细菌鉴定中常用的生理生化反应 陈金春,林琳, 郑重,陈晶瑜,王亚武 清华大学微生物实验室,100084
细菌鉴定中常用的生理生化反应 陈金春,林琳， 郑重，陈晶瑜，王亚武 清华大学微生物实验室,100084
实验目的和内容 ■a.了解细菌生理生化反应原理,掌握细菌鉴定 中常用的生理生化反应的测定方法; ■b.通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分 解利用情况,了解细菌碳、氮代谢类型的多样 性 ■c.了解细菌在不同培养基中的不同生长现象及 其代谢产物在鉴别细菌中的意义;
实验目的和内容 ◼ a. 了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定 中常用的生理生化反应的测定方法； ◼ b. 通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分 解利用情况，了解细菌碳、氮代谢类型的多样 性； ◼ c. 了解细菌在不同培养基中的不同生长现象及 其代谢产物在鉴别细菌中的意义；
实验原理 ■细菌生化试验 各种细菌所具有的酶系统不尽相同,对营养基 质的分解能力也不一样,因而代谢产物或多或 少地各有区别,可供鉴别细菌之用。用生化试 验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其 代谢产物,从而鉴别细菌的种属,称之为细菌 的生化反应
实验原理 ◼ 细菌生化试验 ◼ 各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基 质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或 少地各有区别，可供鉴别细菌之用。用生化试 验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其 代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌 的生化反应
实验原理一一细菌生化试验 ■糖(醇)类发酵试验 不同的细菌含有发酵不同糖(醇)的酶,因而发酵 糖(醇)的能力各不相同。其产生的代谢产物亦不 相同,如有的产酸产气,有的产酸不产气。酸的 产生可利用指示剂来判定。在配制培养基时预先 加入溴甲酚紫[pH5.2(黄色)-6.8(紫色),当发 酵产酸时,可使培养基由紫色变为黄色。气体产 生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证 明
实验原理－－细菌生化试验 ◼ 糖(醇)类发酵试验 ◼ 不同的细菌含有发酵不同糖(醇)的酶，因而发酵 糖(醇)的能力各不相同。其产生的代谢产物亦不 相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。酸的 产生可利用指示剂来判定。在配制培养基时预先 加入溴甲酚紫[pH5．2(黄色)一6．8(紫色)]，当发 酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体产 生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证 明
实验原理一一细菌生化试验 ■甲基红( Methylred)试验(该试验简称MR试验) 很多细菌,如大肠杄菌等分解葡萄糖产生丙酮 酸,丙酮酸再被分解,产生甲酸、乙酸、乳酸 等,使培养基的pH降低到4.2以下,这时若加 甲基红指示剂呈现红色。因甲基红指示剂变色 范围是pH4.4(红色)~pH6.2(黄色)。若某些 细菌如产气杆菌,分解葡萄糖产生丙酮酸,但 很快将丙酮酸脱羧,转化成醇等物,则培养基 的pH仍在6.2以上,故此时加入甲基红指示剂, 呈现黄色
实验原理－－细菌生化试验 ◼ 甲基红(Methylred)试验(该试验简称MR试验) ◼ 很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮 酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸 等，使培养基的pH降低到4．2以下，这时若加 甲基红指示剂呈现红色。因甲基红指示剂变色 范围是pH4．4(红色)～pH6．2(黄色)。若某些 细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但 很快将丙酮酸脱羧，转化成醇等物，则培养基 的pH仍在6．2以上，故此时加入甲基红指示剂， 呈现黄色
实验原理一一大分子物质代谢实验 ■靛基质(吲哚)试验 某些细菌,如大肠杆菌,能分解蛋白质中的色 氨酸,产生靛基质(吲哚),靛基质与对二甲基 氨基苯甲醛结合,形成玫瑰色靛基质(红色化合 物)。 ■硫化氢试验 某些细菌能分解含硫的氨基酸(胱氨酸、半胱氨 酸等),产生硫化氢,硫化氢与培养基中的铅盐 或铁盐,形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。为硫 化氢试验阳性,可借以鉴别细菌
实验原理－－大分子物质代谢实验 ◼ 靛基质(吲哚)试验 ◼ 某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色 氨酸，产生靛基质(吲哚)，靛基质与对二甲基 氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质(红色化合 物)。 ◼ 硫化氢试验 ◼ 某些细菌能分解含硫的氨基酸(胱氨酸、半胱氨 酸等)，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐 或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。为硫 化氢试验阳性，可借以鉴别细菌
实验原理一一大分子物质代谢实验 明胶液化实验 某些细菌具有胶原酶,使明胶被分解,失去凝 固能力,呈现液体状态,是为阳性 ■淀粉水解试验(在紫外诱变中做,本实验不 做) ■细菌对大分子的淀粉不能直接利用,须靠产生 的胞外酶(淀粉酶)将淀粉水解为小分子糊精或 进一步水解为葡萄糖(或麦芽糖),再被细菌吸 收利用,细菌水解淀粉的过程可通过底物的变 化来证明,即用碘测定不再产生蓝色
实验原理－－大分子物质代谢实验 ◼ 明胶液化实验 ◼ 某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝 固能力，呈现液体状态，是为阳性。 ◼ 淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不 做） ◼ 细菌对大分子的淀粉不能直接利用，须靠产生 的胞外酶(淀粉酶)将淀粉水解为小分子糊精或 进一步水解为葡萄糖(或麦芽糖)，再被细菌吸 收利用，细菌水解淀粉的过程可通过底物的变 化来证明，即用碘测定不再产生蓝色
实验原理一一有机酸盐及氨盐利用试验 ■柠檬酸盐利用试验 柠檬酸盐培养基系一综合性培养基,其中柠檬酸 钠为碳的唯一来源。而磷酸二氢铵是氮的唯一来 源。有的细菌如产气杄菌,能利用柠檬酸钠为碳 源,因此能在柠檬酸盐培养基上生长,并分解柠 檬酸盐后产生碳酸盐,使培养基变为碱性。此时 培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝 色。不能利用柠檬酸盐为碳源的细菌,在该培养 基上不生长,培养基不变色
实验原理－－有机酸盐及氨盐利用试验 ◼ 柠檬酸盐利用试验 ◼ 柠檬酸盐培养基系一综合性培养基，其中柠檬酸 钠为碳的唯一来源。而磷酸二氢铵是氮的唯一来 源。有的细菌如产气杆菌，能利用柠檬酸钠为碳 源，因此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠 檬酸盐后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。此时 培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝 色。不能利用柠檬酸盐为碳源的细菌，在该培养 基上不生长，培养基不变色
实验仪器材料和用具 实验仪器 37℃恒温培养箱、20℃恒温培养箱(室温代替) ■微生物材料 大肠杆菌、变形杄菌、枯草杄菌、产气杆菌这四 种菌种的斜面各1支 试剂 甲基红试剂、V.P试剂、吲哚试剂、格里斯试剂 (硝酸盐利用试验)、卢戈氏碘液(淀粉水解试验)
实验仪器,材料和用具 ◼ 实验仪器 ◼ 37℃恒温培养箱、20℃恒温培养箱（室温代替）。 ◼ 微生物材料 ◼ 大肠杆菌、变形杆菌、枯草杆菌、产气杆菌这四 种菌种的斜面各1支。 ◼ 试剂 ◼ 甲基红试剂、V．P试剂、吲哚试剂、格里斯试剂 (硝酸盐利用试验)、卢戈氏碘液(淀粉水解试验)
实验仪器材料和用具 ■实验用具 试管:每份每个试验2根试验,1根对照, 8个试验共27根。 无菌乎皿:每份2个 杜氏小管:每份6个。 接种环、酒精灯、试管架、记号笔
实验仪器,材料和用具 ◼ 实验用具 ◼ 试管：每份每个试验2根试验，1根对照， 8个试验共27根。 ◼ 无菌乎皿：每份2个 ◼ 杜氏小管：每份6个。 ◼ 接种环、酒精灯、试管架、记号笔