实验一园艺植物实用生物技术实验室及仪器设备 一、目的要求 (一)一般掌握组织培养常用仪器设备的结构与维护： (二)熟练掌握常用仪器设备的正确使用方法。 二、常用仪器设备 分析天平：灭菌器：蒸馏水器等。 三、方法步骤 (一)电子分析天平的构造及使用 1.构造： 电子分析天平主要由：天平机体、称重舱、天平盘、键板（包括4个键）、液晶显示屏等构成。 2.使用： (1)调平天平放稳后，转动脚螺旋，使水平气泡在水平指示的红环内： (2)自检在空载下，天平内部进行自检，显示屏上相继显示CHE3→O,CALA→O,CAL,END,CAL,OFF: (3)全显示按"ON/OF℉"键，液晶屏进入全显示态： (4)这时再按”ON/OF℉'键，液晶屏进入预热状态，有绿色指示灯显示。平时可放置在这个状态。当 再启动"ON/OFF"键，又进入全显示状态： (5)清零按Tare键，液晶屏显示"0"进入待测状态： (6)去皮重清零将疏酸纸放在天平盘上，再按Tare键清零，液晶屏再显示"0"状态： (7)称样品将药品放在硫酸纸上，至液晶屏左侧稳定标志”→“出现，读数即为样品重量。小数点前 为克单位。如1.234即为1.234克。 3.注意 (1)本天平为精密仪器。使用时手要洁净干燥。使用的样品、容器及硫酸纸一定要洁净干燥，切勿将 药品直接放到天平盘上： (2)不要把水，金属弄到天平盘上： (3)天平严禁靠近磁性物体： (4)天平使用时，不要撞击天平所在桌面，要关上附近的窗户，以防气流影响称重。 (5)无平必须进入预热态方可断电。 (二)便携式灭菌锅和立式灭菌锅的构造及使用 1.便携式灭菌器 (1)构造：便携式灭菌器主要由锅体、内胆、电热管、帘子、锅盖、气压表、放气阀、安全阀、紧定 丝母等零部件构成。 (2)工作原理：由于在密闭且耐压的容器内，产生的水蒸气可以超过一个大气压，即达到超过100℃的 温度，从而达到灭菌的目的。 (3)使用 ①打开锅盖，加入清水，至接近帘子的程度，然后装入培养物，盖上盖，对角线拧紧丝母： ②接通电源，使灭菌器开始工作。当压力表指针升到0.05MP时，打开放气阀放出冷气，直至回零，关 闭放气阀，使灭菌器继续工作。 ③当压力达到0.10MPa时，开始计算时间，使压力表保持0.10~0.15的范围，维持一定灭菌时间，不 同消毒物品所需时间不同，一般灭菌20~30min。 ④放气取物。当灭菌到所需时间时，断开电源，让压力自然下降。当达到0.O5P时可放出蒸气，至零 时，打开锅取出物品。 2.立式灭菌器 (1)构造：立式灭菌器主要由总阀、气压表、放气阀、丝杠扳手、紧定丝母、水碗、进水阀、水位线 标志、排水阀、夹层压力表等零部件构成。 (2)使用 ①加水：打开进水阀，向水碗注入清水直至水位到标志线为止，然后关闭进水阀： ②移开上盖装入物品：顺时针方向旋动丝杠扳手使上盖离开上口后，推动横梁移开上盖，装入灭菌物 品，注意留有空隙以利消毒彻底：
实验一 园艺植物实用生物技术实验室及仪器设备 一、目的要求 （一）一般掌握组织培养常用仪器设备的结构与维护； （二）熟练掌握常用仪器设备的正确使用方法。 二、常用仪器设备 分析天平；灭菌器；蒸馏水器等。 三、方法步骤 （－）电子分析天平的构造及使用 1．构造： 电子分析天平主要由：天平机体、称重舱、天平盘、键板（包括4个键）、液晶显示屏等构成。 2．使用： （1）调平 天平放稳后，转动脚螺旋，使水平气泡在水平指示的红环内； （2）自检 在空载下，天平内部进行自检，显示屏上相继显示CHE3→0，CAL4→0，CAL，END，CAL，OFF； （3）全显示 按"ON／OFF"键，液晶屏进入全显示态； （4）这时再按"ON／OFF’键，液晶屏进入预热状态，有绿色指示灯显示。平时可放置在这个状态。当 再启动"ON／OFF"键，又进入全显示状态； （5）清零 按Tare键，液晶屏显示"0"进入待测状态； （6）去皮重清零 将硫酸纸放在天平盘上，再按Tare键清零，液晶屏再显示"0"状态； （7）称样品 将药品放在硫酸纸上，至液晶屏左侧稳定标志"→"出现，读数即为样品重量。小数点前 为克单位。如1．234即为1．234克。 3．注意 （1）本天平为精密仪器。使用时手要洁净干燥。使用的样品、容器及硫酸纸一定要洁净干燥，切勿将 药品直接放到天平盘上； （2）不要把水，金属弄到天平盘上； （3）天平严禁靠近磁性物体； （4）天平使用时，不要撞击天平所在桌面，要关上附近的窗户，以防气流影响称重。 （5）无平必须进入预热态方可断电。 （二）便携式灭菌锅和立式灭菌锅的构造及使用 1．便携式灭菌器 （1）构造：便携式灭菌器主要由锅体、内胆、电热管、帘子、锅盖、气压表、放气阀、安全阀、紧定 丝母等零部件构成。 （2）工作原理：由于在密闭且耐压的容器内，产生的水蒸气可以超过一个大气压，即达到超过100℃的 温度，从而达到灭菌的目的。 （3）使用 ①打开锅盖，加入清水，至接近帘子的程度，然后装入培养物，盖上盖，对角线拧紧丝母； ②接通电源，使灭菌器开始工作。当压力表指针升到0．05MPa时，打开放气阀放出冷气，直至回零，关 闭放气阀，使灭菌器继续工作。 ③当压力达到0．10MPa时，开始计算时间，使压力表保持0．10～0．15的范围，维持一定灭菌时间，不 同消毒物品所需时间不同，一般灭菌 20～30min。 ④放气取物。当灭菌到所需时间时，断开电源，让压力自然下降。当达到0．05MPa时可放出蒸气，至零 时，打开锅取出物品。 2．立式灭菌器 （l）构造：立式灭菌器主要由总阀、气压表、放气阀、丝杠扳手、紧定丝母、水碗、进水阀、水位线 标志、排水阀、夹层压力表等零部件构成。 （2）使用 ①加水：打开进水阀，向水碗注入清水直至水位到标志线为止，然后关闭进水阀； ②移开上盖装入物品；顺时针方向旋动丝杠扳手使上盖离开上口后，推动横梁移开上盖，装入灭菌物 品，注意留有空隙以利消毒彻底；
③关闭上盖：逆时针转动丝杠扳手直至紧到不能转为止： ④以下过程同便携式灭菌器。 3.蒸馏水器 (1)构造：蒸馏水器主要由冷凝器、回水管、进水阀、蒸馏水出口管、水位表、蒸发锅、水碗、放水 阀、电源指示灯等零部件构成。 (2)原理：蒸发锅加热后向上产生水蒸气，当水蒸气遇到凉的冷凝器便凝结成水滴从蒸馏水出口管流 出。 (3)使用 ①加水：打开水源阀，使自来水通过冷凝器回水管进入蒸发锅，直至水位达水位表可见处： ②加热：接通电源，加热到有热气从水碗冒出时，重新开启水源阀，并且调到水流合适为止，约离水碗 上边缘1cm: ③关阀：当蒸馏水烧完时，先关闭水源再关闭电源。 (4)注意：通电时一定要有水通过。 4.pH值计的使用 (1)用标准H值溶液标定pH值：取随机器带来的药品袋按要求配成已知H值溶液，将联好的甘汞电极头插 入溶液中，旋转定位钮，使荧屏显示值和已知H值相同，然后固定住定位纽： (2)测定待测液：将甘汞电极头用蒸馏水洗净。插入待测液中，液晶屏的读数即为溶液H值。若溶液 有一定温度，应取温度计测量出温度，旋转H值计的温度调节钮，使之与测量液体温度相当，再读数即可。 四、作业 (一)简述上述各仪器的结构： (二)说明上述各仪器的使用方法与注意事项。 实验二MS培养基母液的配制与保存 一、目的要求 (一)掌握培养基的化学组成：掌握MS培养基的配方组成： (二)熟练掌握常用培养基母液的制备方法。 二、实验内容 (一)原理 培养基主要是由水分、无机物质、有机物质、天然复合物质和凝固剂（或培养体的支持材料）五部分构成。 在植物组织培养中，配制培养基是经常性的工作。为了准确称量和快速移取，以及便于贮藏，通常是把培养 基先配制成一系列浓缩液，即母液。母液的浓缩倍数一般为10~100倍，可分为大量元素母液、微量元素母液、 有机物质母液（维生素、氨基酸等）、铁盐母液和激素类母液五种。 (二)用品 配制MS培养基所需药品：生长调节剂(2,4一D、NAA、IBA、6一BA):托盘天平6台：电子分析天平1台： 500m1烧杯6只：100ml烧杯24只：量筒(100ml)12只：定容瓶(1000ml)3只：各类移液管数只：蒸馏水： 95%酒精：0.1mol/LNa0H:0.1mol/LHCL:棕色细口母液瓶(1000ml3只、500ml1只、100ml4只：标签纸3 张：冰箱1台：电饭锅3只等。 三、方法与步骤 1、MS基本培养基配方： MS培养基 化合物 用量(mg/L) 大量元素 NH4·NO3 1650 KNO3 1900 CaCL·2H20 440 MgS04·7H20 370 KH2PO4 170
③关闭上盖；逆时针转动丝杠扳手直至紧到不能转为止； ④以下过程同便携式灭菌器。 3．蒸馏水器 （1）构造：蒸馏水器主要由冷凝器、回水管、进水阀、蒸馏水出口管、水位表、蒸发锅、水碗、放水 阀、电源指示灯等零部件构成。 （2）原理；蒸发锅加热后向上产生水蒸气，当水蒸气遇到凉的冷凝器便凝结成水滴从蒸馏水出口管流 出。 （3）使用 ①加水：打开水源阀，使自来水通过冷凝器回水管进入蒸发锅，直至水位达水位表可见处； ②加热：接通电源，加热到有热气从水碗冒出时，重新开启水源阀，并且调到水流合适为止，约离水碗 上边缘1cm； ③关阀：当蒸馏水烧完时，先关闭水源再关闭电源。 （4）注意：通电时一定要有水通过。 4．ｐH值计的使用 （1）用标准pH值溶液标定pH值：取随机器带来的药品袋按要求配成已知pH值溶液，将联好的甘汞电极头插 入溶液中，旋转定位钮，使荧屏显示值和已知pH值相同，然后固定住定位纽； （2）测定待测液：将甘汞电极头用蒸馏水洗净。插入待测液中，液晶屏的读数即为溶液pH值。若溶液 有一定温度，应取温度计测量出温度，旋转pH值计的温度调节钮，使之与测量液体温度相当，再读数即可。 四、作业 （一）简述上述各仪器的结构； （二）说明上述各仪器的使用方法与注意事项。 实验二 MS培养基母液的配制与保存 一、目的要求 （一）掌握培养基的化学组成；掌握MS培养基的配方组成； （二） 熟练掌握常用培养基母液的制备方法。 二、实验内容 （一）原理 培养基主要是由水分、无机物质、有机物质、天然复合物质和凝固剂（或培养体的支持材料）五部分构成。 在植物组织培养中，配制培养基是经常性的工作。为了准确称量和快速移取，以及便于贮藏，通常是把培养 基先配制成一系列浓缩液，即母液。母液的浓缩倍数一般为10～100倍，可分为大量元素母液、微量元素母液、 有机物质母液（维生素、氨基酸等）、铁盐母液和激素类母液五种。 （二）用品 配制MS培养基所需药品；生长调节剂（2，4－D、NAA、IBA、6－BA）；托盘天平6台；电子分析天平1台； 500 ml烧杯6只；100 ml烧杯24只；量筒（100 ml）12只；定容瓶（1000ml）3只；各类移液管数只；蒸馏水； 95%酒精；0.1mol∕LNaOH；0.1mol∕L HCL；棕色细口母液瓶（1000 ml3只、500 ml1只、100 ml4只；标签纸3 张；冰箱1台；电饭锅3只等。 三、方法与步骤 1、MS基本培养基配方： MS培养基 化合物 用量（mg∕L） 大量元素 NH4·NO3 1650 KNO3 1900 CaCL·2H2O 440 MgSO4·7H2O 370 KH2PO4 170
微量元素 FeS04·7H20 27.8 Na2-EDTA 37.3 MhS04·4H20 22.3 Zns04·7H20 8.6 CoCL2·6H20 0.025 CuS04·5H20 0.025 Na2lMo4·2H20 0.25 KI 0.83 H3B03 6.2 有机物质 盐酸吡哆醇(VB6) 0.5 盐酸硫胺素(VB1) 0.1 肌醇 100 甘氨酸 2 烟酸(Vpp) 0.5 2、配制方法与步骤 (1)大量元素母液的配制 1)称量：用托盘天平称取下列药品，分别放入烧杯中，用少量蒸馏水（约100m1)溶解： NHaNO3 16.5g KNO3 19g 上述两种药品可溶解在一起。 KH2P04 1.7 8 MgS04·7H20 3.7g CaCL·2H20(可单独配制成100倍母液) 4.4g 2)混合：于容量瓶中依次混合上述已溶解的药品： 3)定容：加蒸馏水定容至1000ml,即成浓缩10倍的大量元素母液。 (2)微量元素母液的配制 1)称量：用电子分析天平准确称取下列药品，分别放入烧杯中，加少量蒸馏水（约100ml)溶解： HaBO3 0.62g MhS04·4H20 2.23g ZnS04·7H20 0.86g KI 0.083g Na2Mo4·2H20 0.025g CuS04·5H20 0.0025g CoCL2·6H20 0.0025g 2)混合：于容量瓶中将上述药品依次混合： 3)定容：加蒸馏水定容至1000ml,即成浓缩100倍的微量元素母液。 (3)铁盐母液的配制 1)称量：用托盘天平称取下列药品，分别放入烧杯中，用少量蒸馏水（约100m1)溶解： FeS04·7H20 2.87g
微量元素 FeSO4·7H2O 27.8 Na2-EDTA 37.3 MnSO4·4H2O 22.3 ZnSO4·7H2O 8.6 CoCL2·6H2O 0.025 CuSO4·5H2O 0.025 Na2Mo4·2H2O 0.25 KI 0.83 H3BO3 6.2 有机物质 盐酸吡哆醇（VB6） 0.5 盐酸硫胺素（VB1） 0.1 肌醇 100 甘氨酸 2 烟酸（Vpp） 0.5 2、配制方法与步骤 （1）大量元素母液的配制 1）称量：用托盘天平称取下列药品，分别放入烧杯中，用少量蒸馏水（约100ml）溶解； NH4NO3 16.5g KNO3 19 g 上述两种药品可溶解在一起。 KH2PO4 1.7 g MgSO4·7H2O 3.7 g CaCL·2H2O（可单独配制成100倍母液） 4.4 g 2）混合：于容量瓶中依次混合上述已溶解的药品； 3）定容：加蒸馏水定容至1000ml，即成浓缩10倍的大量元素母液。 （2）微量元素母液的配制 1）称量：用电子分析天平准确称取下列药品，分别放入烧杯中，加少量蒸馏水（约100ml）溶解； H3BO3 0.62 g MnSO4·4H2O 2.23 g ZnSO4·7H2O 0.86 g KI 0.083 g Na2Mo4·2H2O 0.025 g CuSO4·5H2O 0.0025 g CoCL2·6H2O 0.0025 g 2）混合：于容量瓶中将上述药品依次混合； 3）定容：加蒸馏水定容至1000ml，即成浓缩100倍的微量元素母液。 （3）铁盐母液的配制 1）称量：用托盘天平称取下列药品，分别放入烧杯中，用少量蒸馏水（约100ml）溶解； FeSO4·7H2O 2.87 g
Na2- EDTA 3.73g 2)混合：于容量瓶中依次混合上述已溶解的药品： 3)定容：加蒸馏水定容至1000ml,即成浓缩100倍的铁盐母液。 (4)有机物质母液的配制 1)称量：用电子分析天平称取下列药品，分别放入烧杯中，用少量蒸馏水（约50m1)各自溶解： 肌醇 5g 甘氨酸 0.1g 烟酸(Vpp) 0.025g 盐酸吡哆醇(VB6) 0.025g 盐酸硫胺素(VB,) 0.005g 2)混合：于容量瓶中将上述已溶解的药品依次混合： 3)定容：加蒸馏水定容至500ml,即成浓缩50倍的有机物质母液。 (5)激素类母液的配制 1)称量：用电子分析天平准确称取下列激素类药品各0.01g: IBA、NAA、2,4-D:6-BA。 2)溶解：生长素类(IBA、NAA、2,4-D)可先用少量0.1mo1/LNaOH或95%酒精溶解：细胞分裂素类(6 BA)可先用0.1mol/L的HCL溶解： 3)定容：将上述已溶解的各激素溶液分别加蒸馏水定容至500ml,即成浓缩至0.1mg/5ml的激素类母液。 3、母液的保存 (1)装瓶 将配制好的各母液分别倒入瓶中，贴上标签，注明培养基名称、母液号、浓缩倍数、配制日期以及配制1L工 作培养基时应移取的量。 (2)储藏：将各母液瓶放入冰箱内低温保藏。 四、作业 (一)模拟称量药品，要求达到快速、准确： (二)简述各种母液的配制方法与注意事项： (三)熟悉MS基本培养基的配方组成。 实验三 培养基(MS培养基)的配制 一、目的要求 (一)熟练掌握配制MS工作培养基的基本技能： (二)掌握母液移取、培养基的熬制与分装、扎口技术与灭菌方法。 二、实验内容 (一)原理 配制工作培养基时，按照标准配方和终体积，依次量取各种母液于容量瓶（或烧杯）中，再定容至终体积即可。 培养基的灭菌通常采用高温高压湿热灭菌法，即在密闭的锅体内，随着压力的上升，水的沸点也随之增加， 从而大幅度提高水蒸气的温度。在121.3℃下，保持15~20min,即可达到灭菌目的。 (二)用品 实践二所配制MS培养基的各种母液：琼脂；蔗糖：蒸馏水：0.1mol/LNaOH;0.1mol/LHCL:移液管：量 筒：容量瓶：三角瓶：标签；记号笔：注射器；封口塑料：电饭锅；酸度计：高压灭菌锅等。 三、方法与步骤 1、工作培养基的配制与分装 (1)按照母液顺序和所需量，用量筒和专一对应的移液管依次量取下列各母液于容量瓶中： 1)大量元素母液：100ml: 2)微量元素母液：10ml: 3)铁盐母液：10ml: 4)有机物质母液：10ml: 5)激素类母液：按照需要
Na2- EDTA 3.73 g 2）混合：于容量瓶中依次混合上述已溶解的药品； 3）定容：加蒸馏水定容至1000ml，即成浓缩100倍的铁盐母液。 （4）有机物质母液的配制 1）称量：用电子分析天平称取下列药品，分别放入烧杯中，用少量蒸馏水（约50ml）各自溶解； 肌醇 5 g 甘氨酸 0.1 g 烟酸（Vpp） 0.025 g 盐酸吡哆醇（VB6） 0.025 g 盐酸硫胺素（VB1） 0.005 g 2）混合：于容量瓶中将上述已溶解的药品依次混合； 3）定容：加蒸馏水定容至500ml，即成浓缩50倍的有机物质母液。 （5）激素类母液的配制 1）称量：用电子分析天平准确称取下列激素类药品各0.01g： IBA、NAA、2,4－D；6－BA。 2）溶解：生长素类（IBA、NAA、2,4－D）可先用少量0.1mol∕LNaOH或95%酒精溶解；细胞分裂素类（6－ BA）可先用0.1mol∕L的 HCL溶解； 3）定容：将上述已溶解的各激素溶液分别加蒸馏水定容至500ml，即成浓缩至0.1mg∕5ml的激素类母液。 3、母液的保存 （1）装瓶 将配制好的各母液分别倒入瓶中，贴上标签，注明培养基名称、母液号、浓缩倍数、配制日期以及配制1L工 作培养基时应移取的量。 （2）储藏：将各母液瓶放入冰箱内低温保藏。 四、作业 （一）模拟称量药品，要求达到快速、准确； （二）简述各种母液的配制方法与注意事项； （三）熟悉MS基本培养基的配方组成。 实验三 培养基（MS培养基）的配制 一、目的要求 （一）熟练掌握配制MS工作培养基的基本技能； （二）掌握母液移取、培养基的熬制与分装、扎口技术与灭菌方法。 二、实验内容 （一）原理 配制工作培养基时，按照标准配方和终体积，依次量取各种母液于容量瓶（或烧杯）中，再定容至终体积即可。 培养基的灭菌通常采用高温高压湿热灭菌法，即在密闭的锅体内，随着压力的上升，水的沸点也随之增加， 从而大幅度提高水蒸气的温度。在121.3℃下，保持15～20min，即可达到灭菌目的。 （二）用品 实践二所配制MS培养基的各种母液；琼脂；蔗糖；蒸馏水；0.1mol∕LNaOH；0.1mol∕L HCL；移液管；量 筒；容量瓶；三角瓶；标签；记号笔；注射器；封口塑料；电饭锅；酸度计；高压灭菌锅等。 三、方法与步骤 1、工作培养基的配制与分装 （1）按照母液顺序和所需量，用量筒和专一对应的移液管依次量取下列各母液于容量瓶中； 1）大量元素母液：100ml； 2）微量元素母液：10 ml； 3）铁盐母液：10 ml； 4）有机物质母液：10 ml； 5）激素类母液：按照需要
(2)定容：加蒸馏水至刻度，摇匀： (3)熔化（熬制）：将容量瓶内的培养基倒入铝锅中，另将预先称好的6~10g琼脂和30g蔗糖也加入锅中， 加热煮化。先用旺火烧开，再用文火煮溶。注意经常搅拌，防止糊底。 (4)调pH:待培养基冷却后，用酸度计或pH试纸测试pH值，可用0.1mo1/Lna0或0.1mol/LHCL将其调到 5.8左右（或用经验法）。 (5)分装与扎口：用注射器将调好pH值的培养基分装到三角瓶内。100~150m1的三角瓶，每瓶装20~30m1 左右的培养基。分装后立即扎紧瓶口，贴上标签，注明培养基的钉嘴名称、配制时期等。 2、培养基的灭菌 培养基分装完成后，应在24h内灭菌。灭菌过程如下： (1)加水： (2)装锅： (3)盖盖： (4)加热： (5)排放冷空气： (6).升压保温： (7)降压排气： (8)出锅冷却。 (四)作业 (一)说明MS培养基的配制步骤，比较母液与工作液配制的难易程度： (二)简述培养基灭菌的主要环节。 实验四外植体的选取与消毒处理 一、目的要求： 掌握器官培养的方法与技术，基本掌握外植体的采集、预处理与接种技术。 二、实验内容 (一)原理 采集生长健壮、无病虫的幼嫩的植物根、茎、叶外植体，经过灭菌消毒后，接种到诱导或分化培养基上，可 诱导愈伤组织、芽丛、茎段或体细胞胚状体。经过继代培养、生根培养，可获得完整的再生植株。 (二)仪器用品 1、仪器工具：超净工作台：酒精灯：75%酒精棉球：无菌培养皿：记号笔：火柴：接种工具等： 2、材料：植物的幼嫩的根尖、茎尖、茎段、叶： 3、试剂：75%酒精：0.1%升汞：无菌水 培养基：MS基本培养基，附加NAA、6-BA等植物激素： (三)方法与步骤 1、材料处理外植物体用流水冲洗干净，移到超净工作台，用75%的酒精浸泡30s,再用0.1%的升汞浸泡5~ 8min,用无菌水冲洗3~5遍，放在垫有无菌滤纸的培养皿中，待接种。 2、接种将处理后的外植体剪切，接种到适当的培养基上 3、培养将培养基放于23~25℃，光照为1000~20001x,光照时间为10左右的培养室内培养。 (四)营养器官培养实例 1、大岩桐叶的培养 2、草莓茎尖的组织培养 3、彩叶草茎段的组织培养 四、作业： (1)观察并记录实验现象。 (2)计算不定芽的诱导率
（2）定容：加蒸馏水至刻度，摇匀； （3）熔化（熬制）：将容量瓶内的培养基倒入铝锅中，另将预先称好的6～10g琼脂和30g蔗糖也加入锅中， 加热煮化。先用旺火烧开，再用文火煮溶。注意经常搅拌，防止糊底。 （4）调pH：待培养基冷却后，用酸度计或pH试纸测试pH值，可用0.1mol∕LnaOH或0.1mol∕L HCL将其调到 5.8左右（或用经验法）。 （5）分装与扎口：用注射器将调好pH值的培养基分装到三角瓶内。100～150ml的三角瓶，每瓶装20～30ml 左右的培养基。分装后立即扎紧瓶口，贴上标签，注明培养基的钉嘴名称、配制时期等。 2、培养基的灭菌 培养基分装完成后，应在24h内灭菌。灭菌过程如下： （1）加水； （2）装锅； （3）盖盖； （4）加热； （5）排放冷空气； （6）．升压保温； （7）降压排气； （8）出锅冷却。 （四）作业 （一）说明MS培养基的配制步骤，比较母液与工作液配制的难易程度； （二）简述培养基灭菌的主要环节。 实验四 外植体的选取与消毒处理 一、目的要求： 掌握器官培养的方法与技术,基本掌握外植体的采集、预处理与接种技术。 二、实验内容 （一）原理 采集生长健壮、无病虫的幼嫩的植物根、茎、叶外植体，经过灭菌消毒后，接种到诱导或分化培养基上，可 诱导愈伤组织、芽丛、茎段或体细胞胚状体。经过继代培养、生根培养，可获得完整的再生植株。 （二）仪器用品 1、仪器工具：超净工作台；酒精灯；75%酒精棉球；无菌培养皿；记号笔；火柴；接种工具等； 2、材料：植物的幼嫩的根尖、茎尖、茎段、叶； 3、试剂：75%酒精；0.1%升汞；无菌水 培养基：MS基本培养基，附加NAA、6-BA等植物激素； （三）方法与步骤 1、材料处理 外植物体用流水冲洗干净，移到超净工作台，用75%的酒精浸泡30s，再用0.1%的升汞浸泡5～ 8min，用无菌水冲洗3～5遍，放在垫有无菌滤纸的培养皿中，待接种。 2、接种 将处理后的外植体剪切，接种到适当的培养基上 3、培养 将培养基放于23～25℃，光照为1000～2000lx，光照时间为10左右的培养室内培养。 （四）营养器官培养实例 1、大岩桐叶的培养 2、草莓茎尖的组织培养 3、彩叶草茎段的组织培养 四、作业： （1）观察并记录实验现象。 （2）计算不定芽的诱导率