现代生物学导论实验 微生物分客与视察 陈金春,林琳 清华大学微生物学实验室,100084 Chenjc(@mail.tsinghua.edu.cn
微生物分离与观察 陈金春,林琳 清华大学微生物学实验室,100084 Chenjc@mail.tsinghua.edu.cn 现代生物学导论实验
实验目的和内容 熟悉常用微生物培养基名称 掌握微生物的分离,接种技术 用平板划线法和稀释法分离微生物 认识微生物存在的普遍性;
实验目的和内容 ◼ 熟悉常用微生物培养基名称; ◼ 掌握微生物的分离,接种技术; ◼ 用平板划线法和稀释法分离微生物; ◼ 认识微生物存在的普遍性;
实验原理 ■从土壤中分离纯化微生物 土壤中混杂着大量的微生物,从里面分离,得到只含 有这一种微生物的纯培养 根据某微生物对营养,温度,氧气等条件要求不同而 供给它适宜的培养条件,或加入某种抑制剂造成只 利于该菌生长而抑制其他菌生长; 用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离,纯化;
实验原理 ◼ 从土壤中分离纯化微生物 ◼ 土壤中混杂着大量的微生物,从里面分离,得到只含 有这一种微生物的纯培养; ◼ 根据某微生物对营养,温度,氧气等条件要求不同而 供给它适宜的培养条件,或加入某种抑制剂造成只 利于该菌生长,而抑制其他菌生长; ◼ 用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离,纯化;
实验仪器材料和用具 ■实验材料 菌源土样10g ■培养基: 牛肉膏蛋白胨培养基 ■实验仪器 取液器(5000u1,1000x,200ul个一支) 培养箱,摇床
实验仪器,材料和用具 ◼ 实验材料: ◼ 菌源:土样10g; ◼ 培养基: ◼ 牛肉膏蛋白胨培养基; ◼ 实验仪器: ◼ 取液器(5000 ul, 1000ul, 200ul 个一支); ◼ 培养箱,摇床
实验仪器材料和用具 ■实验试剂 IN NaOH. IN HCl 0.9%无菌生理盐水 ■250ml三角瓶中9gml,每瓶加20粒玻璃珠: 250ml三角瓶中50m,作10倍稀释用
实验仪器,材料和用具 ◼ 实验试剂: ◼ 1N NaOH, 1N HCl, ◼ 0.9% 无菌生理盐水; ◼ 250ml三角瓶中99ml,每瓶加20粒玻璃珠; ◼ 250ml三角瓶中50ml,作10倍稀释用;
实验仪器材料和用具 ■实验用具 平皿35个 无菌有帽试管7只 无菌涂棒2根; 无菌5000u,1000ul,200u吸头各3个; 记号笔,酒精灯 试管架;
实验仪器,材料和用具 ◼ 实验用具: ◼ 平皿35个; ◼ 无菌有帽试管7只; ◼ 无菌涂棒2根; ◼ 无菌5000ul, 1000ul, 200ul 吸头各3个; ◼ 记号笔,酒精灯; ◼ 试管架;
实验步骤周围环境中微生物的观察 在牛肉蛋白胨平板上作如下实验 分别用未洗过的手指头用肥皂洗过的手指头(不用毛巾擦)在平板 是涂抹(用力一致) 用正在使用的毛巾,旧纸币在培养基上拖动 放置一根头发; 用无菌接种环分别沾一环自来水和河水在平板 上划线; 用无菌牙签取一点牙垢在培养基上划线 打开培养皿置实验台上(空气中)10min; 按无菌操作要求在酒精灯火焰边打开皿盖lmin 对着培养皿上的培养基咳嗽 稍稍打开嘴唇压在培养基上 以上用报纸包好倒置35C培养箱里培养48小时观察结果
实验步骤——周围环境中微生物的观察 ◼ 在牛肉蛋白胨平板上作如下实验： ◼ 分别用未洗过的手指头,用肥皂洗过的手指头(不用毛巾擦)在平板 是涂抹（用力一致）; ◼ 用正在使用的毛巾,旧纸币在培养基上拖动; ◼ 放置一根头发; ◼ 用无菌接种环分别沾一环自来水和河水在平板 上划线； ◼ 用无菌牙签取一点牙垢在培养基上划线； ◼ 打开培养皿置实验台上（空气中）10min; ◼ 按无菌操作要求在酒精灯火焰边打开皿盖1min. ◼ 对着培养皿上的培养基咳嗽。 ◼ 稍稍打开嘴唇压在培养基上; ◼ 以上用报纸包好倒置350C培养箱里培养48小时观察结果;
实验步骤从土壤中分离微生物 ■采土样 选择肥沃土壤,去表层土挖5~20cm深度的 土壤数10g,装入已灭菌的牛皮纸袋,封好袋 口,带回实验室 倒平板
实验步骤——从土壤中分离微生物 ◼ 采土样: ◼ 选择肥沃土壤,去表层土,挖5~20cm深度的 土壤数10g,装入已灭菌的牛皮纸袋,封好袋 口,带回实验室; ◼ 倒平板;
实验步骤从土壤中分离微生物 ■制备土壤稀释液 称取土样1.0g,放入盛99m无菌水并带有 玻璃珠的三角瓶中,置摇床振荡5mi使土 壤均匀分散成为土壤悬液(102)。用1m 的无菌吸头从中吸取0.5ml土壤悬液,注入 事先分装有4.5ml无菌水的试管中,吹吸3 次,振荡均匀(10-3)。然后同样方法, 配置成稀释度为10-4,10-5,10-6的土壤溶 液
实验步骤——从土壤中分离微生物 ◼ 制备土壤稀释液; ◼ 称取土样1.0g， 放入盛99ml无菌水并带有 玻璃珠的三角瓶中，置摇床振荡5min使土 壤均匀分散成为土壤悬液（10-2）。用1ml 的无菌吸头从中吸取0.5ml土壤悬液，注入 事先分装有4.5ml无菌水的试管中，吹吸3 次，振荡均匀（10-3）。然后同样方法， 配置成稀释度为10-4 ，10-5 ，10-6的土壤溶 液；
实验步骤从土壤中分离微生物 ■涂布 用一支新的无菌吸头,分别由各浓度土壤 稀释液中各吸取100u,对号较均匀地放入 口写好稀释度的牛肉蛋白胨培养基平板上, 用无菌玻璃涂棒涂匀。每个浓度做2个平 板
实验步骤——从土壤中分离微生物 ◼ 涂布 ◼ 用一支新的无菌吸头，分别由各浓度土壤 稀释液中各吸取100ul，对号较均匀地放入 已写好稀释度的牛肉蛋白胨培养基平板上， 用无菌玻璃涂棒涂匀。每个浓度做2个平 板