GAL4AD 1gRNA期 gRNA 基组原列 tracrRNA-crRNA Prey Bait 基因组 DNA GAL4 DNA-BD RNA Pol Il GAL Cas9 PAM(S-NGG-1) Promoter 5 ## 基因组 DNA mRNA 位点特异的 双DNA断 基因结构与表达分析的基本方法 The popular technologies and methods for analysis of gene structure and expression 周珏宇 基础医学院生物化学与分子生物学教研室 Southern Medical University Email:zhoujueyu@126.com
Southern Medical University Email: zhoujueyu@126.com
后基因组时代 nature nature nature scence nature Science nature Science human genome
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疾病的发生机理 临床表现 神经机制 器官、组织 体液机制 细胞 细胞机制 基因 分子机制 调控（机制） 3
神经机制 体液机制 细胞机制 分子机制 3 生物化学与分子生物学教研室
疾病相关分子机制的研究 FQ爆通进G调拉B得阕经嗣©始的)数能转移 1.临床相关性研究：A一C 临床水平：组织中的表达情况及其与各临床病理参数（恶 性程度转移与否，耐药性，生存率等)的相关性 2.功能研究：A一D 细胞水平：生长、调亡、转移、侵袭、血管新生、耐药等 动物水平：成瘤、转移、药物敏感等 3.机制研究：A一B 分子水平：相互结合、表达调控、翻译后修饰、降解调控 、剪切调控、胞内定位、澈酶信号传导等
4 FOXK1通过CTCF和KLF2调控胃癌细胞侵袭和转移 1. 临床相关性研究: A—C 临床水平：组织中的表达情况及其与各临床病理参数（恶 性程度转移与否，耐药性，生存率等）的相关性 2. 功能研究: A—D 细胞水平：生长、凋亡、转移、侵袭、血管新生、耐药等 动物水平：成瘤、转移、药物敏感等 3. 机制研究: A—B 分子水平：相互结合、表达调控、翻译后修饰、降解调控 、剪切调控、胞内定位、激酶信号传导等 A基因通过调控B信号通路影响C疾病的D功能 生物化学与分子生物学教研室
疾病相关分子机制的研究 A基因通过调控B信号通路影响C疾病的D功能 一、发现创新的功能基因A 二、明确临床相关性（A一C) 三、证实功能(A一D) 四、探索机制(A一B) 叙述一个完整的故事，最关健是A的选择 5
5 一、发现创新的功能基因 A 二、明确临床相关性（A—C） 三、证实功能（A—D） 四、探索机制（A—B） A基因通过调控B信号通路影响C疾病的D功能 叙述一个完整的故事，最关键是A的选择 生物化学与分子生物学教研室
案例 F4.49 JCell Mol Med.2017Apr:21(4):665-676.doi:10.1111jcmm.13010.Epub2016Nov15. NCAPG2 promotes tumour proliferation by regulating G2/M phase and associates with poor prognosis in lung adenocarcinoma. 基因A:NCAPG2 机制B：细胞周期指标 疾病C:肺癌 表型D:细胞增殖 6
6 案例 基因A：NCAPG2 机制B：细胞周期指标 疾病C：肺癌 表型D：细胞增殖 IF 4.49 生物化学与分子生物学教研室
PCR WB 文章框架 1.找差异 NCAPG2在原发性肺拖样本中显苦高表这 2.相关性 NCAPG2表达水平与淋巴结转移TNM分析相关 临床样本 3.预后指标 NCAPG2表达水平是肺痛患者预后的独立预测因素 NCAPG2流铁 1.干预策略 肺癌细胞株A549H1299 克将形成 FACS 2.功能检测 细胞增殖检测 细胞周期检测 功能 3.机制研究 细胞周期相关蛋白检测 HC 把基因PLK1表达相关 7
7 文章框架 1. 找差异 2. 相关性 3. 预后指标 1. 干预策略 2. 功能检测 3. 机制研究 ①临床样本②细胞功能 生物化学与分子生物学教研室
NCAPG2 Ex 文章内容 -51 Lung AD Lung SCC uns Stage ll Fig.1 NCAPG:2在NSCLC中高表达且 标志患者不良预后 8
8 Fig. 1 NCAPG2 在NSCLC中高表达且 标志患者不良预后 文章内容 生物化学与分子生物学教研室
Fig.2 NCAPG2在原发性肺癌组织中高表达 9
9 生物化学与分子生物学教研室 Fig. 2 NCAPG2 在原发性肺癌组织中高表达
Table2 NCAPG2表达与病理参数的相关性 Table 2 Correlation of NCAPG2 protein expression with various clinicopathological features in 90 patients with lung adenocarcinoma NCAPG2 protein expression Number Hiah of patients P-value s62) .21 All patients 90 48 42 Gender Male 49 25 0.308 Female 23 18 Age (years) <65 51 27 24 0.295 2≥65 21 18 Size of tumour ≤3cm32 16 16 0.201 →3cm 名 26 Lymph node metastasis (pN) NO 39 28 11 0.038 W1-3 51 30 31 p-TNM stages 30 20 0.024 60 28 32 P<0.05.'Chi-square test. 10
10 Table 2 NCAPG2表达与病理参数的相关性 生物化学与分子生物学教研室