一、限制修饰 二、识别的序列 三、产生的末端 四、末端长度的影响 五、位点偏好 六、反应条件 七、星星活性 八、单链的切割 九、酶切位点引入 十、影响酶活性的因素

第二节 甲基化酶 Methylase、第三节 DNA聚合酶 DNA polymerase、第四节 RNA聚合酶、第五节 连接酶 (Ligase)、第六节 碱性磷酸酶、第七节 其他酶

第一节 限制性内切核酸酶 第二节 DNA甲基化酶 第三节 核酸酶 第四节 DNA聚合酶 第五节 RNA聚合酶 第六节 连接酶 第七节 核酸末端修饰酶 第八节 其它酶类

Chapter 1: Plasmids and Their Usefulness in Molecular Cloning Chapter 2: Bacteriophage and Its Vectors Chapter 3: Working with Bacteriophage M13 Vectors Chapter 4: Working with High-Capacity Vectors Chapter 5: Gel Electrophoresis of DNA and Pulsed-Field Agarose Chapter 6: Preparation and Analysis of Eukaryotic Genomic DNA Chapter 7: Extraction, Purification, and Analysis of mRNA from Eukaryotic Cells Chapter 8: In Vitro Amplification of DNA by the Polymerase Chain Reaction Chapter 9: Preparation of Radiolabeled DNA and RNA Probes Chapter 10: Working with Synthetic Oligonucleotide Probes Chapter 11: Preparation of cDNA Libraries and Gene Identification Chapter 12: DNA Sequencing Chapter 13: Mutagenesis Chapter 14: Screening Expression Libraries Chapter 15: Expression of Cloned Genes in Escherichia coli Chapter 16: Introducing Cloned Genes into Cultured Mammalian Cells Chapter 17: Analysis of Gene Expression in Cultured Mammalian Cells Chapter 18: Protein Interaction Technologies

➢基因克隆(gene cloning) ➢基因表达(gene expression) -原核基因表达 -真核基因表达

• 基础知识 • 克隆载体及基因克隆 • cDNA文库/Genomic DNA文库 • 表达载体 • 重组DNA技术的应用

• 基因工程 ( genetic engineering)、基因 克隆、DNA重组、DNA克隆、分子克隆 • 克隆（clone） 无性繁殖 – 应用酶学的方法，在体外将目的基因与载体 DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分 子（复制子、重组体），继而通过转化或转 染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子 细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA 分子拷贝，或其表达产物

基因工程的表达体系 操纵子理论在基因工程中的应用 目的基因翻译表达及其准确性 常用基因载体

南方医科大学：《分子生物学》课程教学资源（课件讲稿）基因克隆与基因体外表达

第一节 概述 第二节 DNA克隆的基本过程 第三节 重组DNA技术与分子医学的关系