第四节 细胞培养与细胞 杂交
第四节 细胞培养与细胞 杂交
一 、植物细胞培养 1. 外植体培养：诱发产生愈伤组织。用于研究植物的生长 发育、分化和变异；进行无性繁殖；制取代谢产物。 2. 悬浮细胞培养：适合于进行产业化大规模细胞培养，制 取植物代谢产物。 3. 原生质体培养：培养脱壁后的细胞，特点： ⚫ ①比较容易摄取外来的遗传物质，如DNA； ⚫ ②便于进行细胞融合，形成杂交细胞； ⚫ ③适宜条件下可产生细胞壁，经诱导分化成完整植株。 4. 单倍体培养：通过花药或花粉培养可获得单倍体植株
一 、植物细胞培养 1. 外植体培养：诱发产生愈伤组织。用于研究植物的生长 发育、分化和变异；进行无性繁殖；制取代谢产物。 2. 悬浮细胞培养：适合于进行产业化大规模细胞培养，制 取植物代谢产物。 3. 原生质体培养：培养脱壁后的细胞，特点： ⚫ ①比较容易摄取外来的遗传物质，如DNA； ⚫ ②便于进行细胞融合，形成杂交细胞； ⚫ ③适宜条件下可产生细胞壁，经诱导分化成完整植株。 4. 单倍体培养：通过花药或花粉培养可获得单倍体植株
Plant Cell Culture Animal Cell Culture
Plant Cell Culture Animal Cell Culture
二、动物细胞培养 ➢ 群体培养（mass culture）：将含有一定数量细胞的悬液 置于培养瓶中，让细胞贴壁生长，汇合（confluence） 后形成均匀的单细胞层； ➢ 克隆培养（clonal culture）：培养高度稀释的细胞悬液， 细胞贴壁生长，每一个细胞形成一个细胞集落，称为克隆。 ⚫ 转鼓培养法：为制取细胞产品而设计，大容量旋转培养，使培养 的细胞始终处于悬浮状态之中
二、动物细胞培养 ➢ 群体培养（mass culture）：将含有一定数量细胞的悬液 置于培养瓶中，让细胞贴壁生长，汇合（confluence） 后形成均匀的单细胞层； ➢ 克隆培养（clonal culture）：培养高度稀释的细胞悬液， 细胞贴壁生长，每一个细胞形成一个细胞集落，称为克隆。 ⚫ 转鼓培养法：为制取细胞产品而设计，大容量旋转培养，使培养 的细胞始终处于悬浮状态之中
➢ 原代培养 （primary culture）：即：培养直接来自动物 机体的细胞群，将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养 瓶称为传代或传代培养（Passage）。 ➢ 细胞株（cell strain）：从原代培养细胞群中筛选出的具 有特定性质或标志的细胞群。 ➢ 细胞系（cell line）：从肿瘤组织培养建立的细胞群或培 养过程中发生突变或转化的细胞，可无限繁殖。 ➢ 克隆（clone）：亦称无性系。指由同一个祖先细胞通过 有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群
➢ 原代培养 （primary culture）：即：培养直接来自动物 机体的细胞群，将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养 瓶称为传代或传代培养（Passage）。 ➢ 细胞株（cell strain）：从原代培养细胞群中筛选出的具 有特定性质或标志的细胞群。 ➢ 细胞系（cell line）：从肿瘤组织培养建立的细胞群或培 养过程中发生突变或转化的细胞，可无限繁殖。 ➢ 克隆（clone）：亦称无性系。指由同一个祖先细胞通过 有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群
表、实验室中常用的几种细胞系 细胞系名称 细胞类型 来源 3T3 成纤维细胞 小鼠 HeLa 宫颈癌上皮细胞 Henrietta Lacks BHK21 成纤维细胞 叙利亚仓鼠 PtKl 上皮细胞 袋鼠 L6 成肌细胞 大鼠 PCI2 嗜铬细胞 大鼠 SP2 浆细胞 小鼠 SP2／0 骨髓瘤浆细胞 小鼠 CHO 卵巢细胞 中国地鼠 Henrietta Lacks, American black ,died of cancer of uterine cervix in 1951
表、实验室中常用的几种细胞系 细胞系名称 细胞类型 来源 3T3 成纤维细胞 小鼠 HeLa 宫颈癌上皮细胞 Henrietta Lacks BHK21 成纤维细胞 叙利亚仓鼠 PtKl 上皮细胞 袋鼠 L6 成肌细胞 大鼠 PCI2 嗜铬细胞 大鼠 SP2 浆细胞 小鼠 SP2／0 骨髓瘤浆细胞 小鼠 CHO 卵巢细胞 中国地鼠 Henrietta Lacks, American black ,died of cancer of uterine cervix in 1951
三、细胞融合 ➢ 通过培养和介导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核 细胞的过程称为细胞融合（cell fusion）或细胞杂交。 ➢ 同核体：相同基因型的细胞融合而成。 ➢ 异核体：不同基因型的细胞融合而成。 ➢ 自发融合：同种细胞在培养过程中自发合并的现象。 ➢ 诱发融合：异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合。 ➢ 诱导细胞融合的方法：生物方法（仙台病毒、副流感病毒 和新城鸡瘟病毒 ）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理 方法（电击和激光）
三、细胞融合 ➢ 通过培养和介导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核 细胞的过程称为细胞融合（cell fusion）或细胞杂交。 ➢ 同核体：相同基因型的细胞融合而成。 ➢ 异核体：不同基因型的细胞融合而成。 ➢ 自发融合：同种细胞在培养过程中自发合并的现象。 ➢ 诱发融合：异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合。 ➢ 诱导细胞融合的方法：生物方法（仙台病毒、副流感病毒 和新城鸡瘟病毒 ）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理 方法（电击和激光）
The Production of Monodlonal Antibodies Antigen Tumor cells B lymphocytes (HGPRT deficient) Spleen Fusion ● Selective HAT medium 0 00①0 ● B lymphocytes die Hybrid cells Tumor cells die survive Grow clones from single cells Use ELISA to identify hybridoma producing desired antibody 0860 0① 0①0 00 0① ①① ①0 Hybridoma producing desired Hybridoma A Hybridoma B Hybridoma C monoclonal antibody
➢ 单克隆抗体技术 ➢ 正常淋巴细胞（如小鼠脾细胞）具有分泌 抗体的能力，但不能长期培养，瘤细胞 （如骨髓瘤）可以在体外长期培养，但不 分泌抗体。于是英国人Kohler和Milstein 1975将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体 技术，获1984年诺贝尔奖
➢ 单克隆抗体技术 ➢ 正常淋巴细胞（如小鼠脾细胞）具有分泌 抗体的能力，但不能长期培养，瘤细胞 （如骨髓瘤）可以在体外长期培养，但不 分泌抗体。于是英国人Kohler和Milstein 1975将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体 技术，获1984年诺贝尔奖