包括①凝胶电泳②细菌的转化和转染③核酸分子杂交④定点突变⑤PCR⑥RFLP⑦RAPD⑧DNA序列分析⑨目的基因的分离和转基因植物、转基因动物等技术

第一节 DNA的提取与纯化 第二节 核酸凝胶电泳技术 第三节 核酸的分子杂交 第四节 基因扩增技术——PCR 第五节 DNA序列分析

实验一 植物基因组DNA的提取及其定性定量分析. 1 实验二 PCR扩增目的片段和胶回收. 8 实验三 目的片段和载体的连接. 15 实验四 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化效率检测. 18 实验五 重组质粒的转化. 20 实验六 重组质粒DNA的提取及酶切鉴定. 23 实验七 RNA的提取（TRIzol法）. 30 实验八 mRNA的分离与纯化. 36 实验九 RT-PCR技术. 38 实验十 用mRNA差异显示法分离特异表达的基因片段 . 40 实验十一 cDNA文库的构建. 46 实验十二 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） . 51 实验十三 Southern印迹杂交法（Southern blot）. 56 实验十四 RNA分子杂交（Northern blot）. 62 实验十五 固定化蛋白质的免疫生化鉴定（Western blot）. 67 实验十六 RFLP技术. 71 实验十七 RAPD技术. 74 实验十八 细胞分裂中期染色体的荧光原位杂交技术(FISH). 76 附录一 常用缓冲液及其配制. 80 附录二 常用抗生素溶液. 85 附录三 常用贮存液的配制. 85 附录四 常用核酸蛋白换算数据. 93 附录五 染料在凝胶中的迁移速度. 94 附录六 实验中的一些好习惯. 95

第一篇 基因工程制药综合实验. 7 实验一 基因的 PCR 扩增反应. 8 实验二 水平式琼脂糖凝胶电泳法检测 DNA. 11 实验三 DNA 的重组连接. 14 实验四 重组质粒的转化 . 18 实验五 转化子 DNA 的快速提取. 22 实验六 重组转化子的 PCR 鉴定. 24 第二篇 细胞工程制药综合实验. 26 实验一 细胞培养. 26 实验二 PEI 转染动物细胞 . 28 实验三 动物细胞蛋白的提取方法 . 31 实验四 蛋白浓度测定方法. 32 实验五 SDS-PAGE 电泳. 33 实验六 WESTERN BLOT 检测 . 35 第三篇 酶工程制药综合实验. 41 高产淀粉酶菌株的筛选 . 41 第四篇 沙棘粗多糖的提取、纯化及鉴定. 45 第五篇 免疫组织化学检测. 48 第六篇 发酵罐说明及使用. 51 实验一 气升式生化反应器的应用 . 51 实验二 中试发酵设备的使用方法 . 53 附录 发酵罐的简介. 56

本书介绍组织病理学常用的多种技术。包括常见的技术，即福尔马林固定、石蜡包埋、HE染色技术，同时也介绍了常用的特殊染色技术，免疫组织化学技术，并简明地介绍了分子生物学技术的基本理论以及在组织病理学中的应用。 第一篇 石蜡切片技术 第一章 组织标本的处理 第一节 取材 第二节 组织的固定 第三节 大体标本的处理和固定 第四节 陈列标本的固定 第五节 脱钙 第六节 组织的冲洗 第二章 石蜡包埋技术 第一节 脱水 第二节 透明 第三节 浸蜡 第四节 包埋 第三章 切片技术 第一节 切片刀 第二节 切片机 第三节 石蜡切片的制作 第四节 特殊组织石蜡切片的制作 第五节 石蜡切片的异常及处理 第四章 染色与染色剂 第一节 染色的基本原理 第二节 染色剂染色的化学基础 第三节 染色剂的分类 第四节 常用染色剂及配制 第五节 苏木素—伊红染色法 第六节 封固剂 第五章 特殊染色技术 第一节 结缔组织染色法 第二节 脂类染色法 第三节 糖原及粘液染色法 第四节 色素染色法 第五节 神经组织染色法 第六节 核酸及核蛋白染色法 第七节 肌肉组织染色法 第八节 病原微生物染色法 第九节 特殊染色技术的应用 第二篇 免疫组织化学和亲和免疫组织化学技术 第一章 免疫组织化学技术 第一节 基本原理 第二节 染色步骤 第三节 常用试剂的配制 第二章 亲和免疫组织化学技术 第三篇 分子生物学技术 第一章 核酸原位杂交技术 第一节 核酸原位杂交的基本原理 第二节 核酸原位杂交的主要过程 第三节 核酸原位杂交的基本操作步骤 第四节 常用试剂的配制 第五节 核酸原位杂交的应用 第二章 原位PCR技术 第二节 基本类型 第三节 基本步骤 第四节 原位PCR技术的应用

第一部分 基础性实验. 5 实验 1、细胞基本形态观察及临时装片制备. 5 实验 2、参观电镜与细胞超微结构观察. 15 实验 3、细胞膜的渗透性. 20 第二部分 综合性实验. 22 实验 4、核酸(DNA 和 RNA)的细胞核定位. 22 实验 5、细胞骨架的光学显微镜观察 . 26 实验 6、细胞凝集反应 . 29 实验 7、线粒体和液泡系的超活染色与观察. 30 实验 8、细胞计数及活力测定. 34 实验 9、细胞化学成分的显示. 37 实验 10、细胞核和线粒体的分离. 45 实验 11、细胞有丝分裂标本制备及观察 . 50 实验 12、减数分裂压片标本制备与观察. 53 实验 13、动物染色体标本的制备与观察. 58 实验 14、植物染色体标本的制备与观察. 61 实验 15、动物细胞培养（录象）. 63 第三部分 设计性、研究性实验. 73 1、PCR 技术检测生物样品中的 DNA . 74 2、植物组织培养 . 74 3、质粒 DNA 的提取. 74 4、切片技术 . 75 5、MTT 法检测化学药物对体外细胞的影响. 75 6、原生质体的分离和培养 . 75 8、分组自己选题 . 75

第一章生物化学实验基本知识与操作 第一节生物化学实验基本知识 第二节 第二章分光光度技术 实验一双缩脲法测定蛋白质浓度 实验二 Folin-酚试剂法(Lowry 法)测定蛋白质浓度 实验三紫外分光光度法测定蛋白质浓度 实验四考马斯(Comessie)亮兰结合法测定蛋白质浓度 实验五BCA 法测定蛋白质浓度 实验六激素对血糖浓度的影响及血糖的测定 第三章生物大分子的提取、沉淀和离心分离技术 第一节生物材料的选取与预处理 第二节生物大分子的沉淀分离技术 第三节生物大分子离心分离技术 实验七鸡血SOD的提取、分离及活力测定 实验八碱性磷酸酶的制备及活力测定 实验九酪蛋白的制备 实验十动物肝脏中提取DNA 实验十一猪心肌细胞线粒体可溶性ATP合酶的提 第四章电泳技术 实验十二DNA 琼脂糖凝胶电泳 实验十三血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 实验十四聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶 实验十五蛋白质分子量的测定——SDS-聚丙烯凝胶电泳 实验十六聚丙烯酰胺等电聚焦电泳 第五章层析技术 第一节 层析技术概述 吸附层析 第三节 分配层析 第四节 离子交换层析 第五节 凝胶层析 第六节亲和层析 第七节 高效液相层析 实验十七氨基酸的纸上层析与氨基酸的转氨基作用 实验十八血清-球蛋白的分离纯化与鉴定 实验十九 亲和层析纯化胰蛋白酶 实验十二离子交换层析分离氨基酸 实验二十一蛋白质分子量测定——凝胶过滤层析法 第六章 分子生物学基本技术 核酸分子杂交 聚合酶链反应 第三节分子克隆 实验二十二Southern杂交分析 实验二十三 Northern 杂交分析 实验二十四 PCR 基因扩增 验二十五质粒DNA的提取及酶切 实验二十六 DNA重组实验 实验二十七大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 附录一常用缓冲液的配制方法 附录二易变质及需要特殊方法保存的试剂 附录三一般化学试剂的分级 附录四 English words in the lab

第一节 体外试验 一、概述 二、体外试验系统 第二节 哺乳动物细胞制备和培养 二、基本技术 三、培养细胞的鉴定 (一) 污染鉴定 (二) 生存指标 (三) 细胞特性鉴定 四、细胞培养在食品毒理学中应用 第三节 亚细胞组分制备及其检测方法 一、基本技术 二、微粒体的制备 三、混合功能氧化酶系的测定方法 四、线粒体的制备 五、线粒体功能的测定 第四节 生物膜的制备与其性质的研究方法 一、大鼠肝细胞膜的制备 二、红细胞膜的制备 三、脂质体的制备 四、大鼠脑突触体膜的制备 五、对生物膜的生物化学性质的研究方法 六、对膜的生物物理性质研究方法 第五节 分子生物学技术在毒理学中的应用 一、PCR技术 二、细胞程序性死亡及其检测方法 三、毒理学中的mRNA定性与定量的测定方法 四、转基因动物 五、基因芯片技术

实验一 细菌感受态的制备和质粒的转化. 2 实验二 碱变性法提取质粒 DNA . 6 实验三 水平式琼脂糖凝胶电泳法检测 DNA . 11 实验四 DNA 的限制性内切酶酶切 . 15 实验五 DNA 的回收与连接 . 18 实验六 基因的 PCR 扩增. 23 实验七 用温度敏感型启动子表达系统表达目的基因. 29 实验八 基因组合生物合成新化合物. 36 实验九 药用甘草片中甘草酸含量的分析及其质量评价. 47 实验十 牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备. 48 实验十一 固定化细胞法生产 L-天冬氨酸和 L-丙氨酸. 50 实验十二 重组水蛭素Ⅲ的制备. 57 实验十三 酸醇提取法制备猪胰岛素. 65 实验十四 多肽缩宫素的 Fmoc 固相合成法. 70 实验十五 酵母 RNA 的制备和单核苷酸的离子交换柱层析分析. 76 实验十六 单核苷酸衍生物制备. 82 实验十七 胰弹性蛋白酶的制备及活力测定. 85 实验十八 超氧化物歧化酶的分离纯化. 89 实验十九 重组门冬酰胺酶Ⅱ的纯化与分析. 97

一、专业基础课 《生命科学导论》 《无机及分析化学》 《无机及分析化学实验》 《有机化学 》 《有机化学实验》 《植物学》课程标准 《植物学实验》 《动物学 I》课程标准 《动物学 II》课程标准 《动物学实验 I》 《动物学实验 II》 《生物化学》课程标准 《生物化学实验》 《微生物学》课程标准 《微生物学实验》 二、专业必修课 《植物生理学》课程标准 《植物生理学实验》 《分子生物学》课程标准 《遗传学》课程标准 《遗传学实验》 《细胞生物学》课程标准 《细胞生物学实验》 《人体及动物生理学》课程标准 《人体及动物生理学实验》 《普通生态学》课程标准 三、专业方向课 《高级生物化学》 《生物信息学》 《免疫学》 《发育生物学》 《基因组学与蛋白质组学》 《现代生物仪器分析》 《生物分离工程》 《现代食品检测技术》 《环境污染生物监测技术》 《生物药物分析与检验》 《海洋经济动植物增养殖学》 《水产动物营养与饲料学》 《饵料生物培养学》 《渔业工程学》 《水产品加工学》 四、专业任选课 《海洋生物学》 《自然地理学》 《海洋环境监测与评价》 《植物组织培养》 《生物统计学》 《宠物饲养学》 《生物专业英语》 《生物制品与营销学》 《资源昆虫学》 《行为生态学》 《食品保藏原理与技术》 《PCR 技术》 《动植物检疫学》 《生态学前沿专题讲座》 《海水养殖动物病害学》 《表观遗传学》 《神经生物学》 《保护生物学》 《环境生物学》 《水产生物育种学》 《观赏鱼养殖学》 《天然产物开发与应用》 集中实践部分 《植物学野外实习》 《专业发展社会调查》 《文献检索与科技论文写作》 《动物学野外实习》 《分子生物学大实验》 《专业见习》 《生态学野外实习》课程标准 《专业综合技能训练 I》 《专业综合技能训练 II》 《专业实习（校外联合培养实践）》