免疫荧光组化技术
免疫荧光组化技术
主要内容 荧光的特征 荧光素 荧光素标记抗体的方法 四、荧光抗体的质量鉴定 五、免疫荧光组化染色方法 六、荧光显微镜 七、非特异性荧光的消除方法
主要内容 一、荧光的特征 二、荧光素 三、荧光素标记抗体的方法 四、荧光抗体的质量鉴定 五、免疫荧光组化染色方法 六、荧光显微镜 七、非特异性荧光的消除方法
思考题: 1.什么叫荧光? 常用荧光素有哪些特征? 3.标记荧光抗体有哪二种主要的制备 方法?
思考题： 1.什么叫荧光？ 2.常用荧光素有哪些特征？ 3.标记荧光抗体有哪二种主要的制备 方法？
4免疫荧光组化直接法、间接法的 原理和主要操作流程? 5观察荧光组化片时应注意哪些问题? 6.非特异性荧光的消除方法有哪几种?
4.免疫荧光组化直接法、间接法的 原理和主要操作流程？ 5.观察荧光组化片时应注意哪些问题？ 6.非特异性荧光的消除方法有哪几种？
、荧光的特征 分子都含有电子,电子在不停地运 动着。根据量子理论,运动着的电子可以 处于一系列不连续的能量状态中,电子遵 守一定的规则,要以从一个能级向另一能 级跃迁,并伴随着与能级差相对应的特定 能量的吸收或释放
一 、荧光的特征 分子都含有电子，电子在不停地运 动着。根据量子理论，运动着的电子可以 处于一系列不连续的能量状态中，电子遵 守一定的规则，要以从一个能级向另一能 级跃迁，并伴随着与能级差相对应的特定 能量的吸收或释放
数发态电子 释放能量 可见光(荧光) (400-800m) 紧外光 250-40m) 发光 电子 紫外光激发荧光物质放射荧光示意图
激发当电子吸收能量跃迁到较高能级, 这个过程叫激发。 发射以辐身方式跃迁时,能量转化成相 应波长的光,这个过程叫发射
激发 当电子吸收能量跃迁到较高能级， 这个过程叫激发。 发射 以辐身方式跃迁时，能量转化成相 应波长的光，这个过程叫发射
荧光跃迁到激发态的电子,大多处于单 重激发态。如果电子直接从单重激发态以 辐身方式跃迁到基态,由于单重激发态很 不稳定,半衰期很短,发射持续的时间也 很短,这种发射光,叫荧光
荧光 跃迁到激发态的电子，大多处于单 重激发态。如果电子直接从单重激发态以 辐身方式跃迁到基态，由于单重激发态很 不稳定，半衰期很短，发射持续的时间也 很短，这种发射光，叫荧光
二、荧光素 能够产生荧光并能作为染料的化合物 称为荧光色素,必须具备:吸收激发光的 光能并发射荧光
二、荧光素 能够产生荧光并能作为染料的化合物 称为荧光色素，必须具备：吸收激发光的 光能并发射荧光
1、具备用于标记抗体的荧光素条件 (1)应具有与蛋白质分子形成共价键的化 学基团,结合后不易离解,而未结合的色 素及其降解产物易排除
1、具备用于标记抗体的荧光素条件 (1)应具有与蛋白质分子形成共价键的化 学基团，结合后不易离解，而未结合的色 素及其降解产物易排除