实验二 塑料半薄制片技术 一、 显微制片技术简介 (Biological microtechnique) 二、固定剂的种类(types of fixative) 三、 7022LR塑料制片步骤 (protocol of section preparation by 7022 LR) Plant Reproduction Biology
Plant Reproduction Biology 1 实验二 塑料半薄制片技术 一、显微制片技术简介 （Biological microtechnique） 二、固定剂的种类（types of fixative） 三、7022 LR塑料制片步骤 （protocol of section preparation by 7022 LR）
、 显微制片技术简介 显微制片技术简介 1.技术的发展 徒手切片(free-hand section)→石蜡包埋制 片(paraffin section)→塑料包埋半薄制片 (resin section)→特殊包埋剂制片(special section) Plant Reproduction Biology 2
Plant Reproduction Biology 2 一、显微制片技术简介 一、显微制片技术简介 1． 技术的发展 徒手切片（free-hand section）→石蜡包埋制 片（paraffin section）→塑料包埋半薄制片 （resin section）→特殊包埋剂制片（special section）
一、显微制片技术简介 2.塑料包埋剂的种类 (types of resin embedding media) ● 环氧树脂类(epoxy resin) Araldite粘度高，适合单细胞包埋 Epon812粘度低，用途广（易吸潮） ERL-4206(Spurr氏环氧树脂) 粘度很低 (极易吸潮) TAAB 812 resin kit Plant Reproduction Biology 3
Plant Reproduction Biology 3 一、显微制片技术简介 2. 塑料包埋剂的种类 （types of resin embedding media） ● 环氧树脂类（epoxy resin） Araldite 粘度高，适合单细胞包埋 Epon 812 粘度低，用途广（易吸潮） ERL-4206（Spurr氏环氧树脂） 粘度很低 （极易吸潮） TAAB 812 resin kit
一、显微制片技术简介 GMA类 GMA (glycol I methacylate,高温聚合 7022 LR (7022 Leica Historesin Embedding Kit,室温聚合) LKB 2218-500 Historesin Embeding kit Lowicryl K4M Plant Reproduction Biology 4
Plant Reproduction Biology 4 一、显微制片技术简介 ●GMA类 GMA（glycol methacylate，高温聚合） 7022 LR（7022 Leica Historesin Embedding Kit，室温聚合） LKB 2218-500 Historesin Embeding kit Lowicryl K4M
一、显微制片技术简介 O7022 LR ■组成 口基本树脂(Basic resin) 500m1 (2-Hydroxyethl)-methacrylate ☐活化剂(Activator)5g(10包) (dibenzolperoxide,易燃，密封， 低温，远离重金属，酸和碱) ☐固化剂(Hardener) 40m1 Plant Reproduction Biology 5
Plant Reproduction Biology 5 一、显微制片技术简介 ○7022 LR ■组成 □基本树脂(Basic resin) 500ml （2-Hydroxyethl）-methacrylate □活化剂(Activator) 5g (10包) （dibenzolperoxide，易燃,密封, 低温,远离重金属，酸和碱） □固化剂(Hardener) 40ml
、 显微制片技术简介 3. 塑料包埋剂的特点 ① 一 般为混合物，使用前分开包装，使用时才按 要求混合。 ②聚合前在室温下为液体，聚合后通常很坚硬。 ③一般只能用玻璃刀或钻石刀切片，不能用普通 刀片切片。 ④无需将塑料脱去，可直接染色，染色方便。 ⑤ 可进行半薄切片，通常可切到1-2um,而石蜡 包埋的通常切7-8um。由于可与非凝固性固定剂相 配合使用，所以很适合各种组织学染色。 Plant Reproduction Biology 6
Plant Reproduction Biology 6 一、显微制片技术简介 3． 塑料包埋剂的特点 ① 一般为混合物，使用前分开包装，使用时才按 要求混合。 ② 聚合前在室温下为液体，聚合后通常很坚硬。 ③ 一般只能用玻璃刀或钻石刀切片，不能用普通 刀片切片。 ④ 无需将塑料脱去，可直接染色，染色方便。 ⑤ 可进行半薄切片，通常可切到1-2цm，而石蜡 包埋的通常切7-8цm。由于可与非凝固性固定剂相 配合使用，所以很适合各种组织学染色
一、显微制片技术简介 △缺点： 成本较高，聚合前多数有毒性，所以操作 时应小心。 Plant Reproduction Biology
Plant Reproduction Biology 7 一、显微制片技术简介 △ 缺点： 成本较高，聚合前多数有毒性，所以操作 时应小心
、 显微制片技术简介 4. 特殊包埋剂简介 ① 包埋剂本身可脱去（似石蜡） Methacrylate Mix(U.V聚合，用丙酮脱去)： 适用于间接免疫荧光制片 PEG(polyethylene glycol,用水脱去)：适用 于荧光原位杂交和间接免疫荧光制片 Plant Reproduction Biology 8
Plant Reproduction Biology 8 一、显微制片技术简介 4． 特殊包埋剂简介 ① 包埋剂本身可脱去（似石蜡） Methacrylate Mix（U.V聚合，用丙酮脱去）： 适用于间接免疫荧光制片 PEG（polyethylene glycol,用水脱去）：适用 于荧光原位杂交和间接免疫荧光制片
一、显微制片技术简介 2 包埋剂本身不能脱去，但有“筛孔”结构 LR white(U.V聚合)：适用于间接免疫杂交 LR gold(室温聚合)：适用于间接免疫杂交 Plant Reproduction Biology 9
Plant Reproduction Biology 9 一、显微制片技术简介 ② 包埋剂本身不能脱去，但有“筛孔”结构 LR white（U.V聚合）：适用于间接免疫杂交 LR gold（室温聚合）：适用于间接免疫杂交
二、固定剂的种类 1非凝固性固定剂(non-coagulant fixatives) 2凝固性固定剂(coagulant fixatives) Plant Reproduction Biology 10
Plant Reproduction Biology 10 二、固定剂的种类 1 非凝固性固定剂 （ non-coagulant fixatives） 2 凝固性固定剂(coagulant fixatives）