第四章基因操作 Gene manipulation
第四章 基因操作 Gene manipulation
第一节碱基互补的能力 DNA的热变性 G一C含量髙的DNA具有较高的熔解温度,可以根据熔解 温度的不同将GC含量不同的DNA分子分开,并可推测DNA分 子中G一C的相对含量。 根据熔解温度的差别在DNA分子中作基因定位和分离基 因。组蛋白是与核DNA结合的碱性蛋白,富含精氨酸,其编码 区相对富含G一C对
第一节 碱基互补的能力 一、DNA的热变性 1．G－C含量高的DNA具有较高的熔解温度，可以根据熔解 温度的不同将GC含量不同的DNA分子分开，并可推测DNA分 子中G－C的相对含量。 2．根据熔解温度的差别在DNA分子中作基因定位和分离基 因。组蛋白是与核DNA结合的碱性蛋白，富含精氨酸，其编码 区相对富含G－C对
海胆组蛋白基因在较底温度时(61℃)的变性电镜图, 每种组蛋白基因被一个富含A一T对区域间隔开。用S1核酸酶 处理,消除单链 HI H4 H2B H3 H2
• 海胆组蛋白基因在较底温度时（61℃）的变性电镜图， 每种组蛋白基因被一个富含A－T对区域间隔开。用S1核酸酶 处理，消除单链。 H1 H4 H2B H3 H2A
、互补单链的复性 利用互补单链复性的特点可以确定基因缺失的位置和大小:一个缺失突 变体的DNA和一个野生型的DNA一起复性后就可确定缺失区。 e a b d b□bb Heat a Mix and cool
二、互补单链的复性 利用互补单链复性的特点可以确定基因缺失的位置和大小：一个缺失突 变体的DNA和一个野生型的DNA一起复性后就可确定缺失区。 a b c d e a , b , c , d , e , a b d e a , b , d , e , a b c d e a , b , c , d , e , a b d e a , b , d , e , a b c d e a , b , d , e , Heat Mix and cool
、染色体上DNA序列的定位 用特异性RNA或DNA作探针与染色体上相 应的DNA互补区域作杂交,从而确定该特异性 基因的位置称染色体原位杂交( in situ hybridization of chromosome)
三、染色体上DNA序列的定位 用特异性RNA或DNA作探针与染色体上相 应的DNA互补区域作杂交，从而确定该特异性 基 因 的 位 置 称 染色体原位杂交 （ in situ hybridization of chromosome）
In situ hybridization of human metaphase chromosomes using fluorescent technique (FISH)
In situ hybridization of human metaphase chromosomes using fluorescent technique (FISH)
第二节限制性内切酶 宿主限制现象
第二节 限制性内切酶 一、宿主限制现象
Phage Infect Bacteria B B A B 100%X 100 100% X-B 0.002%〈X 从两个不同菌株A和B来的噬菌体X具有不同的感染能力
X X A B X-A X-B A B A B X-A X-B X-A X-B 100% 100% 0.002% 100% Phage Infect Bacteria 从两个不同菌株A和B来的噬菌体X具有不同的感染能力
〉用很少一些 感染力差的 很差 A X-A B X-B A 100% 100% 无法分离到能感染A细菌的XB来的噬菌体
X-A A X-A B X-B A X-A 100% 100% 很差 无法分离到能感染A细菌的X-B来的噬菌体 用很少一些 感染力差的
结果说明:噬菌体的宿主范围取决于它所来源的细菌 菌株,而不是噬菌体的基因型;宿主的基因型对噬菌 体有一种修饰作用,但并不改变噬菌体DNA的序列 细菌的基因型决定该细菌对各种噬菌体感染的敏感性 ,一种噬菌体的基因型决定它所能感染细菌的范围, 它们之间具有密切的依赖和限止关系。 在不同基因型的细菌中生长的噬菌体其具有不同的 感染能力
结果说明：噬菌体的宿主范围取决于它所来源的细菌 菌株，而不是噬菌体的基因型；宿主的基因型对噬菌 体有一种修饰作用，但并不改变噬菌体DNA的序列。 细菌的基因型决定该细菌对各种噬菌体感染的敏感性 ，一种噬菌体的基因型决定它所能感染细菌的范围， 它们之间具有密切的依赖和限止关系。 在不同基因型的细菌中生长的噬菌体其具有不同的 感染能力