面有一气孔或缝，其作用是将精液导入集精瓶。 4、集精瓶：一般由有色玻璃构成（亦可用其他容器代替），其作用是贮存精液。 5、气嘴：由电木或其他材料制成，起到气体开关作用
6、固定圈:一般由较柔软的棉扁绳构成(亦可其他材料代替),起固定作用 (二)假阴道的安装 安装前的检查 (1)外壳是否有裂缝和小孔 (2)内胎是否破烂,光滑面是否在里边,边缘是否有裂口 (3)气嘴是否损坏或漏气,开与关是否灵活。 2、安装方法 1)将内胎放入假阴道外壳中,光滑面向内腔,并将其等长地伸出外壳两端。 (2)将外壳垂直地夹在两腿之间,用手把伸出两端的内胎翻转与外壳之上,翻转后内胎 要平整而不扭转 (3)在离注水孔近的一端安上胶漏斗。注意漏斗上的气孔要与外壳上的注水孔成九十度 角,气孔向上,注水孔向安装者。 (4)在外壳两端约1~1.5cm处用扁棉绳使劲扎紧 5)在注水孔上安好气嘴并检査。如无漏气现象,即取下气嘴并用长柄钳取75%酒精棉 球充分消毒内胎。 (6)待内胎里酒精挥发完后,用生理盐水或稀释液冲洗1~2次,抖竿即可装上集精瓶。 ⑦)于注水孔注入50℃左右的热水,水温可视环境温度适当增减,要求采精时内胎温度 在38~42℃之间为原则(兔的假阴道容水量小,热量损耗快,故水温要增高到70℃左右)。 注意量约八成满即可(牛、猪500~300CC:羊200~250CC)。 (8)装上气嘴并充气,使内胎中央形成“Y”字形 (9)在内胎“Y”字形上滴入消毒过的医用中性石蜡油少许,并用消毒过的温度计将石蜡 油涂抹于假阴道内胎的1/3深度,并测定内胎温度,一般以在38~42℃之间为宜 (三)采精 、公牛的采精 1)将台牛固定于配种架内,尾巴拽于左侧。用01%高锰酸钾溶液洗擦并抹干台牛的尾 根、后臀部及会阴部。 (2)用0%高锰酸钾溶液洗擦并抹干公牛的包皮及其周围 (3)采精员右手持准备好的假阴道立于牛臀部右侧。 (4)公牛临近台牛时,采集员应高度集中精神,注意公牛的性反应情况
4 6、固定圈：一般由较柔软的棉扁绳构成（亦可其他材料代替），起固定作用。 （二）假阴道的安装 1、安装前的检查 （1）外壳是否有裂缝和小孔。 （2）内胎是否破烂，光滑面是否在里边，边缘是否有裂口。 （3）气嘴是否损坏或漏气，开与关是否灵活。 2、安装方法 （1）将内胎放入假阴道外壳中，光滑面向内腔，并将其等长地伸出外壳两端。 （2）将外壳垂直地夹在两腿之间，用手把伸出两端的内胎翻转与外壳之上，翻转后内胎 要平整而不扭转。 （3）在离注水孔近的一端安上胶漏斗。注意漏斗上的气孔要与外壳上的注水孔成九十度 角，气孔向上，注水孔向安装者。 （4）在外壳两端约 1～1.5cm 处用扁棉绳使劲扎紧。 （5）在注水孔上安好气嘴并检查。如无漏气现象，即取下气嘴并用长柄钳取 75%酒精棉 球充分消毒内胎。 （6）待内胎里酒精挥发完后，用生理盐水或稀释液冲洗 1～2 次，抖竿即可装上集精瓶。 （7）于注水孔注入 50℃左右的热水，水温可视环境温度适当增减，要求采精时内胎温度 在 38～42℃之间为原则（兔的假阴道容水量小，热量损耗快，故水温要增高到 70℃左右）。 注意量约八成满即可（牛、猪 500～300CC；羊 200～250CC）。 （8）装上气嘴并充气，使内胎中央形成“Y”字形。 （9）在内胎“Y”字形上滴入消毒过的医用中性石蜡油少许，并用消毒过的温度计将石蜡 油涂抹于假阴道内胎的 1/3 深度，并测定内胎温度，一般以在 38～42℃之间为宜。 （三）采精 1、公牛的采精 （1）将台牛固定于配种架内，尾巴拽于左侧。用 0.l%高锰酸钾溶液洗擦并抹干台牛的尾 根、后臀部及会阴部。 （2）用 0.l%高锰酸钾溶液洗擦并抹干公牛的包皮及其周围。 （3）采精员右手持准备好的假阴道立于牛臀部右侧。 （4）公牛临近台牛时，采集员应高度集中精神，注意公牛的性反应情况
(5)当公牛爬跨台牛并伸出阴茎时,采精员应迅速将假阴道靠于台牛臀部右侧并向上斜 成35°~45°角(角度大小应视公牛与台牛体型大小而定,总之要使假阴道与公牛阴茎成 直线为原则);与此同时,左手以敏捷的动作准确地托住公牛的包皮,将阴茎导入假阴 道内。当公牛突然向前猛冲时,即表示己经射精。随即,公牛便从母牛背上下来,此时切 勿马上取下假阴道,而应使假阴道顺从公牛而下,以尽可能收集全部精液。待阴茎收回包 皮内时才拿开假阴道,并垂直放气放水,让精液全部流入集精瓶时才取下进行精液品质检 査。(操作时,不能用手抓拿阴茎,也不要用假阴道去套公牛的阴茎,否则,公牛均不射 精!同时要注意安全,既要胆大又要细心,以防踩伤)。 (6)用肥皂水洗擦采精器具,然后用清水冲洗干净,并悬挂于纱窗内凉干 2、公羊的采精 公羊的采精方法大致与牛相同。但公羊的射精比牛快,所以,采精时的动作要迅速和 准确。此外,由于羊比较矮小,采精员不能站立操作,而应以蹲状采精,其余过程同牛。 3、公猪的采精 公猪的采精用手握法或假阴道法。台猪往往不用真畜而以采精架(台)代替。 1)手握法 ①采精员一手戴上胶手套,另一手拿集精瓶立于采精台后面的右侧 ②将公猪赶入采精室,并用毛巾蘸0%高锰酸钾溶液将包皮洗净抹干,同时将包皮盲囊中 的余尿挤出 ③待公猪阴茎在空拳中转动一定时间后,空拳由松至紧将龟头抓住。不让阴茎来回抽动, 同时使阴茎龟头的游离端伸出空拳约l~2cm左右,并顺势将阴茎往前拉出。同时,手指 作有节律性的一紧一松的握压,促使公猪射精 ④当公猪附伏于采精台上不动时,即表示开始射精,持集精瓶一手应注意收集精液(集精 瓶应用单层纱布盖住以分离精液中胶样物)。 (2)假阴道法 ①采精员手握假阴道(也可将假阴道安装于采精台的腹侧后面)。 ②助手将公猪赶入采精室,并用0.%高锰酸钾溶液将包皮洗净抹干。 ③当公猪爬上采精台并伸出阴茎时,采精员即蹲下,先将包皮盲囊中的余尿挤出,然后将 阴茎导入假阴道。此时公猪不停地作交配动作,采精员应不断地有节律地握压连在假阴道 气嘴上的双连球。让假阴道内的压力时紧时松,促使公猪射精。 ④当公猪射精时。假阴道接胶漏斗一端稍放低,以防精液倒流,同时应注意观察是否有副
5 （5）当公牛爬跨台牛并伸出阴茎时，采精员应迅速将假阴道靠于台牛臀部右侧并向上斜 成 35°～45°角（角度大小应视公牛与台牛体型大小而定，总之要使假阴道与公牛阴茎成 一直线为原则）；与此同时，左手以敏捷的动作准确地托住公牛的包皮，将阴茎导入假阴 道内。当公牛突然向前猛冲时，即表示己经射精。随即，公牛便从母牛背上下来，此时切 勿马上取下假阴道，而应使假阴道顺从公牛而下，以尽可能收集全部精液。待阴茎收回包 皮内时才拿开假阴道，并垂直放气放水，让精液全部流入集精瓶时才取下进行精液品质检 查。（操作时，不能用手抓拿阴茎，也不要用假阴道去套公牛的阴茎，否则，公牛均不射 精！同时要注意安全，既要胆大又要细心，以防踩伤）。 （6）用肥皂水洗擦采精器具，然后用清水冲洗干净，并悬挂于纱窗内凉干。 2、公羊的采精 公羊的采精方法大致与牛相同。但公羊的射精比牛快，所以，采精时的动作要迅速和 准确。此外，由于羊比较矮小，采精员不能站立操作，而应以蹲状采精，其余过程同牛。 3、公猪的采精 公猪的采精用手握法或假阴道法。台猪往往不用真畜而以采精架（台）代替。 （1）手握法 ①采精员一手戴上胶手套，另一手拿集精瓶立于采精台后面的右侧。 ②将公猪赶入采精室，并用毛巾蘸 0.l%高锰酸钾溶液将包皮洗净抹干，同时将包皮盲囊中 的余尿挤出。 ③待公猪阴茎在空拳中转动一定时间后，空拳由松至紧将龟头抓住。不让阴茎来回抽动， 同时使阴茎龟头的游离端伸出空拳约 l～2cm 左右，并顺势将阴茎往前拉出。同时，手指 作有节律性的一紧一松的握压，促使公猪射精。 ④当公猪附伏于采精台上不动时，即表示开始射精，持集精瓶一手应注意收集精液（集精 瓶应用单层纱布盖住以分离精液中胶样物）。 （2）假阴道法 ①采精员手握假阴道（也可将假阴道安装于采精台的腹侧后面）。 ②助手将公猪赶入采精室，并用 0.l%高锰酸钾溶液将包皮洗净抹干。 ③当公猪爬上采精台并伸出阴茎时，采精员即蹲下，先将包皮盲囊中的余尿挤出，然后将 阴茎导入假阴道。此时公猪不停地作交配动作，采精员应不断地有节律地握压连在假阴道 气嘴上的双连球。让假阴道内的压力时紧时松，促使公猪射精。 ④当公猪射精时。假阴道接胶漏斗一端稍放低，以防精液倒流，同时应注意观察是否有副
性腺分泌物(半透明胶状物)阻塞集精瓶口,如有,应及时排除。以利精液流入集精瓶 ⑤采精用具的处理同牛。 4、公兔的采精 (1)用01%高锰酸钾溶液洗净抹干公兔和台兔的外生殖器官周围。 (2)将台兔放入公兔笼中,以诱起公兔的性欲,但勿使其发生本交。当公兔有性的要求 后,即可将台兔拿出。 (3)稍停一下后,再将台兔放入公兔笼,采精员一手固定台兔的颈皮和耳朵,使台兔臀 部向着公兔,另一手持假阴道。当公兔爬跨台兔后,持假阴道一手即伸入公兔的后腹部接 纳阴茎 (4)当公兔阴茎插入假阴道后,即向前一跳,并发出“咕”的叫声,便从台兔背上倒下 时,则表示公兔已经射精。 (5)将台兔和假阴道取出,并打开假阴道上的气嘴放水放气,然后取下集精瓶。 (6)采精器具用后洗涤干净,并凉挂于原来位置,下次再用 五、作业 1、仔细观察采精过程,分析各种公畜的性行为。 2、简单叙述各种家畜的采精方法有何异同? 3、你认为目前的采精方法有什么优缺点?如何改进? 实验二精子活率、密度、畸形率和精液 PH值的测定 目的 通过实验,了解精子的运动方式:识别正常精子和异常精子的形态。初步学会和掌握 精液密度、精子的活率、畸形率和精液酸碱度(PH)的测定方法。熟悉肉眼检査精液品质 的方法
6 性腺分泌物（半透明胶状物）阻塞集精瓶口，如有，应及时排除。以利精液流入集精瓶。 ⑤采精用具的处理同牛。 4、公兔的采精 （1）用 0.l%高锰酸钾溶液洗净抹干公兔和台兔的外生殖器官周围。 （2）将台兔放入公兔笼中，以诱起公兔的性欲，但勿使其发生本交。当公兔有性的要求 后，即可将台兔拿出。 （3）稍停一下后，再将台兔放入公兔笼，采精员一手固定台兔的颈皮和耳朵，使台兔臀 部向着公兔，另一手持假阴道。当公兔爬跨台兔后，持假阴道一手即伸入公兔的后腹部接 纳阴茎。 （4）当公兔阴茎插入假阴道后，即向前一跳，并发出“咕”的叫声，便从台兔背上倒下 时，则表示公兔已经射精。 （5）将台兔和假阴道取出，并打开假阴道上的气嘴放水放气，然后取下集精瓶。 （6）采精器具用后洗涤干净，并凉挂于原来位置，下次再用。 五、作业 l、仔细观察采精过程，分析各种公畜的性行为。 2、简单叙述各种家畜的采精方法有何异同？ 3、你认为目前的采精方法有什么优缺点？如何改进？ 实验二 精子活率、密度、畸形率和精液 PH 值的测定 一、目的 通过实验，了解精子的运动方式；识别正常精子和异常精子的形态。初步学会和掌握 精液密度、精子的活率、畸形率和精液酸碱度（PH）的测定方法。熟悉肉眼检查精液品质 的方法
、材料 家畜精液、载玻片、凹灶玻片、盖玻片、球棒、医用中性石腊油、75%酒精棉球、酒 精灯、伊红染液、纱布、棉花、火柴、PH比色器、PH试纸、烧杯、显微镜、保温箱。 方法步骤 (一)精液的肉眼检查 1、射精量:将采得的精液倒入有刻度的试管或杯中,测其容量。各种家畜的平均射精量 为:牛4(2~10mL):羊1(07~2mL):猪250(150~500mL)。 2、观察精液的色泽并嗅闻气味 3、云雾状的观察:观察精液的云雾状翻腾滚动。按以下符号记入表内,云雾状显著者, 以“+++”表示,有云雾状以“++”表示;云雾状不明显者以“+”表示 (二)精子活率测定 测定精子活率的方法很多,有活精子计算法,死活精子染色法和目测法。目测法因使 用的材料和工具不同,又可分为平板压片法、悬滴检査法和油盖检査法三种。现将目测法 的三种方法的实验步骤分别介绍如下: 、平板压片法 1)将载玻片、盖玻片、玻棒等接触精液的器具洗净候干备用。用时先用蘸有75%酒精 的脱脂棉球抹擦之,然后通过酒精灯进行火焰消毒,待冷候用。 (2)滴一滴精液(如太浓,可先用生理盐水稀释)于消毒过的载玻片上,盖上消毒过的 干净盖玻片 (3)将制好的片子放在显微镜载物台上,先用低倍镜观察,后用高倍镜(400~600倍) 观察(如气温低,须将显微镜置于保温箱内升温到37℃后,再进行镜检)。 悬滴检查法 1)滴一小滴精液于消毒好的盖玻片中央, (2)在凹灶处周围涂上少量水,然后将凹处对准盖玻片上的精液,并覆盖于盖玻片上, 使其贴在一起 (3)将玻片倒转过来,使精液滴悬挂于盖玻片下,便可放在显微镜下观察。 油盖检查法
7 二、材料 家畜精液、载玻片、凹灶玻片、盖玻片、球棒、医用中性石腊油、75%酒精棉球、酒 精灯、伊红染液、纱布、棉花、火柴、PH 比色器、PH 试纸、烧杯、显微镜、保温箱。 三、方法步骤 （一）精液的肉眼检查 1、射精量：将采得的精液倒入有刻度的试管或杯中，测其容量。各种家畜的平均射精量 为：牛 4（2～10mL）；羊 1（0.7～2 mL）；猪 250（150～500 mL）。 2、观察精液的色泽并嗅闻气味。 3、云雾状的观察：观察精液的云雾状翻腾滚动。按以下符号记入表内，云雾状显著者， 以“+++”表示，有云雾状以“++”表示；云雾状不明显者以“+”表示。 （二）精子活率测定 测定精子活率的方法很多，有活精子计算法，死活精子染色法和目测法。目测法因使 用的材料和工具不同，又可分为平板压片法、悬滴检查法和油盖检查法三种。现将目测法 的三种方法的实验步骤分别介绍如下： 1、平板压片法 （1）将载玻片、盖玻片、玻棒等接触精液的器具洗净候干备用。用时先用蘸有 75％酒精 的脱脂棉球抹擦之，然后通过酒精灯进行火焰消毒，待冷候用。 （2）滴一滴精液（如太浓，可先用生理盐水稀释）于消毒过的载玻片上，盖上消毒过的 干净盖玻片。 （3）将制好的片子放在显微镜载物台上，先用低倍镜观察，后用高倍镜（400～600 倍） 观察（如气温低，须将显微镜置于保温箱内升温到 37℃后，再进行镜检）。 2、悬滴检查法 （1）滴一小滴精液于消毒好的盖玻片中央。 （2）在凹灶处周围涂上少量水，然后将凹处对准盖玻片上的精液，并覆盖于盖玻片上， 使其贴在一起。 （3）将玻片倒转过来，使精液滴悬挂于盖玻片下，便可放在显微镜下观察。 3、油盖检查法
(1)滴一滴精液于消毒过的载玻片上 (2)在精液上面滴一滴医用中性石腊油即可放在显微镜下观察。 4、活率的评定 (1)在显微镜下观察精子的运动方式,并区别直线前进式运动、旋转式运动和摆动式运 动的精子活动的情况。 (2)根据视野中呈直线前进式运动的精子所占比例进行测定。如全部精子均呈直线前进 式运动,看不到非直线前进式运动的精子,可评为“1.0”分:如果视野中只有80%的精 子呈直线前进式运动,其余20%呈非直线前进式运动,则评为“08”分,其余依此类推 测定时要求多看几个视野,然后进行综合评定。在一个视野中,如果呈前进式运动的精子 占多数,则重点估测非前进式运动的精子所占比例,反之则估测前进式运动的精子所占比 例 (三)精液密度检查 测定精液密度的方法有估测法,红细胞计数法和光电比色法。其中估测法通常结合精 子活率进行检查,一般用测定活率的平板压片法进行 取一小滴精液于清洁的载玻片上,加上盖玻片,使精液分散成均匀一薄层,但不得有 气泡,也不能使精液外流或溢于盖玻片上,置显微镜下放大400~600倍观察,按下列等 级评定其密度(如图2-1) ) 图2-1稀 1、稀:精子分散存在,精子间的空隙超过一个精子长度,这种精液一般每毫升所含精子 在2亿以下。 2、中:精子之间的空隙明显,精子彼此之间距离约有一个精子的长度。有些精子的活动 情况可以清楚地看到。这种精液的密度评为“中”,一般每毫升所含精子数约在2~10 亿之间
8 （1）滴一滴精液于消毒过的载玻片上。 （2）在精液上面滴一滴医用中性石腊油即可放在显微镜下观察。 4、活率的评定 （1）在显微镜下观察精子的运动方式，并区别直线前进式运动、旋转式运动和摆动式运 动的精子活动的情况。 （2）根据视野中呈直线前进式运动的精子所占比例进行测定。如全部精子均呈直线前进 式运动，看不到非直线前进式运动的精子，可评为“1.0”分；如果视野中只有 80％的精 子呈直线前进式运动，其余 20% 呈非直线前进式运动，则评为“0.8”分，其余依此类推。 测定时要求多看几个视野，然后进行综合评定。在一个视野中，如果呈前进式运动的精子 占多数，则重点估测非前进式运动的精子所占比例，反之则估测前进式运动的精子所占比 例。 （三）精液密度检查 测定精液密度的方法有估测法，红细胞计数法和光电比色法。其中估测法通常结合精 子活率进行检查，一般用测定活率的平板压片法进行。 取一小滴精液于清洁的载玻片上，加上盖玻片，使精液分散成均匀一薄层，但不得有 气泡，也不能使精液外流或溢于盖玻片上，置显微镜下放大 400～600 倍观察，按下列等 级评定其密度（如图 2-1）。 1、稀：精子分散存在，精子间的空隙超过一个精子长度，这种精液一般每毫升所含精子 在 2 亿以下。 2、中：精子之间的空隙明显，精子彼此之间距离约有一个精子的长度。有些精子的活动 情况可以清楚地看到。这种精液的密度评为“中”， 一般每毫升所含精子数约在 2～10 亿之间。 图 2-1 稀 中 密
3、密:在整个视野中精子密度很大,彼此间空隙很小,看不清各个精子运动的活动情况, 这一级属于“密”,一般每毫升含精子数约在10亿以上 (四)PH的测定 比色试纸法 (1)取一滴精液于清洗干净的凹玻片上,然后用一小张精密试纸(65~8:0)放于精液滴 (2)让精液渗湿试纸后即在精密试纸比色图上比色,并记录结果。 (五)精子畸形率的检查 1、滴一小滴精液于消毒过的载玻片一端, 2、用另一块边缘光滑的玻片(最好为凹灶玻片)的一端斜抵于精液前成35℃角,使凹灶 玻片底面与精液接触,并向两旁散开后,即向载玻片的另一端轻快推去,使精液均匀地涂 于载玻片上。(见图2-2) 图2-2精液抹片示意图 图2-3左图为正常精子(左下为原生质小滴), 右图为各种畸形精子 3、让抹片风干后,先在显微镜下观察所抹片子如何,如理想,则可染色:否则,洗去重 做
9 3、密：在整个视野中精子密度很大，彼此间空隙很小，看不清各个精子运动的活动情况， 这一级属于“密”，一般每毫升含精子数约在 10 亿以上。 （四）PH 的测定 1、比色试纸法 （1）取一滴精液于清洗干净的凹玻片上，然后用一小张精密试纸（6.5～8.0）放于精液滴 上。 （2）让精液渗湿试纸后即在精密试纸比色图上比色，并记录结果。 （五）精子畸形率的检查 1、滴一小滴精液于消毒过的载玻片一端。 2、用另一块边缘光滑的玻片（最好为凹灶玻片）的一端斜抵于精液前成 35℃角，使凹灶 玻片底面与精液接触，并向两旁散开后，即向载玻片的另一端轻快推去，使精液均匀地涂 于载玻片上。（见图 2-2） 3、让抹片风干后，先在显微镜下观察所抹片子如何，如理想，则可染色；否则，洗去重 做。 图 2-3 左图为正常精子（左下为原生质小滴）， 右图为各种畸形精子 图 2-2 精液抹片示意图
4、在风干的抹片上滴上2~3滴5%伊红染液,并用玻棒稍为推开。染色3~5min,然后 轻轻用水洗去多余的染料,候干镜检。 也可以用下列方法固定染色。(1)用0.5%的龙胆紫酒精染色3min,水洗,待干后即 可镜检(也可用由普通红蓝墨水代替)。(2)置95%酒精中(或5%福尔马林溶液)固定5 6min,取出以水冲洗后,凉干或烘干,用蓝、红墨水等染色3~5min,再用水冲洗,干燥 后置于显微镜下检查。 5、镜检:在任意若干个视野中计算200个精子中有多少个畸形精子(注意区别正常精子 和头、颈、中段部以及尾部畸形的精子)。并记载于表中。(见图2-3) 6、计算精子的畸形率 精子畸形率=畸形精子数/(正常精子数十畸形精子数)×100% 四、作业 1、列表记载本次实验所得的精液密度、精子的活率及精液PH数值 2、将精子畸形率的检查结果详细记入下列表格中。 项目|正常精子 畸形精子 总观察数畸形率 头部颈部中段|尾部总数 (%) 观察数 总计 3、在检査精子活率时,为了获得比较准确的结果,你认为应注意哪些事项 实验三公畜精液的稀释及低温保存 目的 熟悉精液稀释液的配制方法 2、掌握低温保存的技术
10 4、在风干的抹片上滴上 2 ～3 滴 5%伊红染液，并用玻棒稍为推开。染色 3～5min，然后 轻轻用水洗去多余的染料，候干镜检。 也可以用下列方法固定染色。（1）用 0.5%的龙胆紫酒精染色 3min，水洗，待干后即 可镜检（也可用由普通红蓝墨水代替）。（2）置 95%酒精中（或 5%福尔马林溶液）固定 5～ 6min，取出以水冲洗后，凉干或烘干，用蓝、红墨水等染色 3～5min，再用水冲洗，干燥 后置于显微镜下检查。 5、镜检：在任意若干个视野中计算 200 个精子中有多少个畸形精子（注意区别正常精子 和头、颈、中段部以及尾部畸形的精子）。并记载于表中。（见图 2-3） 6、计算精子的畸形率： 精子畸形率 = 畸形精子数 /（正常精子数＋畸形精子数）×100% 四、作业 1、列表记载本次实验所得的精液密度、精子的活率及精液 PH 数值。 2、将精子畸形率的检查结果详细记入下列表格中。 项目 正常精子 畸形精子 总观察数 畸形率 头部 颈部 中段 尾部 总数 （%） 观察数 总计 3、 在检查精子活率时，为了获得比较准确的结果，你认为应注意哪些事项？ 实验三 公畜精液的稀释及低温保存 一、目的 1、熟悉精液稀释液的配制方法； 2、掌握低温保存的技术