实验三发酵过程动力学实验 实验老师准备 1、种子培养基(实验老师准备4个100m种子) 2、产酶培养基确定(实验老师准备15瓶100ml产酶培养基和200ml已经长好 的种子),培养基的组成按上次实验配方设计。 实验目的 学习生物反应过程的参数测定和计算方法 仪器 摇床(最大转速250rmin),紫外分光光度计、电热恒温水浴槽、烘箱 电子天平(感量0001g) 三.试剂 1、DNS试剂:取6.3g3,5-二硝基水杨酸(DNS)和262mL2 mol/NAoH溶液 加到酒石酸钾钠的热溶液中(19g酒石酸钾钠溶于500mL水中),再加5g重蒸酚 和5g亚硫酸钠,搅拌使其溶解,冷却后加水定容至1000mn,保存于棕色瓶中放 置7天后使用 2、测定蛋白酶活试剂同上次实验。 .实验方法 1、生物量的测定 生物量的测定方法有比浊法和直接称重法等。本实验采用直接称重法。将发 酵液取出,在两层纱布上过滤菌体,自来水冲洗2-3次,收集菌体,在布氏漏斗 上抽干后称温重。 2、还原糖的测定 2.1原理 在碱性条件下,还原糖与3、5—二硝基水杨酸共热,3、5一二硝基水杨酸被 还原为3一氨基一5一硝基水杨酸(棕红色物质),还原糖则被氧化成糖酸及其它 物质。在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度呈一定的比例关 系,可在722型分光光度计540nm波长测定棕红色物质的吸光度值。查标准曲线计 算,可求出发酵液中还原糖的含量。 2.2实验步骤 (1)发酵液单层滤纸过滤,滤液0.2m1l稀释至含糖量2-8mg/100ml为试样
实验三 发酵过程动力学实验 实验老师准备: 1、种子培养基(实验老师准备 4 个 100ml 种子) 2、产酶培养基确定(实验老师准备 15 瓶 100ml 产酶培养基和 200ml 已经长好 的种子),培养基的组成按上次实验配方设计。 一.实验目的 学习生物反应过程的参数测定和计算方法 二.仪器 摇床(最大转速250r/min),紫外分光光度计、电热恒温水浴槽、烘箱 电子天平(感量0.001g) 三.试剂 1、DNS试剂:取6.3g3,5-二硝基水杨酸(DNS)和262mL2mol/LNaOH溶液 加到酒石酸钾钠的热溶液中(192g酒石酸钾钠溶于500 mL水中),再加5g重蒸酚 和5g亚硫酸钠,搅拌使其溶解,冷却后加水定容至1000mL,保存于棕色瓶中放 置7天后使用。 2、测定蛋白酶活试剂同上次实验。 三.实验方法 1、生物量的测定 生物量的测定方法有比浊法和直接称重法等。本实验采用直接称重法。将发 酵液取出,在两层纱布上过滤菌体,自来水冲洗2-3次,收集菌体,在布氏漏斗 上抽干后称温重。 2、还原糖的测定 2.1原理 在碱性条件下,还原糖与3、5-二硝基水杨酸共热,3、5-二硝基水杨酸被 还原为3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质),还原糖则被氧化成糖酸及其它 物质。在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度呈一定的比例关 系,可在722型分光光度计540nm波长测定棕红色物质的吸光度值。查标准曲线计 算,可求出发酵液中还原糖的含量。 2.2实验步骤 (1) 发酵液单层滤纸过滤,滤液0.2ml稀释至含糖量2-8mg/100ml为试样
2)取4支干燥试管,编号,按下表所示的量,精确加入待测液和试剂(m): 管号 空白 还原糖 项目 0 样品量 2.0 蒸馏水 3.5 1.5 1.5 1.5 5一二硝基 1.5 水杨酸试剂 总体积5050 5.0 5.0 加完试剂后,将各管摇匀,戴上小漏斗,在沸水浴中加热5分钟,立即用冷 水冷却至室温,再向各管中加入蒸馏水20.0ml,用橡皮塞塞住管口,颠倒混匀。 切勿用力振摇,引入气泡。在540mm波长下,以0号管为空白,在分光光度计上测 定出各管溶液的吸光度值。 (3)以管1、2、3的吸光度值的平均值在标准曲线上査出相应的还原糖毫克 数,按下式计算样品中还原糖的百分含量: 还原糖%=标准曲线上查得的还原糖毫克数是段体 样品毫克数 3发酵液中蛋白酶活的测定(同上次实验) 4、发酵液中pH测定:酸度计法。 四、实验具体操作 实验分组:每班分成六组,分别在以下时间进行取样,每组取两瓶。具体时 间为:在发酵0小时(前1天晚8点),12小时(第二天8点),15小时(11点),18 小时(下午2点),21小时(下午5点),24小时(下午8点)分别测定发酵液中还 原糖含量,生物量,蛋白酶活,pH变化,将整个班级结果汇总在一张表上,并 标注自己组的各指标位置,以观察整体发酵水平及测定的准确性
(2)取4支干燥试管,编号,按下表所示的量,精确加入待测液和试剂(ml): 管号 项目 空白 还原糖 0 1 2 3 样品量 0 2.0 2.0 2.0 蒸馏水 3.5 1.5 1.5 1.5 3、5-二硝基 水杨酸试剂 1.5 1.5 1.5 1.5 总体积 5.0 5.0 5.0 5.0 加完试剂后, 将各管摇匀,戴上小漏斗,在沸水浴中加热5分钟,立即用冷 水冷却至室温,再向各管中加入蒸馏水 20.0ml,用橡皮塞塞住管口,颠倒混匀。 切勿用力振摇,引入气泡。在540nm波长下,以0号管为空白,在分光光度计上测 定出各管溶液的吸光度值。 (3)以管1、2、3的吸光度值的平均值在标准曲线上查出相应的还原糖毫克 数,按下式计算样品中还原糖的百分含量: 提取液总体积 标准曲线上查得的还原糖毫克数 测定时取用体积 样品毫克数 3.发酵液中蛋白酶活的测定(同上次实验) 4、发酵液中pH测定:酸度计法。 四、实验具体操作 实验分组:每班分成六组,分别在以下时间进行取样,每组取两瓶。具体时 间为:在发酵0小时(前1天晚8点),12小时(第二天8点),15小时(11点),18 小时(下午2点),21小时(下午5点),24小时(下午8点)分别测定发酵液中还 原糖含量,生物量,蛋白酶活,pH变化,将整个班级结果汇总在一张表上,并 标注自己组的各指标位置,以观察整体发酵水平及测定的准确性。 还原糖%=