第八章荧光免疫技术
第八章 荧光免疫技术
第一节概述
第一节 概述
荧光的基本知识 荧光( fluorescence) 荧光物质吸收激发光的能量后,电子从基态跃 迁到激发态,当其回复至基态时,以发射光形式 释放出能量,称为荧光
荧光的基本知识 荧光（fluorescence） 荧光物质吸收激发光的能量后，电子从基态跃 迁到激发态，当其回复至基态时，以发射光形式 释放出能量，称为荧光
荧光的基本知识 发射光谱和激发光谱 发射光谱是指固定激发波长,在不同波长下记录的 样品发射荧光的强度。 激发光谱是指固定检测发射波长,用不同浪长的激 发光激发样品记录的相应的荧光发射强度
荧光的基本知识 发射光谱和激发光谱 ➢发射光谱是指固定激发波长，在不同波长下记录的 样品发射荧光的强度。 ➢激发光谱是指固定检测发射波长，用不同波长的激 发光激发样品记录的相应的荧光发射强度
荧光的基本知识 荧光效率 定义荧光物质分子将光能转变成荧光的百分率 计算公式 荧光效率= 发射荧光的光量子数(荧光强度) 吸收光的光量子数(激发光强度)
荧光的基本知识 荧光效率 定义:荧光物质分子将光能转变成荧光的百分率 计算公式: 荧光效率= 吸收光的光量子数（激发光强度） 发射荧光的光量子数（荧光强度）
荧光的基本知识 荧光寿命 >定义荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定程 度时所用的时间。 >各种荧光物质的荧光寿命不同
荧光的基本知识 荧光寿命 ➢定义:荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定程 度时所用的时间。 ➢各种荧光物质的荧光寿命不同
荧光的基本知识 荧光淬灭 定义:荧光物质在某些理化因素作用下,发射荧光减弱甚至 消退称为荧光淬灭。如紫外线照射、高(≥20°℃)、苯胺、 酚、硝基苯、I等
荧光的基本知识 荧光淬灭 定义:荧光物质在某些理化因素作用下，发射荧光减弱甚至 消退称为荧光淬灭。如紫外线照射、高（≥20℃）、苯胺、 酚、硝基苯、I -等
荧光物质 荧光物质是一类能吸收激发光的光能而发射荧光的物质。 常用的荧光物质 荧光物质最大吸收光谱最大发射光谱 应用 异硫氰酸荧光素(FTC490~ 520~530nm(黄绿FAT、荧光偏振免疫测定 495nm 色) 四乙基罗丹明 570~ 595~600nm(橙红FTC的衬比染色或双标 (RB200) 575nm 色) 记FAT 四甲基异硫氰酸罗丹550m620m(橙红色)FTC的衬比染色或双标 明( TRITO 记FAT 藻红蛋白(PE) 490-560nm595mm(红色) 双标记FAT、流式细胞术 7氨基4甲基香豆素354m40m(蓝色)双标记或多标记AT Eu3+螯合物 340nm 613nm 时间分辨荧光免疫测定
荧光物质 荧光物质 最大吸收光谱 最大发射光谱 应用 异硫氰酸荧光素 (FITC) 490～ 495nm 520～530nm （黄绿 色） FAT、荧光偏振免疫测定 四乙基罗丹明 (RB200) 570～ 575nm 595～600nm（橙红 色） FITC的衬比染色或双标 记FAT 四甲基异硫氰酸罗丹 明 (TRITC) 550nm 620nm（橙红色） FITC的衬比染色或双标 记FAT 藻红蛋白（PE） 490-560nm 595nm（红色） 双标记FAT、流式细胞术 7-氨基-4-甲基香豆素 354nm 430nm（蓝色） 双标记或多标记FAT Eu3+螯合物 340nm 613nm 时间分辨荧光免疫测定 荧光物质是一类能吸收激发光的光能而发射荧光的物质。 常用的荧光物质
第二节荧光抗体技术
第二节 荧光抗体技术
荧光抗体技术的基本原理 荧光素标记抗体与切片中组织细胞抗原反应,洗涤分离后 荧光显微镜观察呈现特异荧光的抗原抗体复合物及其部位, 对组织细胞抗原进行定性和定位检测,或对自身抗体进行 定性和滴度测定
荧光抗体技术的基本原理 荧光素标记抗体与切片中组织细胞抗原反应，洗涤分离后 荧光显微镜观察呈现特异荧光的抗原抗体复合物及其部位， 对组织细胞抗原进行定性和定位检测，或对自身抗体进行 定性和滴度测定