实验七农药残留量分析 目的要求 初步掌握农药残留量分析的最基本操作技术和方法。 原理 残留量分析的基础是色谱法，应用薄层色谱和气相色谱法，农药分析的检测水平可达到 106-10122 薄层色诺法是在玻璃板上用吸附剂（硅胶、氧化铝等）铺成薄层作为固定相，常用吸附 剂一般都是粒度比较细小的多孔性物质，其吸附现象主要是物理吸附，当固体吸附剂与溶剂 (流动相)把试样展开时，作为流动相的液体从固体组成的固定相的间隙中通过，由于试样 (溶质)中各组分对吸附剂亲和力大的溶质与溶剂（流动相）竞争能力强一些，因而被吸附 得多一些：与吸附剂结合得牢周性也强一些，因而被吸附的多一些：与吸附剂结合得牢固性 也强一些。反之 亲和力小的溶剂，竞争能力小一些，吸附量也少 一些，这种不同溶质得 争能力得差别便是吸附剂能将混合物组分分离的基础。当我们加一小滴混合物得样品溶液 薄层板上的时候，全部物质吸附于原点上，接着，我们用溶液进行展开，此时吸附物部分的 解析，解吸也连循竞争规则，即亲和力大的吸附物难解吸一些，而亲和力小的吸附物则易于 解吸，落剂携带若解吸后的溶质向前移动时，又会调到新的吸附剂，于是溶液中的溶质又重 新被吸附。这是，吸附同样要遵循竞争规则。因为不断供给新鲜溶剂，所以解吸一吸附一解 吸的过程也是不断重复进行，并且迫使溶质以 定速 向前移 各种溶质在固定相 流动相之间亲和力各不相同，移动速度也各不相同。这样，不同物质就彼此分开了。 实验方法 取样：取经乐果处理过的蔬菜，除去桔黄叶及根，用水洗后沥干切碎，称取15一2.5kg 采样后的分析工作应尽快进行，如不能进行，应在低温(5一10℃)下储藏样品。 提取 从上述切碎样本中称取100： 加入150ml苯中 ，经捣碎机快速捣碎2分钟后， 将捣碎样品置于离心机(3000转/分)离心10分钟，抽气过滤。滤液再通过装3cm无水硫 酸钠玻璃拄中脱水，用氮气流吹气浓缩至10一20ml。 净化：取具活塞砂芯的玻璃层析管（口径3cm,高30cm),管内底层铺入用氯仿处理过 的脱脂棉花少量，第二层时无水硫酸钠.第三层是吸附为《即活性炭25。、陆藻土4、弗罗 里土1g 中性氧化铝5g等均匀混合)，第四层是无水硫酸钠，第五层再铺上少量棉花。净 化柱制完后，用氯仿20ml预洗一次，打开层色柱活塞，把多余的氯仿放出，再把提取浓缩 液倒入层析柱中，然后用烧杯接收柱液，用30ml氯仿分3次淋洗，用氮气吹至约5ml左右， 转移到K、D浓缩管中再减压浓缩，并定容至1ml,放入冰箱内待测。 制板：取硅胶G6g,加蒸馏水12ml用研体混匀成浆液，迅速倒入涂布器内涂布于10X 12©m的干净玻璃板上，立即用手提板的一端。而板的另 一端靠台面而上下振动，使浆液分 布均匀平滑，在室温下自然干燥，再放入恒温箱内，经110℃活化1小时，移至干燥器内备 标准溶液配制：以98%乐果晶体，用石油醚多次洗涤后，于氯仿中重新结晶，再用无 水乙醚重结品两次，即得到无臭白色结品乐果，用熔点及薄层层析法检验其纯度。取纯净乐 果晶体50mg溶于50ml丙酮中，即得1mg1ml的标准母液(1000ppm),并以此母液稀释成 100、50和20ppm等标准浓度 回收率 每个样本的分析，需检定所用的分析方法是否准确，一般检定采用回收率方法检验，如 果回收率能在80一90%的范围内，即认为本法可靠。做法是在无药处理蔬菜如以白菜为例， 在白菜捣碎之前加入含一定量的乐果丙丽液（本实验加500ug乐果于100g白菜中），混入菜
实验七 农药残留量分析 目的要求 初步掌握农药残留量分析的最基本操作技术和方法。 原理 残留量分析的基础是色谱法，应用薄层色谱和气相色谱法，农药分析的检测水平可达到 10－6－10－12g。 薄层色谱法是在玻璃板上用吸附剂（硅胶、氧化铝等）铺成薄层作为固定相，常用吸附 剂一般都是粒度比较细小的多孔性物质，其吸附现象主要是物理吸附，当固体吸附剂与溶剂 （流动相）把试样展开时，作为流动相的液体从固体组成的固定相的间隙中通过，由于试样 （溶质）中各组分对吸附剂亲和力大的溶质与溶剂（流动相）竞争能力强一些，因而被吸附 得多一些；与吸附剂结合得牢固性也强一些，因而被吸附的多一些；与吸附剂结合得牢固性 也强一些。反之，亲和力小的溶剂，竞争能力小一些，吸附量也少一些，这种不同溶质得竞 争能力得差别便是吸附剂能将混合物组分分离的基础。当我们加一小滴混合物得样品溶液于 薄层板上的时候，全部物质吸附于原点上，接着，我们用溶液进行展开，此时吸附物部分的 解析，解吸也遵循竞争规则，即亲和力大的吸附物难解吸一些，而亲和力小的吸附物则易于 解吸，溶剂携带着解吸后的溶质向前移动时，又会遇到新的吸附剂，于是溶液中的溶质又重 新被吸附。这是，吸附同样要遵循竞争规则。因为不断供给新鲜溶剂，所以解吸－吸附－解 吸的过程也是不断重复进行，并且迫使溶质以一定速度向前移动。由于各种溶质在固定相和 流动相之间亲和力各不相同，移动速度也各不相同。这样，不同物质就彼此分开了。 实验方法 取样：取经乐果处理过的蔬菜，除去桔黄叶及根，用水洗后沥干切碎，称取 1.5－2.5kg， 采样后的分析工作应尽快进行，如不能进行，应在低温（5－10℃）下储藏样品。 提取：从上述切碎样本中称取 100g，加入 150ml 苯中，经捣碎机快速捣碎 2 分钟后， 将捣碎样品置于离心机（3000 转/分）离心 10 分钟，抽气过滤。滤液再通过装 3cm 无水硫 酸钠玻璃拄中脱水，用氮气流吹气浓缩至 10－20ml。 净化：取具活塞砂芯的玻璃层析管（口径 3cm，高 30cm），管内底层铺入用氯仿处理过 的脱脂棉花少量，第二层时无水硫酸钠，第三层是吸附剂(即活性炭 2.5g、硅藻土 4g、弗罗 里土 1g、中性氧化铝 5g 等均匀混合)，第四层是无水硫酸钠，第五层再铺上少量棉花。净 化柱制完后，用氯仿 20ml 预洗一次，打开层色柱活塞，把多余的氯仿放出，再把提取浓缩 液倒入层析柱中，然后用烧杯接收柱液，用 30ml 氯仿分 3 次淋洗，用氮气吹至约 5ml 左右， 转移到 K、D 浓缩管中再减压浓缩，并定容至 1ml，放入冰箱内待测。 制板：取硅胶 G6g，加蒸馏水 12ml,用研钵混匀成浆液，迅速倒入涂布器内涂布于 10× 12cm 的干净玻璃板上，立即用手提板的一端，而板的另一端靠台面而上下振动，使浆液分 布均匀平滑，在室温下自然干燥，再放入恒温箱内，经 110℃活化 1 小时，移至干燥器内备 用。 标准溶液配制：以 98％乐果晶体，用石油醚多次洗涤后，于氯仿中重新结晶，再用无 水乙醚重结晶两次，即得到无臭白色结晶乐果，用熔点及薄层层析法检验其纯度。取纯净乐 果晶体 50mg 溶于 50ml 丙酮中，即得 1mg/1ml 的标准母液（1000ppm），并以此母液稀释成 100、50 和 20ppm 等标准浓度。 回收率 每个样本的分析，需检定所用的分析方法是否准确，一般检定采用回收率方法检验，如 果回收率能在 80－90％的范围内，即认为本法可靠。做法是在无药处理蔬菜如以白菜为例， 在白菜捣碎之前加入含一定量的乐果丙酮液（本实验加 500ug 乐果于 100g 白菜中），混入菜
中，经捣碎、过滤、净化等分析步骤（与样本处理相同）。通过点板分析，本法的灵敏度可 达0.05ppm,乐果的值Rr在0.4一0.5，各次分析重现性良好。 点样：有两种。一种是把经过浓缩好的样本液定量地直接点在薄板上：另一种则先制备 好小滤纸片，把样本液点在滤纸片上，然后把小滤纸片移到薄板上。如果点样量不大，可以 用前一种，而点样量大则可以用后一种。具体操作是在制好的薄板下端2处定点（一般可以 定5个)，把标准液定量地点滴在1、3、5位置上，样本点在2、4位置上。具体量应根据标 准液的显出灵敏度多少来决定。 展开：采用单向二次层析。第一次为石油醚（沸程60一90℃）：：苯(1：1vw):第二 次为氯仿：丙酮(8：2vw)。 显色：薄板展开后取出，自然干燥，把板置于溴蒸汽中约30秒，取出，挥发尽溴蒸汽 后，喷洒0.4%刚果红乙醇(50%)溶液。薄层底色为桃红色，杀虫剂斑点颜色为深蓝色， 色差大，斑点轮廓清晰，一般采用玻璃喷雾器喷洒显色剂，要求喷成雾状，注意喷雾器和薄 板之间距离不宜太近，以免喷洒气流破坏博板层。 定量：可分粗定量和精确定量。粗定量是自同一样品吸取不同的量与各种浓度的标准农 药液点在同一块薄层板上。展开显色后，根据样品中农药与标准农药的斑点面积和颜色的比 较，粗略定出样品中农药的含量。精确定量是根据粗定量的结果，将欲分析的样品吸取一定 量，再把标准农药液及标准农药的稀释液一起定于同一块薄层板上，但标准农药溶液及稀释 溶液的浓度应选择在样品粗定量结果的接近范围内。例如：粗定量的结果约为每克样本中含 2的农药，则吸取相当于1样品的量点样时，标准农药液的浓度可为3，稀释液可为1，这 样误差可控制在1以下。若再多次重复，取其平均值，可提高定量的精确度。点样后，按常 法进行层析。显色后，用自制测微方格板，于放大镜或解剖镜下数出三个斑点面积数，随后 将三个斑点面积数代入下列公式，即可求得未知试样的量。 另外，也可用标准样本求出其最低检出量，然后滴不同量的未知样品，求出其显现斑点 时的所需样本量，再计算出未知样品中的农药含量。 农药含量(ppm)=标准液最低检出量(ug)/点滴样本克数 测微方格板的制法：用绘图纸画成线条清晰、粗细均匀的小方格(0.25×0.25cm),每5 ×5小方格画一粗黑线大格，大格间的中心处画一黑标记，共画35格大格，然后用黑像反 拍，每拍一张后，把照相机的距离升高一次，这样制成一套各种尺寸的方格照片，再经拷贝 制成透明格子的底片。 习作 1根据你进行的样本和标准溶液的斑点面积和颜色的深浅用肉眼观察定量：并用自制的 测微方格板计算斑点面积。代入公式，求出样本的残留量？ 2.应用本方法，在一定条件下，其回收率可以达到80一90%，如达不到，可能是哪些主 要因素影响？
中，经捣碎、过滤、净化等分析步骤（与样本处理相同）。通过点板分析，本法的灵敏度可 达 0.05ppm，乐果的值 Rf在 0.4－0.5，各次分析重现性良好。 点样：有两种。一种是把经过浓缩好的样本液定量地直接点在薄板上；另一种则先制备 好小滤纸片，把样本液点在滤纸片上，然后把小滤纸片移到薄板上。如果点样量不大，可以 用前一种，而点样量大则可以用后一种。具体操作是在制好的薄板下端 2 处定点（一般可以 定 5 个），把标准液定量地点滴在 1、3、5 位置上，样本点在 2、4 位置上。具体量应根据标 准液的显出灵敏度多少来决定。 展开：采用单向二次层析。第一次为石油醚（沸程 60－90℃）∶:苯（1∶1v/v）；第二 次为氯仿∶丙酮（8∶2v/v）。 显色：薄板展开后取出，自然干燥，把板置于溴蒸汽中约 30 秒，取出，挥发尽溴蒸汽 后，喷洒 0.4％刚果红乙醇（50％）溶液。薄层底色为桃红色，杀虫剂斑点颜色为深蓝色， 色差大，斑点轮廓清晰，一般采用玻璃喷雾器喷洒显色剂，要求喷成雾状，注意喷雾器和薄 板之间距离不宜太近，以免喷洒气流破坏博板层。 定量：可分粗定量和精确定量。粗定量是自同一样品吸取不同的量与各种浓度的标准农 药液点在同一块薄层板上。展开显色后，根据样品中农药与标准农药的斑点面积和颜色的比 较，粗略定出样品中农药的含量。精确定量是根据粗定量的结果，将欲分析的样品吸取一定 量，再把标准农药液及标准农药的稀释液一起定于同一块薄层板上，但标准农药溶液及稀释 溶液的浓度应选择在样品粗定量结果的接近范围内。例如：粗定量的结果约为每克样本中含 2 的农药，则吸取相当于 1 样品的量点样时，标准农药液的浓度可为 3，稀释液可为 1，这 样误差可控制在 1 以下。若再多次重复，取其平均值，可提高定量的精确度。点样后，按常 法进行层析。显色后，用自制测微方格板，于放大镜或解剖镜下数出三个斑点面积数，随后 将三个斑点面积数代入下列公式，即可求得未知试样的量。 另外，也可用标准样本求出其最低检出量，然后滴不同量的未知样品，求出其显现斑点 时的所需样本量，再计算出未知样品中的农药含量。 农药含量（ppm）=标准液最低检出量（ug）/点滴样本克数 测微方格板的制法：用绘图纸画成线条清晰、粗细均匀的小方格（0.25×0.25cm），每 5 ×5 小方格画一粗黑线大格，大格间的中心处画一黑标记，共画 35 格大格，然后用黑像反 拍，每拍一张后，把照相机的距离升高一次，这样制成一套各种尺寸的方格照片，再经拷贝 制成透明格子的底片。 习作 1.根据你进行的样本和标准溶液的斑点面积和颜色的深浅用肉眼观察定量；并用自制的 测微方格板计算斑点面积。代入公式，求出样本的残留量？ 2.应用本方法，在一定条件下，其回收率可以达到 80－90％，如达不到，可能是哪些主 要因素影响？