实验二透射电子显微镜制片的方法 招薄制片技术，Ultna thin.s心tion) 透射电子显微镜的应用范围 二、透射电子显微镜的研究法 三、超薄制片技术
Plant Reproduction Biology 1 实验二 透射电子显微镜制片的方法 （超薄制片技术，Ultra-thin section） 一 一、 透射电子显微镜的应用范围 二、透射电子显微镜的研究法 三、超薄制片技术
透射电子显微镜的应用范围 1,一般结构观察 特定时期细胞的结构 2,发育动态结构的观察 性细胞发育过程 3,细胞骨架观察 Plant Reproduction Biology
Plant Reproduction Biology 2 一、 透射电子显微镜的应用范围 1，一般结构观察 特定时期细胞的结构 2，发育动态结构的观察 性细胞发育过程 3， 细胞骨架观察
透射电子显微镜的应用范围 4特定物质的定位 酶，特异蛋白，核酸和特定物质 O直接染色，如银染(sliver staining) O金标技术(immunogold labeling) O电镜原位杂交(TEM insitu hybridization) O其他如原位TdT反应(in situ TdT reaction) 5粗线期染色体观察 Plant Reproduction Biology
Plant Reproduction Biology 3 4 特定物质的定位 酶，特异蛋白，核酸和特定物质 ○直接染色，如银染（sliver staining） ○金标技术(immunogold labeling) ○电镜原位杂交(TEM insitu hybridization) ○其他 如原位TdT反应(in situ TdT reaction) 5 粗线期染色体观察 一、 透射电子显微镜的应用范围
二，透射电子显微镜的研究法 1 一般结构的分析 细胞壁，质膜，细胞器的形态，分布 以及彼此之间的联系，核位置和核膜结构
Plant Reproduction Biology 4 二，透射电子显微镜的研究法 1 一般结构的分析 细胞壁，质膜，细胞器的形态，分布 以及彼此之间的联系，核位置和核膜结构
透射电子显微镜的研究法 2,细胞发育动态分析 ●花粉 O尽可能拍照 O照片分组 O找代表性照片 O各个时期单独分析，列表 O找规律性 ●胚囊和受精过程： 注意连续切片和不同切片角度观察
Plant Reproduction Biology 5 2，细胞发育动态分析 ● 花粉 ○尽可能拍照 ○照片分组 ○找代表性照片 ○各个时期单独分析，列表 ○找规律性 ●胚囊和受精过程：注意连续切片和不同切片角度观察。 二，透射电子显微镜的研究法
三，超薄制片技术 (一)目的 初步掌握供透射或电子显微镜（以下简 称电镜)观察用的常规制片方法，并了解 电镜在胚胎学研究中的应用情况。 Plant Reproduction Biology 6
Plant Reproduction Biology 6 三，超薄制片技术 （一）目的 初步掌握供透射或电子显微镜（以下简 称电镜）观察用的常规制片方法，并了解 电镜在胚胎学研究中的应用情况
三，超薄制片技术 (二)仪器和药品 1.仪器：透射式电子显微镜，普通切片机、 超薄切片机、电镜用的镊子、铜网等。 Plant Reproduction Biology
Plant Reproduction Biology 7 （二） 仪器和药品 1. 仪器：透射式电子显微镜，普通切片机、 超薄切片机、电镜用的镊子、铜网等。 三，超薄制片技术
2.药品：4%戊二醛（用pH7.20.1M砷酸钠 cacodylate buffer缓冲液配制)、1o饿 酸（用0.1M砷酸钠缓冲液配制)，酒精 系列(30%、50%、70%、80%、90/% 和无水酒精)，环氧丙烷Propylene oxide 和TAAB812 Resin。 Plant Reproduction Biology 8
Plant Reproduction Biology 8 2. 药品：4%戊二醛（用pH7.2 0.1M砷酸钠 cacodylate buffer缓冲液配制）、1%锇 酸（用0.1M砷酸钠缓冲液配制），酒精 系列（30%、50%、70%、80%、90% 和无水酒精），环氧丙烷Propylene oxide 和TAAB 812 Resin
三，超薄制片技术 (二)实验步骤 1.材料的固定4%戊二醛 2.材料脱水 3.渗透 环氧丙烷(Propylene oxide) 4.包埋 TAAB 812 Resin 5.普通切片 Plant Reproduction Biology
Plant Reproduction Biology 9 （二） 实验步骤 1. 材料的固定 4%戊二醛 2. 材料脱水 3. 渗透 环氧丙烷（Propylene oxide） 4. 包埋 TAAB 812 Resin 5. 普通切片 三，超薄制片技术
6.二次包埋（再包埋） 7.再修块 8.超薄切片 9.染色 10.观察 Plant Reproduction Biology 10
Plant Reproduction Biology 10 6. 二次包埋（再包埋） 7. 再修块 8. 超薄切片 9. 染色 10. 观察