植物病理学实验一、植物病害症状一、目的和要求通过植物病害症状的观察，学习描述和记载植物病害症状的方法，掌握植物病害的症状类型、特点以及了解症状在病害诊断中的作用。二、材料和用具1.准备下列病害的标本、照片或挂图等：烟草花叶病黄瓜花叶病马铃薯晚疫病桃细菌性穿孔病蔬菜幼苗猝倒病菜软腐病甘薯线虫病棉花枯、黄萎病水稻恶苗病桃缩叶病马铃薯疮痴病玉米瘤黑粉病小麦白粉病小麦秆锈病葡萄霜霉病茄子褐纹病油菜菌核病麦类麦角病水稻稻曲病水稻稻瘟病番茄根结线虫病苋菜白锈病豇豆锈病油菜菌核大豆丝子口黄瓜根结线虫病水稻白叶枯病番茄条纹病毒病2、扩大镜、小刀及记载用具3、水稻白叶枯病叶、脱脂棉、小烧杯、封口膜。三、内容与方法（一）仔细观察并记录陈列的植物病害标本的病状和病征。1、病状类型：(1)变色植物受到外来有害因素的影响后，常导致色泽的改变，如褪色、花叶、条点、白化、色泽变深或变浅等，统称为变色。主要表现有：褪绿或黄化褪绿或黄化是由于植物叶绿素的减少而叶片表现为浅绿色或黄色。②花叶与斑驳花叶是叶片颜色不均匀地变色，且不同变色部分的轮廓是很清楚的，如烟草花叶病。如果不同变色部分的轮廓不清楚则称为斑驳。(2)坏死坏死是由于病植物组织和细胞的死亡而引起的。主要表现有：①斑点：根、茎、叶、花、果实的病部局部组织或细胞坏死，产生各种形状、大小和颜色不同的斑点。②枯死：芽、叶、枝、花的局部或大部分组织发生变色、焦枯、死亡
植物病理学 实验一、植物病害症状 一、目的和要求 通过植物病害症状的观察，学习描述和记载植物病害症状的方法，掌握植物病害的症状类型、特 点以及了解症状在病害诊断中的作用。 二、材料和用具 1．准备下列病害的标本、照片或挂图等： 烟草花叶病 黄瓜花叶病 马铃薯晚疫病 桃细菌性穿孔病 蔬菜幼苗猝倒病 菜软腐病 甘薯线虫病 棉花枯、黄萎病 水稻恶苗病 桃缩叶病 马铃薯疮痂病 玉米瘤黑粉病 小麦白粉病 小麦秆锈病 葡萄霜霉病 茄子褐纹病 油菜菌核病 麦类麦角病 水稻稻曲病 水稻稻瘟病 番茄根结线虫病 苋菜白锈病 豇豆锈病 油菜菌核 大豆菟丝子 黄瓜根结线虫病 水稻白叶枯病 番茄条纹病毒病 2、扩大镜、小刀及记载用具； 3、水稻白叶枯病叶、脱脂棉、小烧杯、封口膜。 三、内容与方法 （一）仔细观察并记录陈列的植物病害标本的病状和病征。 1、病状类型： （1）变色 植物受到外来有害因素的影响后，常导致色泽的改变，如褪色、花叶、条点、白化、色泽变深或 变浅等，统称为变色。主要表现有： ①褪绿或黄化褪绿或黄化是由于植物叶绿素的减少而叶片表现为浅绿色或黄色。 ②花叶与斑驳花叶是叶片颜色不均匀地变色，且不同变色部分的轮廓是很清楚的，如烟草花叶 病。如果不同变色部分的轮廓不清楚则称为斑驳。 （2）坏死 坏死是由于病植物组织和细胞的死亡而引起的。主要表现有： ①斑点：根、茎、叶、花、果实的病部局部组织或细胞坏死，产生各种形状、大小和颜色不同的 斑点。 ②枯死：芽、叶、枝、花的局部或大部分组织发生变色、焦枯、死亡
③穿孔和落叶落果：在叶片病斑外围的组织形成离层，使病斑从健组织中脱落下来，形成穿孔；有些植物的花、叶、果等受病后，在叶柄或果梗附近产生离层而引起过早的落叶、落果等。③疮痴：果实、嫩茎、块茎等的病组织局部木栓化，表面粗糙，病部较浅，。③溃疡：多见于木本植物的枝干、叶片或果实上。病部面积大，中央凹陷，坏死深入到皮层，周围的寄主细胞有时增生和木栓化。③猝倒和立枯：大多发生在各种植物的苗期，幼苗的茎基或根冠组织坏死，地上部萎以致死亡，坏死引起突然倒伏的称为猝倒；坏死而不倒伏的称为立枯。(3）菱指植物根部或茎部的维管束组织受到侵染而发生的枯菱现象，萎焉可以是局部的也可以是全株性的。(4）腐烂腐烂是较大面积植物组织的分解和破坏的表现，根据症状及失水快慢又分为干腐和湿腐。流胶也是腐烂的一种，桃树等木本植物受病菌为害后，内部组织坏死并腐烂分解，从病部向外流出粘胶状物质。(5）畸形由于病组织或细胞的生长受阻或过度增生而造成的形态异常。植物病害的畸形症状很多，常见的有:①徒长：植株生长较正常的植株生长高大。②矮化、矮缩和丛生：矮化是植株各个器官的长度成比例变短或缩小，病株比健株矮小得多。矮缩则主要是节间缩短茎叶生在一起。丛生是枝条或根异常地增多，导致丛枝或丛根。③瘤肿：病部的细胞或组织因受病原物的刺激而增生或增大，呈现出瘤肿。④卷叶：叶片卷曲与皱缩，有时病叶变厚、变硬，严重时呈卷筒状。③蕨叶：叶片发育不良，叶片变成丝状、线状或蕨叶状。双子叶植物受2，4-D的药害也常变成蕨叶状。③花变叶：正常的花器变成叶片状结构，使植物不能正常开花结实。2、病征类型：粉状物：病原真菌在植物受害部位形成黑色、白色、铁锈色的粉状物霉状物：病原真菌在植物受害部位形成白色、褐色、黑色的霉层。小黑点：病原真菌在植物受害部位形成的黑色小颗粒。菌核：病原真菌在植物受害部位形成大小不同的褐色或黑色颗粒。锈状物：病原真菌在植物受害部位形成的白色瓷状或褐色铁锈状物。菌脓：病原细菌在植物受害部位形成的粘液和胶状物，干燥后成膜状
③穿孔和落叶落果：在叶片病斑外围的组织形成离层，使病斑从健组织中脱落下来，形成穿孔； 有些植物的花、叶、果等受病后，在叶柄或果梗附近产生离层而引起过早的落叶、落果等。 ④疮痂：果实、嫩茎、块茎等的病组织局部木栓化，表面粗糙，病部较浅，。 ⑤溃疡：多见于木本植物的枝干、叶片或果实上。病部面积大，中央凹陷，坏死深入到皮层，周 围的寄主细胞有时增生和木栓化。 ⑥猝倒和立枯：大多发生在各种植物的苗期，幼苗的茎基或根冠组织坏死，地上部萎蔫以致死 亡，坏死引起突然倒伏的称为猝倒；坏死而不倒伏的称为立枯。 （3）萎蔫 指植物根部或茎部的维管束组织受到侵染而发生的枯萎现象，萎蔫可以是局部的也可以是全株性 的。 （4）腐烂 腐烂是较大面积植物组织的分解和破坏的表现，根据症状及失水快慢又分为干腐和湿腐。 流胶也是腐烂的一种，桃树等木本植物受病菌为害后，内部组织坏死并腐烂分解，从病部向外流 出粘胶状物质。 （5）畸形 由于病组织或细胞的生长受阻或过度增生而造成的形态异常。植物病害的畸形症状很多，常见的 有： ①徒长：植株生长较正常的植株生长高大。 ②矮化、矮缩和丛生：矮化是植株各个器官的长度成比例变短或缩小，病株比健株矮小得多。矮 缩则主要是节间缩短茎叶簇生在一起。丛生是枝条或根异常地增多，导致丛枝或丛根。 ③瘤肿：病部的细胞或组织因受病原物的刺激而增生或增大，呈现出瘤肿。 ④卷叶：叶片卷曲与皱缩，有时病叶变厚、变硬，严重时呈卷筒状。 ⑤蕨叶：叶片发育不良，叶片变成丝状、线状或蕨叶状。双子叶植物受2，4－D的药害也常变成 蕨叶状。 ⑥花变叶：正常的花器变成叶片状结构，使植物不能正常开花结实。 2、病征类型: 粉状物：病原真菌在植物受害部位形成黑色、白色、铁锈色的粉状物。 霉状物：病原真菌在植物受害部位形成白色、褐色、黑色的霉层。 小黑点：病原真菌在植物受害部位形成的黑色小颗粒。 菌核：病原真菌在植物受害部位形成大小不同的褐色或黑色颗粒。 锈状物：病原真菌在植物受害部位形成的白色瓷状或褐色铁锈状物。 菌脓：病原细菌在植物受害部位形成的粘液和胶状物，干燥后成膜状
（二）细菌菌的诱导①将水稻白叶枯病叶片用酒精棉球表面擦拭消毒后剪成1-2cm的小段。②在玻璃小烧杯中放入两个用水浸湿的棉球③将小段的病叶片垂直插入烧杯里的棉球中间，使其直立，且相互之间不要靠在一起。④用封口膜将烧杯口封好，并注意使叶片顶端不要靠近封口膜③将烧杯置于28C培养箱中保湿培养过夜后观察叶片上菌脓出现的情况（注意观察菌脓的颜色、浑浊度以及有无真菌的菌丝体出现）。四、实验作业与思考题1．通过对实验课上陈列标本的观察，选择不同症状类型的病害，扼要描述其症状特点，填入表1.表1室内陈列植物病害症状记录病状受害植物病害名称发病部位病征2.观察校园植物上病害发生情况，按下表要求记录5-10种植物病害症状特征。表2校园内植物病害症状调查记录病状受害部位症状描述病征编号寄主名3.观察和记录菌脓诱导实验结果4.症状和病征在植物病害诊断上有什么作用？5.根据水稻白叶枯病菌脓诱导结果，试分析在通过保湿诱导病征来进行病害诊断时应注意什么问题?实验二、真菌一般形态观察和临时玻片制备一、目的和要求熟悉不同临时玻片制作方法；通过观察，认识病原真菌的营养体及其变态，认识真菌的子实体、有性繁殖、无性繁殖产生的各种类型抱子。二、实验用具挑针、刀片、木板、酒精灯、火柴、载玻片、盖玻片、纱布、（棉蓝）乳酚油、二甲苯、显微镜、擦镜纸、吸水纸等。三、内容与方法1.临时玻片的制作临时玻片制作方法很多，如涂、撕、粘、挑和切片等，可以根据病原物的类型选择使用（1）涂抹法：细菌和酵母菌的培养物常用涂抹法制片。将细菌或酵母菌的悬浮液均匀地涂在洁净的载玻片上，在酒精灯火焰上烘干、固定，再加盖玻片封固。加盖玻片前还可进行染色处理
（二）细菌菌脓的诱导 ①将水稻白叶枯病叶片用酒精棉球表面檫拭消毒后剪成1-2cm的小段。 ②在玻璃小烧杯中放入两个用水浸湿的棉球。 ③将小段的病叶片垂直插入烧杯里的棉球中间，使其直立，且相互之间不要靠在一起。 ④用封口膜将烧杯口封好，并注意使叶片顶端不要靠近封口膜。 ⑤将烧杯置于28C培养箱中保湿培养过夜后观察叶片上菌脓出现的情况（注意观察菌脓的颜色、 浑浊度以及有无真菌的菌丝体出现）。 四、实验作业与思考题 1．通过对实验课上陈列标本的观察，选择不同症状类型的病害，扼要描述其症状特点，填入表 1。 表1室内陈列植物病害症状记录 受害植物 病害名称 发病部位 病征 病状 2．观察校园植物上病害发生情况，按下表要求记录5- 10种植物病害症状特征。 表2校园内植物病害症状调查记录 编号 寄主名 受害部位 症状描述 病征 病状 3．观察和记录菌脓诱导实验结果。 4.症状和病征在植物病害诊断上有什么作用？ 5.根据水稻白叶枯病菌脓诱导结果，试分析在通过保湿诱导病征来进行病害诊断时应注意什么问 题？ 实验二、真菌一般形态观察和临时玻片制备 一、目的和要求 熟悉不同临时玻片制作方法；通过观察，认识病原真菌的营养体及其变态，认识真菌的子实体、 有性繁殖、无性繁殖产生的各种类型孢子。 二、实验用具 挑针、刀片、木板、酒精灯、火柴、载玻片、盖玻片、纱布、（棉蓝）乳酚油、二甲苯、显微 镜、擦镜纸、吸水纸等。 三、内容与方法 1．临时玻片的制作 临时玻片制作方法很多，如涂、撕、粘、挑和切片等，可以根据病原物的类型选择使用。 （1）涂抹法：细菌和酵母菌的培养物常用涂抹法制片。将细菌或酵母菌的悬浮液均匀地涂在洁 净的载玻片上，在酒精灯火焰上烘干、固定，再加盖玻片封固。加盖玻片前还可进行染色处理
使菌体或鞭毛着色而易于观察（2）撕取法：用小金属镊子仔细撕下病部表皮或表皮毛制成临时玻片。（3）粘贴法：将塑料胶带纸剪成边长5mm左右的小块（注意胶带上不要印有指印），使胶面朝下贴在病部，轻按一下后揭下制成玻片。（4）挑取法：用挑针从病组织或基物（如培养基）上挑取表面的霉状物、粉状物或孢子团制成玻片。（5）组织透明法：将少量病组织材料切成细丝后放在载玻片上，滴加乳酚油后在酒精灯上徐徐加热至蒸气出现。如此处理数次使组织透明，冷却后加盖玻片进行镜检。此法可以观察到病原物在寄主内的原有状态。（6）徒手切片：徒手切片时选取病状典型、病征明显的病组织材料，先在病征明显处切取病组织小块（边长5-8mm），放在小木块上，用食指轻轻压住，随着手指慢慢地后退，用刀片的刀尖将压住的病组织小块切成很薄的丝或片，用沾有浮载剂的挑针或接种针挑取薄而合适的材料放在一干净载玻片上的浮载剂液滴中央，盖上盖玻片，仔细擦去多余的浮载剂（注意浮载剂过多会使观察物出现晃动不稳定现象），即制成一张临时玻片。浮载剂水：溢菌、线虫活动、真菌孢子萌发、大小测量优点：方便缺点：产生气泡；易干燥乳酚油：除上述外均可用。优点：杀菌固定、孢子膨胀复原、组织透明缺点：不易封固、有毒取小麦白粉病叶片，分别用上述6种方法制片，观察白粉病菌的分生孢子梗、分生孢子、菌丝和吸器。并比较每种方法分别适于观察白粉菌的什么形态特征。2.病原真菌的营养体用挑针挑取平板上培养好的瓜果腐霉病菌（Pythiumaphanidermatum）、立枯丝核菌（Rhizoctoniasolani）和链格孢菌（A/ternariasp.）的菌丝体，用蒸留水作浮载剂，制临时玻片镜检，观察菌丝有无隔膜？菌丝体直径变化是否明显？颜色有无差别？2.1真菌营养体的变态（1）吸器：吸器的形态有圆球状、棒状、裂片状、掌状、根状等。观察用撕取法制片的小麦白粉病菌（Blumeriagraminis）吸器形态，注意吸器的形状和在细胞内的位置。为便于清楚观察，也可以用棉蓝乳酚油作为浮载剂
使菌体或鞭毛着色而易于观察。 （2）撕取法：用小金属镊子仔细撕下病部表皮或表皮毛制成临时玻片。 （3）粘贴法：将塑料胶带纸剪成边长5mm左右的小块（注意胶带上不要印有指印），使胶面朝 下贴在病部，轻按一下后揭下制成玻片。 （4）挑取法：用挑针从病组织或基物（如培养基）上挑取表面的霉状物、粉状物或孢子团制成 玻片。 （5）组织透明法：将少量病组织材料切成细丝后放在载玻片上，滴加乳酚油后在酒精灯上徐徐 加热至蒸气出现。如此处理数次使组织透明，冷却后加盖玻片进行镜检。此法可以观察到病原物 在寄主内的原有状态。 （6）徒手切片：徒手切片时选取病状典型、病征明显的病组织材料，先在病征明显处切取病组 织小块（边长5－8mm），放在小木块上，用食指轻轻压住，随着手指慢慢地后退，用刀片的刀 尖将压住的病组织小块切成很薄的丝或片，用沾有浮载剂的挑针或接种针挑取薄而合适的材料放 在一干净载玻片上的浮载剂液滴中央，盖上盖玻片，仔细擦去多余的浮载剂（注意浮载剂过多会 使观察物出现晃动不稳定现象），即制成一张临时玻片。 浮载剂： 水：溢菌、线虫活动、真菌孢子萌发、大小测量 优点：方便 缺点：产生气泡；易干燥 乳酚油：除上述外均可用。 优点：杀菌固定、孢子膨胀复原、组织透明 缺点：不易封固、有毒 取小麦白粉病叶片，分别用上述6种方法制片，观察白粉病菌的分生孢子梗、分生孢子、菌丝和 吸器。并比较每种方法分别适于观察白粉菌的什么形态特征。 2．病原真菌的营养体 用挑针挑取平板上培养好的瓜果腐霉病菌（Pythium aphanidermatum）、立枯丝核菌 （Rhizoctonia solani）和链格孢菌（Alternariasp.）的菌丝体，用蒸馏水作浮载剂，制临时玻 片镜检，观察菌丝有无隔膜？菌丝体直径变化是否明显？颜色有无差别？ 2．1真菌营养体的变态 （1）吸器：吸器的形态有圆球状、棒状、裂片状、掌状、根状等。观察用撕取法制片的小麦白 粉病菌（Blumeria graminis）吸器形态，注意吸器的形状和在细胞内的位置。为便于清楚观 察，也可以用棉蓝乳酚油作为浮载剂
(2）假根：是由菌丝分化的根状分枝。挑取甘薯软腐病菌（Rhizopusstolonifer）平板培养物制片镜检，观察在抱囊梗基部的假根的形态和颜色。（3）菌核：是菌丝体的菌丝纠结而成的坚固的颗粒状休眠体。观察油菜菌核病菌（Sclerotiumsclerotiorum）的菌核和小麦麦角病菌(Clavicepspurpurea)的菌核标本。比较两种菌核的大小、形状和色泽有何不同？（4）根状菌索：许多菌丝体平行生长并纠结成绳索状，称为根状菌索。在示范镜下观察苹果或甘薯紫纹羽病菌(Helicobasidiumpurpureum)的根状菌索。（5）子座：由菌丝体或由菌丝体和寄主组织共同组成的着生子实体的垫状物。在子座上形成无性或有性孢子。在显微镜下观察麦角病菌（Clavicepspurpurea）头状子座的切片，注意其内部结构与菌核有何区别，或镜检大叶黄杨叶斑病菌或紫荆叶斑病菌（Cercosporasp.）的垫状子座。3.病原真菌的繁殖体——子实体3.1无性孢子（1）游动孢子囊和游动抱子：鞭毛菌亚门真菌的无性繁殖器官是抱子囊。大多数鞭毛菌抱子囊可释放出具鞭毛、在水中能游动的游动孢子，故其孢子囊又称为游动孢子囊。镜检腐霉菌(Pythiumsp.）和疫霉菌（Phytophthorasp.)的游动孢子囊形态，注意孢囊梗与菌丝有无区别。（2）抱子囊和孢囊孢子：接合菌亚门真菌的无性繁殖器官是孢囊孢子。镜检根霉菌（Rhizopusspp.）、毛霉菌（Mucorspp.）、犁头霉菌（Absidiaspp.）的孢子囊、孢囊孢子。（3）分生孢子：半知菌亚门真菌和子囊菌的无性世代繁殖时都可产生分生孢子。分生孢子多着生在分生孢子梗上。分生孢子梗有色或无色、散生或聚生，或着生在分生孢子座、分生孢子盘或分生孢子器内。采用挑、刮或切片的方法制作临时玻片，观察下列病原菌分生孢子的颜色、分隔；分生孢子梗的形态、颜色，是否分枝及分枝的类型、着生位置等。玉米小斑病菌（Bipolarismaydis）花生黑斑病菌（Cercosporaarachidicola）小麦白粉病菌（无性世代）（Oidiummonilioides）柑桔青霉病菌（Penicilliumitalicum）棉花黄菱病菌（Verticilliumdahliae）稻瘟病菌（Pyriculariaoryzae）马铃薯早疫病菌（A/ternariasolan)）（4）厚壁孢子：又称厚垣孢子。由菌丝中个别细胞膨大、细胞壁加厚而形成的一种厚壁孢子。对不良环境的抵抗能力较强
（2）假根：是由菌丝分化的根状分枝。挑取甘薯软腐病菌（Rhizopus stolonifer）平板培养物 制片镜检，观察在孢囊梗基部的假根的形态和颜色。 （3）菌核：是菌丝体的菌丝纠结而成的坚固的颗粒状休眠体。观察油菜菌核病菌（Sclerotium sclerotiorum）的菌核和小麦麦角病菌(Claviceps purpurea)的菌核标本。比较两种菌核的大 小、形状和色泽有何不同？ （4）根状菌索：许多菌丝体平行生长并纠结成绳索状，称为根状菌索。在示范镜下观察苹果或 甘薯紫纹羽病菌(Helicobasidium purpureum)的根状菌索。 （5）子座：由菌丝体或由菌丝体和寄主组织共同组成的着生子实体的垫状物。在子座上形成无 性或有性孢子。在显微镜下观察麦角病菌（Claviceps purpurea）头状子座的切片，注意其内部 结构与菌核有何区别，或镜检大叶黄杨叶斑病菌或紫荆叶斑病菌（Cercosporasp.）的垫状子 座。 3．病原真菌的繁殖体——子实体 3．1无性孢子 （1）游动孢子囊和游动孢子：鞭毛菌亚门真菌的无性繁殖器官是孢子囊。大多数鞭毛菌孢子囊 可释放出具鞭毛、在水中能游动的游动孢子，故其孢子囊又称为游动孢子囊。镜检腐霉菌 (Pythiumsp.)和疫霉菌(Phytophthorasp.)的游动孢子囊形态,注意孢囊梗与菌丝有无区别。 （2）孢子囊和孢囊孢子：接合菌亚门真菌的无性繁殖器官是孢囊孢子。镜检根霉菌 （Rhizopusspp.）、毛霉菌（Mucorspp.）、犁头霉菌（Absidiaspp.）的孢子囊、孢囊孢子。 （3）分生孢子：半知菌亚门真菌和子囊菌的无性世代繁殖时都可产生分生孢子。分生孢子多着 生在分生孢子梗上。分生孢子梗有色或无色、散生或聚生，或着生在分生孢子座、分生孢子盘或 分生孢子器内。 采用挑、刮或切片的方法制作临时玻片，观察下列病原菌分生孢子的颜色、分隔；分生孢子梗的 形态、颜色，是否分枝及分枝的类型、着生位置等。 玉米小斑病菌（Bipolaris maydis） 花生黑斑病菌（Cercospora arachidicola） 小麦白粉病菌（无性世代）（Oidium monilioides） 柑桔青霉病菌（Penicillium italicum） 棉花黄萎病菌（Verticilliumdahliae） 稻瘟病菌（Pyriculariaoryzae） 马铃薯早疫病菌（Alternariasolani） （4）厚壁孢子：又称厚垣孢子。由菌丝中个别细胞膨大、细胞壁加厚而形成的一种厚壁孢子。 对不良环境的抵抗能力较强
挑取棉花枯萎病菌（Fusariumoxysporum）或樟疫霉（Phytophthoracinnarnomi）的培养物制片镜检，观察厚垣孢子的形状、颜色和孢子壁的厚度。3.2有性孢子（1）卵孢子：是鞭毛菌亚门真菌产生的有性孢子，常由形态、大小不同的雌、雄性器官交配形成。卵孢子通常形成于藏卵器内，每个藏卵器内可包含1至多个卵孢子，其数目因真菌种类不同而异。挑取疫霉（Phytophthorasp.）的培养物（连同培养基）制片、镜检观察藏卵器的形态、色泽、壁有无饰纹或光滑；雄器形态及其位置；卵孢子形态、每个藏卵器内卵孢子的数目、卵孢子是否充满藏卵器（2）接合孢子：是接合菌亚门真菌产生的有性孢子，由两个形状和大小相似的雌、雄配子囊结合而成。挑取根霉（Rhizopussp.）、毛霉（Mucorsp.）或犁头霉（Absidiasp.）正、负菌株在PDA培养基上交配7-10天后的培养物制片、镜检，观察接合孢子的形状、表面的饰纹、色泽、配囊柄的形状及有无丝状附属物。（3）子囊孢子：子囊菌亚门真菌的有性孢子，产生在子囊内。子囊孢子有色或无色、单胞或多胞，具多种形状。采用挑、刮或切片的方法制作临时玻片或直接观察永久玻片，镜检下列病原物。观察子囊孢子的形态、颜色；子囊的形态；子囊果的类型桃缩叶病菌（Taphrinadeformans）小麦白粉病菌（Erysiphegraminis）桑里白粉病菌（Phyllactiniacorylea）小麦赤霉病菌（Gibberellazeae）苹果树腐烂病菌（Valsamal)麦角病菌（Clavicepspurpurea)（4）担孢子：担子菌亚门真菌产生的有性孢子。担孢子产生在担子上。观察胶锈菌（Gymnosporangiumsp.）冬孢子萌发形成的担子及担孢子的形态。四、作业与思考题（1）认识病原真菌菌丝、无性孢子、有性孢子有何意义？（2）说明针对不同的病征类型在显微镜观察时应采用何种制片方法？（3）填图，注明图1中各部分的名称
挑取棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporum）或樟疫霉（Phytophthora cinnarnomi）的培养物 制片镜检，观察厚垣孢子的形状、颜色和孢子壁的厚度。 3．2有性孢子 （1）卵孢子：是鞭毛菌亚门真菌产生的有性孢子，常由形态、大小不同的雌、雄性器官交配形 成。卵孢子通常形成于藏卵器内，每个藏卵器内可包含1至多个卵孢子，其数目因真菌种类不同 而异。 挑取疫霉（Phytophthorasp.）的培养物（连同培养基）制片、镜检观察藏卵器的形态、色泽、 壁有无饰纹或光滑；雄器形态及其位置；卵孢子形态、每个藏卵器内卵孢子的数目、卵孢子是否 充满藏卵器。 （2）接合孢子：是接合菌亚门真菌产生的有性孢子，由两个形状和大小相似的雌、雄配子囊结 合而成。 挑取根霉（Rhizopussp.）、毛霉(Mucorsp．）或犁头霉（Absidiasp.）正、负菌株在PDA培养 基上交配7－10天后的培养物制片、镜检，观察接合孢子的形状、表面的饰纹、色泽、配囊柄的 形状及有无丝状附属物。 （3）子囊孢子：子囊菌亚门真菌的有性孢子，产生在子囊内。子囊孢子有色或无色、单胞或多 胞，具多种形状。 采用挑、刮或切片的方法制作临时玻片或直接观察永久玻片，镜检下列病原物。观察子囊孢子的 形态、颜色；子囊的形态；子囊果的类型。 桃缩叶病菌（Taphrina deformans） 小麦白粉病菌（Erysiphe graminis） 桑里白粉病菌（Phyllactiniacorylea） 小麦赤霉病菌（Gibberella zeae） 苹果树腐烂病菌（Valsamali） 麦角病菌（Clavicepspurpurea） （4）担孢子：担子菌亚门真菌产生的有性孢子。担孢子产生在担子上。 观察胶锈菌（Gymnosporangiumsp.）冬孢子萌发形成的担子及担孢子的形态。 四、作业与思考题 （1）认识病原真菌菌丝、无性孢子、有性孢子有何意义？ （2）说明针对不同的病征类型在显微镜观察时应采用何种制片方法？ （3）填图，注明图1中各部分的名称
图1病原真菌子实体形态图（填注各部分名称）1.鞭毛菌2.接合菌3.子囊菌4.担子菌实验三、鞭毛菌灭门真菌及其所致病害、目的和要求通过实验要求了解鞭毛菌亚门真菌的主要形态特征，掌握与植物病害有关重要属的形态特征、分类依据及所致病害的症状特点，同时学习使用检索表来鉴定病菌，为分类鉴定打下初步基础。实验分两次完成。二、材料和用具1实验材料：植物病害标本或永久玻片根肿菌属：芸苔根肿菌（Plasmodiophorabrassicae）及病害粉痴菌属：马铃薯粉痴菌（Spongosporasubterranean）及病害多粘霉属：禾谷多粘霉（Polymyxagraminis）及病害节壶菌属：玉米褐斑病菌（Physodermamaydis）及病害绵霉属：水稻烂秧绵霉菌（Achlyaspp.）及病害腐霉属：瓜果腐霉菌（Pythiumaphanidermatum）及病害疫霉属：致病疫霉(Phytophthorainfestans）及病害指梗霉属：粟白发病菌（Sclerosporagraminicola）及病害单轴霉属；葡萄霜霉病菌（Plasmoparaviticola）及病害假霜霉属：黄瓜霜霉病菌（Pseudoperonosporacubensis）及病害霜霉属：十字花科植物霜霉病菌（Peronosporaparasitica）及病害白锈属：十字花科蔬菜白锈病菌（A/bugocandida）及病害
图1病原真菌子实体形态图（填注各部分名称） 1.鞭毛菌2.接合菌3.子囊菌4.担子菌 实验三、鞭毛菌灭门真菌及其所致病害 一、目的和要求 通过实验要求了解鞭毛菌亚门真菌的主要形态特征，掌握与植物病害有关重要属的形态特征、分 类依据及所致病害的症状特点，同时学习使用检索表来鉴定病菌，为分类鉴定打下初步基础。实 验分两次完成。 二、材料和用具 1实验材料： 植物病害标本或永久玻片 根肿菌属：芸苔根肿菌（Plasmodiophora brassicae）及病害 粉痂菌属：马铃薯粉痂菌（Spongospora subterranean）及病害 多粘霉属：禾谷多粘霉（Polymyxagraminis）及病害 节壶菌属：玉米褐斑病菌（Physodermamaydis）及病害 绵霉属：水稻烂秧绵霉菌（Achlyaspp.）及病害 腐霉属：瓜果腐霉菌（Pythiumaphanidermatum）及病害 疫霉属：致病疫霉(Phytophthorainfestans）及病害 指梗霉属：粟白发病菌（Sclerosporagraminicola）及病害 单轴霉属；葡萄霜霉病菌（Plasmoparaviticola）及病害 假霜霉属：黄瓜霜霉病菌（Pseudoperonosporacubensis）及病害 霜霉属：十字花科植物霜霉病菌（Peronosporaparasitica）及病害 白锈属：十字花科蔬菜白锈病菌（Albugocandida）及病害
2实验用具显微镜、擦镜纸、浮载剂（蒸馏水或乳酚油）、载玻片、盖玻片、挑针、刀片、小木块、吸水纸、酒精灯、火柴。三、内容与方法1根肿菌纲（Plasmodiophoromycetes）（l）根肿菌属（Plasmodiophora）：观察芸莹根肿病害标本的症状，注意受害植株的根部是否肿大。镜检芸莹根肿菌永久玻片，观察休眠孢子的分布位置、形态及有无细胞壁；有病菌侵害和没有病菌侵害植物细胞的大小及内含物。注意区分原生质团和休眠孢子。(2）粉痴菌属（Spongospora）：观察马铃薯粉痴病害（S.subterranean）标本症状。镜检马铃薯粉病菌永久切片，观察休眠孢子的分布和形态特征，以及有病菌的寄主细胞有无明显肿大。（3）多粘菌属（Polymyxa）：观察禾谷多粘菌（Pgraminis）引起的小麦病害症状。用解剖刀或镊子撕取小麦根基皮层，制成临时玻片，镜检。或镜检未谷多粘菌的永久玻片，观察病菌休眠孢子及排列特征，2壶菌纲（Chytridiomycetes）节壶属（Physoderma）：观察由玉蜀黍节壶菌（P.maydis）为害玉米引起的褐斑病标本，注意受害部位病斑颜色及特点如何。用针挑取受害病组织内呈黄褐色粉未状物制成临时玻片，或直接镜检玉蜀黍节壶菌的永久玻片，观察休眠孢子囊的颜色和形态特征。3卵菌纲（Oomycetes）3.1水霉目通常生活于水中或潮湿土壤中，营腐生生活，仅少数与植物病害有关，如寄生稻苗引起烂秧。（1）水霉属（Saprolegnia）：孢子囊圆筒形或棍棒状，新的孢子囊从老的孢子囊内的基部长出。游动孢子具明显的两游现象【水稻烂秧水霉菌（S.monilifera）。观看水霉属真菌游动孢子两游现象录象。（2）绵霉属（Achlya）：观察水稻烂症状。用镊子取病苗放于盛有浅水的培养皿中，直接在低倍镜下检查，或用镊子小心撕下病苗上的棉絮状物制成临时玻片镜检。注意比较游动孢子囊和菌丝的形态有无显著区别？观察抱子囊的层出现象是属于哪种层出类型？游动孢子释放是迅速离开抱子囊还是在排抱孔口处休止、聚集？观察是否产生有性器官？仔细观察藏卵器、雄器和卵孢子的形态、雄器的位置、藏卵器内卵球的数目。根据所观察到的病原菌形态，并参照水霉属和绵霉属的分类依据，推测你所看到的病菌属于哪个属。3.3.2霜霉目许多霜霉目真菌是重要的植物病原菌
2实验用具 显微镜、擦镜纸、浮载剂（蒸馏水或乳酚油）、载玻片、盖玻片、挑针、刀片、小木块、吸水 纸、酒精灯、火柴。 三、内容与方法 1根肿菌纲（Plasmodiophoromycetes） （l）根肿菌属（Plasmodiophora）：观察芸薹根肿病害标本的症状，注意受害植株的根部是否 肿大。镜检芸薹根肿菌永久玻片，观察休眠孢子的分布位置、形态及有无细胞壁；有病菌侵害和 没有病菌侵害植物细胞的大小及内含物。注意区分原生质团和休眠孢子。 （2）粉痂菌属（Spongospora）：观察马铃薯粉痂病害（S. subterranean）标本症状。镜检马 铃薯粉痂病菌永久切片，观察休眠孢子的分布和形态特征，以及有病菌的寄主细胞有无明显肿 大。 （3）多粘菌属（Polymyxa）：观察禾谷多粘菌（P.graminis）引起的小麦病害症状。用解剖刀 或镊子撕取小麦根基皮层，制成临时玻片，镜检。或镜检禾谷多粘菌的永久玻片，观察病菌休眠 孢子及排列特征。 2壶菌纲（Chytridiomycetes） 节壶属（Physoderma）：观察由玉蜀黍节壶菌（P．maydis）为害玉米引起的褐斑病标本，注 意受害部位病斑颜色及特点如何。用针挑取受害病组织内呈黄褐色粉末状物制成临时玻片，或直 接镜检玉蜀黍节壶菌的永久玻片，观察休眠孢子囊的颜色和形态特征。 3卵菌纲（Oomycetes） 3．1水霉目通常生活于水中或潮湿土壤中，营腐生生活，仅少数与植物病害有关，如寄生稻苗引 起烂秧。 （1）水霉属（Saprolegnia）：孢子囊圆筒形或棍棒状，新的孢子囊从老的孢子囊内的基部长 出。游动孢子具明显的两游现象〔水稻烂秧水霉菌（S.monilifera）〕。观看水霉属真菌游动孢 子两游现象录象。 （2）绵霉属（Achlya）：观察水稻烂秧症状。用镊子取病苗放于盛有浅水的培养皿中，直接在 低倍镜下检查，或用镊子小心撕下病苗上的棉絮状物制成临时玻片镜检。注意比较游动孢子囊和 菌丝的形态有无显著区别？观察孢子囊的层出现象是属于哪种层出类型？游动孢子释放是迅速离 开孢子囊还是在排孢孔口处休止、聚集？观察是否产生有性器官？仔细观察藏卵器、雄器和卵孢 子的形态、雄器的位置、藏卵器内卵球的数目。 根据所观察到的病原菌形态，并参照水霉属和绵霉属的分类依据，推测你所看到的病菌属于哪个 属。 3．3．2霜霉目许多霜霉目真菌是重要的植物病原菌
（1）腐霉属（Pythium）：瓜果腐霉（P.aphanidermatum）可以引起多种经济作物幼苗的猝倒病和果实的绵腐病。观察黄瓜病果上的白色菌丝体。将生长旺盛的小块菌丝体移至清水中20℃培养24-48小时，菌丝顶端即形成大量游动孢子囊，用针挑取在清水中培养过的菌丝，观察腐霉菌的游动孢子囊。注意区分菌丝、孢囊梗和孢子囊。观察泡囊及游动孢子的形态特征。注意观察藏卵器和雄器的特征，并与水稻绵霉菌的雄器和藏卵器相比较。观看瓜果腐霉真菌游动孢子两游现象录象。（2）疫霉属（Phytophthora）：致病疫霉（Pinfestans）引起晚疫病。观察受害马铃薯叶片的症状。当气候潮湿时，在病叶背面常出现灰白色霜状霉层，是病菌什么形态？挑取少许霉状物在显微镜下检查，观察孢子囊是什么形状？孢囊梗和菌丝的形态有何不同？或挑取烟草疫霉水培养中的菌丝体，用水作为浮载剂制片镜检。注意孢子囊顶部有乳头状突起，折光率较强，即乳突。注意有无球形厚垣孢子，观察孢子囊形状的变化。将玻片放入4℃C冰箱中5-10分钟，取出立即镜检，观察孢子囊内游动孢子的形成和释放过程，注意与腐霉菌有什么不同。上述两个疫霉种均为异宗配合的，必须将两种不同交配型的菌株移植在同一平板上于18-20℃培养10-20天，就会出现有性生殖过程。挑取两菌株形成的菌落交界处带培养基的菌丝镜检雄器和藏卵器的形态。比较马铃薯晚疫病菌和腐霉菌的藏卵器与雄器的着生方式有何区别？（3）霜霉属（Peronospora）：十字花科植物霜霉菌（Peronosporaparasitica）为害油菜和其它十字花科蔬菜，引起霜霉病。观察十字花科霜霉菌为害油菜叶片正面和背面及花序的症状。取白菜霜霉病叶片，用挑针挑取少量在叶背面的霜霉，制成临时玻片后镜检。注意观察抱囊梗的分枝和顶端形态。参照教科书和挂图，对照下列检索表，制片观察各种霜霉病菌的临时玻片或病原菌永久玻片，掌握霜霉科几个常见属的主要形态特征及所致病害症状。霜霉科主要属的检索表1．孢囊梗粗壮，上部为重复2~3次的不规则二叉分枝....指梗霉属（Sclerospora).21：抱囊梗较细..2.孢囊梗单轴分枝，小枝与主轴成直角，分枝未端平钝...单轴霉属（Plasmopara）2.孢囊梗成锐角二叉分枝.33.分枝两侧不对称，顶端尖锐..假霜霉属(Pseudoperonospora)3．分枝两侧对称...X4.分枝顶端尖细...霜霉属（Peronospora）
（1）腐霉属（Pythium）：瓜果腐霉（P．aphanidermatum）可以引起多种经济作物幼苗的猝 倒病和果实的绵腐病。 观察黄瓜病果上的白色菌丝体。将生长旺盛的小块菌丝体移至清水中20℃培养24－48小时，菌丝 顶端即形成大量游动孢子囊，用针挑取在清水中培养过的菌丝，观察腐霉菌的游动孢子囊。注意 区分菌丝、孢囊梗和孢子囊。观察泡囊及游动孢子的形态特征。注意观察藏卵器和雄器的特征， 并与水稻绵霉菌的雄器和藏卵器相比较。 观看瓜果腐霉真菌游动孢子两游现象录象。 （2）疫霉属（Phytophthora）：致病疫霉（P.infestans）引起晚疫病。观察受害马铃薯叶片的 症状。当气候潮湿时，在病叶背面常出现灰白色霜状霉层，是病菌什么形态？挑取少许霉状物在 显微镜下检查，观察孢子囊是什么形状？孢囊梗和菌丝的形态有何不同？ 或挑取烟草疫霉水培养中的菌丝体，用水作为浮载剂制片镜检。注意孢子囊顶部有乳头状突起， 折光率较强，即乳突。注意有无球形厚垣孢子，观察孢子囊形状的变化。将玻片放入4℃冰箱中 5-10分钟，取出立即镜检，观察孢子囊内游动孢子的形成和释放过程，注意与腐霉菌有什么不 同。 上述两个疫霉种均为异宗配合的，必须将两种不同交配型的菌株移植在同一平板上于18－20℃培 养10-20天，就会出现有性生殖过程。挑取两菌株形成的菌落交界处带培养基的菌丝镜检雄器和 藏卵器的形态。比较马铃薯晚疫病菌和腐霉菌的藏卵器与雄器的着生方式有何区别？ （3）霜霉属（Peronospora）：十字花科植物霜霉菌（Peronosporaparasitica）为害油菜和其 它十字花科蔬菜，引起霜霉病。观察十字花科霜霉菌为害油菜叶片正面和背面及花序的症状。 取白菜霜霉病叶片，用挑针挑取少量在叶背面的霜霉，制成临时玻片后镜检。注意观察孢囊梗的 分枝和顶端形态。 参照教科书和挂图，对照下列检索表，制片观察各种霜霉病菌的临时玻片或病原菌永久玻片，掌 握霜霉科几个常见属的主要形态特征及所致病害症状。 霜霉科主要属的检索表 1．孢囊梗粗壮，上部为重复2~3次的不规则二叉分枝.指梗霉属（Sclerospora） 1．孢囊梗较细.2 2．孢囊梗单轴分枝，小枝与主轴成直角，分枝末端平钝.单轴霉属（Plasmopara） 2．孢囊梗成锐角二叉分枝.3 3．分枝两侧不对称，顶端尖锐.假霜霉属 （Pseudoperonospora） 3．分枝两侧对称.4 4．分枝顶端尖细. .霜霉属（Peronospora）
4．分枝顶部膨大，具3一4个指状周生小梗.....盘梗霉属（Bremia）?（4）白锈菌属（A/bugo）：观察白锈病症状特征。制作临时玻片镜检苋菜白锈病菌（A/bugobliti）或白菜白锈病菌（A/bugocandida）的孢子囊堆和孢子囊梗的形态特征，以及孢子囊的排列方式。取白菜白锈病肿大的茎或荚，选取白色疱斑处切片，置于滴加乳酚油的载玻片，用酒精灯略加热，使病组织透明，然后盖上盖玻片镜检，可见到白锈病菌的卵孢子，一个藏卵器内只有一个卵球。卵孢子表面有刻点状花纹，是白锈菌分类的依据之一。四、作业与思考题（1）观察十字花科蔬菜根肿病菌、马铃薯粉沥病菌、禾谷多粘霉菌、玉米褐斑病菌，绘休眠孢子囊图。（2）绘瓜果腐霉病菌、马铃薯晚疫病菌或十字花科蔬菜白锈病菌孢囊梗、孢子囊、卵孢子图。（3）绘大白菜霜霉病菌孢囊梗、孢子囊图。（4）卵菌纲真菌有哪些特点？结合它们的生物学特点、寄生性及病害特点说明本纲真菌的进化情况。实验四、接合菌灭门真菌及其所致病害一、目的和要求认识接合菌亚门真菌的一般形态及其所致病害的症状类型，了解异宗配合与同宗配合的含义及同型配子囊、异型配子囊的差别。二、材料和用具1材料甘薯软腐病菌（Rhizopusstolonifer）、犁头霉（Absidiasp.）和毛霉（Mucorsp.）"+、一”菌株的斜面培养物或平板培养物。甘薯软腐病新鲜标本，PDA培养基（即马铃薯葡萄糖琼脂培养基）。2用具灭菌培养血、酒精灯、火柴、纱布、挑针、载玻片、盖玻片、浮载剂、吸水纸、显微镜、擦镜纸。三、内容与方法1.根霉属（Rhizopus）观察甘薯软腐病症状特征。用挑针挑取霉层制片、镜检，观察孢子囊孢囊孢子、孢囊梗及囊轴、假根及其匍匐枝的形态。2毛霉属（Mucor）挑取平板培养的毛霉培养物制作临时玻片，镜检观察菌丝、孢子囊、抱囊孢子、孢囊梗的形态特征。3犁头霉属（Absidia）挑取平板培养的犁头霉培养物制作临时玻片，镜检观察菌丝、抱子囊、抱囊抱子、抱囊梗、假根及其匍匐枝的形态特征。注意假根和孢囊根的位置并与根霉相比较。4异宗配合现象与接合孢子
4．分枝顶部膨大，具3一4个指状周生小梗.盘梗霉属（Bremia） （4）白锈菌属（Albugo）:观察白锈病症状特征。制作临时玻片镜检苋菜白锈病菌 （Albugobliti）或白菜白锈病菌（Albugo candida）的孢子囊堆和孢子囊梗的形态特征，以及 孢子囊的排列方式。 取白菜白锈病肿大的茎或荚，选取白色疱斑处切片，置于滴加乳酚油的载玻片，用酒精灯略加 热，使病组织透明，然后盖上盖玻片镜检，可见到白锈病菌的卵孢子，一个藏卵器内只有一个卵 球。卵孢子表面有刻点状花纹，是白锈菌分类的依据之一。 四、作业与思考题 （1）观察十字花科蔬菜根肿病菌、马铃薯粉痂病菌、禾谷多粘霉菌、玉米褐斑病菌，绘休眠孢 子囊图。 （2）绘瓜果腐霉病菌、马铃薯晚疫病菌或十字花科蔬菜白锈病菌孢囊梗、孢子囊、卵孢子图。 （3）绘大白菜霜霉病菌孢囊梗、孢子囊图。 （4）卵菌纲真菌有哪些特点？结合它们的生物学特点、寄生性及病害特点说明本纲真菌的进化 情况。 实验四、接合菌灭门真菌及其所致病害 一、目的和要求 认识接合菌亚门真菌的一般形态及其所致病害的症状类型，了解异宗配合与同宗配合的含义及同 型配子囊、异型配子囊的差别。 二、材料和用具 1材料甘薯软腐病菌（Rhizopusstolonifer）、犁头霉（Absidiasp.）和毛霉 （Mucorsp.）“＋、—”菌株的斜面培养物或平板培养物。甘薯软腐病新鲜标本，PDA培养基 （即马铃薯葡萄糖琼脂培养基）。 2用具灭菌培养皿、酒精灯、火柴、纱布、挑针、载玻片、盖玻片、浮载剂、吸水纸、显微镜、 擦镜纸。 三、内容与方法 1．根霉属（Rhizopus）观察甘薯软腐病症状特征。用挑针挑取霉层制片、镜检，观察孢子囊、 孢囊孢子、孢囊梗及囊轴、假根及其匍匐枝的形态。 2毛霉属（Mucor）挑取平板培养的毛霉培养物制作临时玻片，镜检观察菌丝、孢子囊、孢囊孢 子、孢囊梗的形态特征。 ３犁头霉属（Absidia）挑取平板培养的犁头霉培养物制作临时玻片，镜检观察菌丝、孢子囊、 孢囊孢子、孢囊梗、假根及其匍匐枝的形态特征。注意假根和孢囊根的位置并与根霉相比较。 4异宗配合现象与接合孢子