基因的克隆与燾达
基因的克隆与表达
基因克隆( gene cloning) >基因表达( gene expression) 原核基因表达 真孩基因表达
➢基因克隆(gene cloning) ➢基因表达(gene expression) -原核基因表达 -真核基因表达
基因克隆 Gene e
基 因 克 隆 Gene Cloning
>概述 >克隆载体 受体细胞 >体外重组的策略 >基因克隆工作流程
➢概述 ➢克隆载体 ➢受体细胞 ➢体外重组的策略 ➢基因克隆工作流程
概述 确定了遗传信息的携带者,即基因的盆 子载体是DNA而不是蛋白质 揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半 保留复制机理 提出了中心法则和操纵子学说,破译了 遗传密码
一、概述 • 确定了遗传信息的携带者，即基因的盆 子载体是DNA而不是蛋白质 • 揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半 保留复制机理 • 提出了中心法则和操纵子学说，破译了 遗传密码
1973年 Cohen完成第一个基因工程实验 Neo 经体外重组获得杂合DNA pSC101Tc R6-31s 杂合子转化入大肠杆菌 EcoR[ Ne S 连接酶 >所需元件: 限制性内切酶 连接酶 eo ↓转化大肠扦菌 载体 人:∴IN平钣筛选 受体细胞
1973年Cohen完成第一个基因工程实验 经体外重组获得杂合DNA 杂合子转化入大肠杆菌 ➢所需元件： 限制性内切酶 连接酶 载体 受体细胞
基因克隆(分子克隆 molecular cloning)-通过体外重组技术将 段目的DNA经切割、连接插入适当载 体,并导入受体细胞,扩增形成大量 子代分子的过程
基因克隆（分子克隆molecular cloning）----通过体外重组技术,将一 段目的DNA经切割、连接插入适当载 体，并导入受体细胞，扩增形成大量 子代分子的过程
基因克隆的核心一体外重组 ( Recombination)):人工将一段目的DNA 插入一个载体的过程
基因克隆的核心-----体外重组 (Recombination) : 人工将一段目的DNA 插入一个载体的过程
基因克隆的技术路线 目的基因 载体 体外重组 重组字(杂合DNA) 转化 受体细胞 筛选阳性克隆 大量扩增,获得子代DNA
基因克隆的技术路线 目的基因 载体 体外重组 重组子（杂合DNA） 转化 受体细胞 筛选阳性克隆 大量扩增，获得子代DNA
Foreign DNa gene for region of interest antibiotic Plasmid ECoRI resistance EcoRI EcoRI EcoRI ds Hybridization dNA ligas Recombinant DNA DNA insertion Bacteria Bactenal Bactera platted on medium omosome antibiotic Clo Only bactera containing recombinant dna got Clone DNA purification Cloning into a plasmid
