实验四 X染色质标本制备及观察
实 验 四 X染色质标本制备及观察
、实验目的 1.掌握X染色质标本的制备方法。 ◆2熟悉人体X染色质标本的制备原理和临床意义。 ◆3.了解X染色质的形态特征
一、实验目的 1. 掌握X染色质标本的制备方法。 2. 熟悉人体X染色质标本的制备原理和临床意义。 3. 了解X染色质的形态特征
二、实验用品 人体口腔颊部黏膜上皮细胞、光镜、载玻片、盖 玻片、牙签、吸水纸、擦镜纸;试剂:固定液 (甲醇:冰醋酸=3:1)、乙醇(70%、95% s100%)5M的Hc溶液、香柏油、二甲苯、02% 甲苯胺兰染色液
二、实验用品 人体口腔颊部黏膜上皮细胞、光镜、载玻片、盖 玻片、牙签、吸水纸、擦镜纸；试剂：固定液 （甲醇：冰醋酸=3:1）、乙醇（70%、95%、 100%）5M的HCl溶液、香柏油、二甲苯、0.2 % 甲苯胺兰染色液
三、实验原理 ◆X染色质又称X小体或Barr小体,是女性细胞分裂间期核 内的一种特有染色质。X染色质位于核膜边缘,一般呈三 角形、半圆形或扁平形等,为异固缩小体。正常女性间 期核X染色质出现率为10%~59%,数目为X染色体的数 目减1。这一结构在口腔、阴道等部位的粘膜上皮中通过 简单的染色方法就可以观察到。通过进一步计算X染色质 阳性率,不仅可以在胚胎期较为准确的判断胎儿性别; 当临床上怀疑有X染色体数目异常时,也可以作为辅助诊 断方法,对于没有条件开展染色体检查的地区不失为 种经济实用的方案
三、实验原理 X染色质又称X小体或Barr小体，是女性细胞分裂间期核 内的一种特有染色质。X染色质位于核膜边缘，一般呈三 角形、半圆形或扁平形等，为异固缩小体。正常女性间 期核X染色质出现率为10％～59％，数目为X染色体的数 目减1。这一结构在口腔、阴道等部位的粘膜上皮中通过 简单的染色方法就可以观察到。通过进一步计算X染色质 阳性率，不仅可以在胚胎期较为准确的判断胎儿性别； 当临床上怀疑有X染色体数目异常时，也可以作为辅助诊 断方法，对于没有条件开展染色体检查的地区不失为一 种经济实用的方案
X染色质(X- chromatin) ◆正常女性的间期细胞核中紧贴核膜内缘有一个 染色较深,约为1徼米大小的椭圆形小体,既 X染色质
5 X染色质（X-chromatin） 正常女性的间期细胞核中紧贴核膜内缘有一个 染色较深，约为1微米大小的椭圆形小体，既 X染色质
正常女性有两条X染色体,男性只有一条 X染色体(和一条Y),X染色体有数量 差异。那么,位于X染色体上的基因产物 是否存在差异昵?为什么只有女性才有X 染色质而男性没有?为什么某一种X连锁 的突变基因纯合子女性的病情并不比半 合子的男性严重? >Lyon假说,来解释上述问题
6 ➢正常女性有两条X染色体，男性只有一条 X染色体（和一条Y），X染色体有数量 差异。那么，位于X染色体上的基因产物 是否存在差异昵？为什么只有女性才有X 染色质而男性没有？为什么某一种X连锁 的突变基因纯合子女性的病情并不比半 合子的男性严重？ ➢Lyon 假说，来解释上述问题
莱昂(Lyon)假说 口X失活发生在胚胎生命 早期 口失活是随机的 口失活是完全的 口失活是永久的和克隆式 繁殖的 也就是说在女性细胞中的两条X染色体只有一条有活性, 另一条无转录活性,在间期细胞核异固缩而失活。这样男女X 连锁基因产物量保持相同水平,这种效应称为剂量补偿
7 莱昂（Lyon）假说 ❑ X失活发生在胚胎生命 早期 ❑ 失活是随机的 ❑ 失活是完全的 ❑ 失活是永久的和克隆式 繁殖的 也就是说在女性细胞中的两条X染色体只有一条有活性， 另一条无转录活性，在间期细胞核异固缩而失活。这样男女X 连锁基因产物量保持相同水平，这种效应称为剂量补偿
需要说明的问题 1)如果一个有缺失的X染色体,优先失活; 2)常染色体和X染色体平衡易位的个体中,正常的ⅹ 染色体优先失活; 3)Xchr上的Gene不全部失活,约1/3的gene逃避失 活,已知>16个基因逃避失活; 4)体细胞ⅹ失活是永久的,但在生殖细胞发育中, 失活是可逆的; 5)C中只有一条X染色体有活性,其他均以失活状态 存在;
8 需要说明的问题 ▪ 1）如果一个有缺失的X染色体，优先失活； ▪ 2）常染色体和X染色体平衡易位的个体中，正常的X 染色体优先失活； ▪ 3）Xchr上的Gene不全部失活，约1/3的gene逃避失 活，已知>16个基因逃避失活； ▪ 4）体细胞X失活是永久的，但在生殖细胞发育中， 失活是可逆的； ▪ 5）C中只有一条X染色体有活性，其他均以失活状态 存在；
四、实验方法 ◆受检者漱口后,用牙签刮取口腔粘膜上皮细胞, 均匀涂在干净的载玻片上(约一张盖玻片大小) 用记号笔标记细胞面,不等涂布干燥,立即放入 3:1甲醇—冰醋酸固定液中,固定15分钟后取出 玻片标本置于5MHc中,水解15min,充分冲洗, 除去多余的盐酸,0.2%甲苯胺蓝染液染色5min, 分别置于70%、95%及无水乙醇中做脱水处理, 晾干后镜检
四、实验方法 受检者漱口后，用牙签刮取口腔粘膜上皮细胞， 均匀涂在干净的载玻片上（约一张盖玻片大小）， 用记号笔标记细胞面，不等涂布干燥，立即放入 3：1甲醇—冰醋酸固定液中，固定15分钟后取出 玻片标本置于5M HCl中，水解15min，充分冲洗， 除去多余的盐酸， 0.2％甲苯胺蓝染液染色5min， 分别置于70%、95%及无水乙醇中做脱水处理， 晾干后镜检
五、结果与分析 ◆1.由于处于核膜内侧的X染色质在压片时可能被 压在核的中央,这种情形下,X染色质容易与核 中其它的着色的结构相混。为避免临床检测的误 诊,计算X染色质时,只选择位于核膜内侧边缘、 为核内唯一轮廓清楚的半圆形或三角形浓染小体 ◆2.从理论上讲,正常女性的间期细胞中都应该有 一个X染色质,但事实上由于染色方法、染色技 术以及X染色质在细胞核中的位置不同,实际检 查中不可能在每个细胞中都看到
五、结果与分析 1. 由于处于核膜内侧的X染色质在压片时可能被 压在核的中央，这种情形下，X染色质容易与核 中其它的着色的结构相混。为避免临床检测的误 诊，计算X染色质时，只选择位于核膜内侧边缘、 为核内唯一轮廓清楚的半圆形或三角形浓染小体。 2. 从理论上讲，正常女性的间期细胞中都应该有 一个X染色质，但事实上由于染色方法、染色技 术以及X染色质在细胞核中的位置不同，实际检 查中不可能在每个细胞中都看到