实验三发酵过程动力学实验 实验老师准备 1、种子培养基(实验老师准备4个100m种子) 2、产酶培养基确定(实验老师准备15瓶100ml产酶培养基和200ml已经长好 的种子),培养基的组成按上次实验配方设计。 实验目的 学习生物反应过程的参数测定和计算方法 仪器 摇床(最大转速250rmin),紫外分光光度计、电热恒温水浴槽、烘箱 电子天平(感量0001g) 三.试剂 1、DNS试剂:取6.3g3,5-二硝基水杨酸(DNS)和262mL2 mol/NAoH溶液 加到酒石酸钾钠的热溶液中(19g酒石酸钾钠溶于500mL水中),再加5g重蒸酚 和5g亚硫酸钠,搅拌使其溶解,冷却后加水定容至1000mn,保存于棕色瓶中放 置7天后使用 2、测定蛋白酶活试剂同上次实验。 .实验方法 1、生物量的测定 生物量的测定方法有比浊法和直接称重法等。本实验采用直接称重法。将发 酵液取出,在两层纱布上过滤菌体,自来水冲洗2-3次,收集菌体,在布氏漏斗 上抽干后称温重。 2、还原糖的测定 2.1原理 在碱性条件下,还原糖与3、5—二硝基水杨酸共热,3、5一二硝基水杨酸被 还原为3一氨基一5一硝基水杨酸(棕红色物质),还原糖则被氧化成糖酸及其它 物质。在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度呈一定的比例关 系,可在722型分光光度计540nm波长测定棕红色物质的吸光度值。查标准曲线计 算,可求出发酵液中还原糖的含量。 2.2实验步骤 (1)发酵液单层滤纸过滤,滤液0.2m1l稀释至含糖量2-8mg/100ml为试样
实验三 发酵过程动力学实验 实验老师准备： 1、种子培养基（实验老师准备 4 个 100ml 种子） 2、产酶培养基确定（实验老师准备 15 瓶 100ml 产酶培养基和 200ml 已经长好 的种子），培养基的组成按上次实验配方设计。 一．实验目的 学习生物反应过程的参数测定和计算方法 二．仪器 摇床（最大转速250r/min），紫外分光光度计、电热恒温水浴槽、烘箱 电子天平（感量0.001g） 三．试剂 1、DNS试剂：取6.3g3,5-二硝基水杨酸（DNS）和262mL2mol/LNaOH溶液 加到酒石酸钾钠的热溶液中（192g酒石酸钾钠溶于500 mL水中），再加5g重蒸酚 和5g亚硫酸钠，搅拌使其溶解，冷却后加水定容至1000mL，保存于棕色瓶中放 置7天后使用。 2、测定蛋白酶活试剂同上次实验。 三．实验方法 1、生物量的测定 生物量的测定方法有比浊法和直接称重法等。本实验采用直接称重法。将发 酵液取出，在两层纱布上过滤菌体，自来水冲洗2-3次，收集菌体，在布氏漏斗 上抽干后称温重。 2、还原糖的测定 2.1原理 在碱性条件下，还原糖与3、5－二硝基水杨酸共热，3、5－二硝基水杨酸被 还原为3－氨基－5－硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其它 物质。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度呈一定的比例关 系，可在722型分光光度计540nm波长测定棕红色物质的吸光度值。查标准曲线计 算，可求出发酵液中还原糖的含量。 2.2实验步骤 （1） 发酵液单层滤纸过滤，滤液0.2ml稀释至含糖量2-8mg/100ml为试样
2)取4支干燥试管,编号,按下表所示的量,精确加入待测液和试剂(m): 管号 空白 还原糖 项目 0 样品量 2.0 蒸馏水 3.5 1.5 1.5 1.5 5一二硝基 1.5 水杨酸试剂 总体积5050 5.0 5.0 加完试剂后,将各管摇匀,戴上小漏斗,在沸水浴中加热5分钟,立即用冷 水冷却至室温,再向各管中加入蒸馏水20.0ml,用橡皮塞塞住管口,颠倒混匀。 切勿用力振摇,引入气泡。在540mm波长下,以0号管为空白,在分光光度计上测 定出各管溶液的吸光度值。 (3)以管1、2、3的吸光度值的平均值在标准曲线上査出相应的还原糖毫克 数,按下式计算样品中还原糖的百分含量: 还原糖%=标准曲线上查得的还原糖毫克数是段体 样品毫克数 3发酵液中蛋白酶活的测定(同上次实验) 4、发酵液中pH测定:酸度计法。 四、实验具体操作 实验分组:每班分成六组,分别在以下时间进行取样,每组取两瓶。具体时 间为:在发酵0小时(前1天晚8点),12小时(第二天8点),15小时(11点),18 小时(下午2点),21小时(下午5点),24小时(下午8点)分别测定发酵液中还 原糖含量,生物量,蛋白酶活,pH变化,将整个班级结果汇总在一张表上,并 标注自己组的各指标位置,以观察整体发酵水平及测定的准确性
（2）取4支干燥试管,编号,按下表所示的量,精确加入待测液和试剂(ml): 管号 项目 空白 还原糖 0 1 2 3 样品量 0 2.0 2.0 2.0 蒸馏水 3.5 1.5 1.5 1.5 3、5－二硝基 水杨酸试剂 1.5 1.5 1.5 1.5 总体积 5.0 5.0 5.0 5.0 加完试剂后, 将各管摇匀，戴上小漏斗，在沸水浴中加热5分钟，立即用冷 水冷却至室温，再向各管中加入蒸馏水 20.0ml，用橡皮塞塞住管口，颠倒混匀。 切勿用力振摇，引入气泡。在540nm波长下，以0号管为空白，在分光光度计上测 定出各管溶液的吸光度值。 （3）以管1、2、3的吸光度值的平均值在标准曲线上查出相应的还原糖毫克 数，按下式计算样品中还原糖的百分含量： 提取液总体积 标准曲线上查得的还原糖毫克数 测定时取用体积 样品毫克数 3.发酵液中蛋白酶活的测定（同上次实验） 4、发酵液中pH测定：酸度计法。 四、实验具体操作 实验分组：每班分成六组，分别在以下时间进行取样，每组取两瓶。具体时 间为：在发酵0小时（前1天晚8点），12小时（第二天8点），15小时（11点），18 小时（下午2点），21小时（下午5点），24小时（下午8点）分别测定发酵液中还 原糖含量，生物量，蛋白酶活，pH变化，将整个班级结果汇总在一张表上，并 标注自己组的各指标位置，以观察整体发酵水平及测定的准确性。 还原糖％＝
