动物科学实践教学资源（实验指导）猪瘟的诊断、猪蓝耳病的诊断、鸡新城疫的诊断、布氏杆菌病的检疫.docx_大学文库

布氏杆菌病的检疫1、目的初步掌握布氏杆菌病的血清学诊断及变态反应等检疫方法。2、内容及方法12.1血清学诊断应用血清学方法检出血清中有抗体存在，则说明被检动物为布氏杆菌病愚畜。动物感染布氏杆菌以后首先出现的是凝集抗体，再过一段时间才出现补体结合抗体，最后产生变态反应性。补体结合反应是一种高度特异性的，其阳性反应与感染的符合率，比血清凝集试验与感染的符合率高。此种方法用来鉴别注苗后和自然感染所引起跑血清学反应很有价值，如4～8个月特牛注射19号菌苗、和山羊注射Rev1号菌苗，经过6个月后补体结合反应为阴性，而血清凝集反应仍为阳性或可疑。我国的家畜布氏杆菌病检疫应用的免疫生物学方法主要是凝集试验，补体结合试验及变态反应试验。试管凝集反应：本试验按《家畜布氏杆菌病试管凝集反应技术操作规程及判定标准》进行。（1）材料准备：抗原：由兽医生物药品厂生产供应。使用时用0.5%石炭酸生理盐水作1：20稀释，长霉或出现凝集块的抗原不能应用。被检血清：必须新鲜9无明显蛋白凝固，无溶血现象和腐败气味。阳性血清和阴性血清：由兽医生物药品厂生产供应。稀释液：0.5%石炭酸生理盐水，用化学纯石炭酸与氯化钠配制，经高压灭菌后备用。检疫羊用稀释液用0.5%石炭酸10%氯化钠溶液。（2）操作步骤：牛、马、骆驼用1:50、1:100、1:200、1:400四个稀释度；猪、山羊、绵羊和狗用1:25、1:50、1:100、1:200四个稀释度。稀释血清和抗原加入方法：取5支小试管。先加入稀释液0.5%石炭酸生理盐水，第1管加2.3ml，从第2管不加，第3、4、5管加0.5ml。取被检血清0.2ml加入到第一管中，混匀，分别取0.5加入2、3管中。将第3管混匀，吸0.5ml加入第4管，混匀，吸0.5ml加入第5管。被检血清0.2ml生理盐水2.3ml00.5ml0.5ml0.5ml然后从第2管起，加1：20稀释抗原0.5ml。血清最后稀释度为1:251：501:1001:200，震荡使血清和抗原充分混合，放入37℃温箱18-20小时，取出后室温静置2小时，记录每管的反应情况，出现50%以上凝集的最高稀释度就是这份血清的凝集价实验应该设立以下对照：阴性血清对照：操作步骤与被检血清相同。阳性血清对照：阳性血清稀释到原有滴度，其它同上。抗原对照：已稀释抗原0.5ml十稀释液0.5ml。结果判定：

布氏杆菌病的检疫 1、目的初步掌握布氏杆菌病的血清学诊断及变态反应等检疫方法。 2、内容及方法｜ 2.1 血清学诊断应用血清学方法检出血清中有抗体存在，则说明被检动物为布氏杆菌病愚畜。动物感染布氏杆菌以后首先出现的是凝集抗体，再过一段时间才出现补体结合抗体，最后产生变态反应性。补体结合反应是一种高度特异性的，其阳性反应与感染的符合率，比血清凝集试验与感染的符合率高。此种方法用来鉴别注苗后和自然感染所引起跑血清学反应很有价值，如 4～8 个月犊牛注射 19 号菌苗、和山羊注射 Rev1 号菌苗，经过 6 个月后补体结合反应为阴性，而血清凝集反应仍为阳性或可疑。我国的家畜布氏杆菌病检疫应用的免疫生物学方法主要是凝集试验，补体结合试验及变态反应试验。试管凝集反应：本试验按《家畜布氏杆菌病试管凝集反应技术操作规程及判定标准》进行。（1）材料准备：抗原：由兽医生物药品厂生产供应。使用时用 0．5％石炭酸生理盐水作 l：20 稀释，长霉或出现凝集块的抗原不能应用。被检血清：必须新鲜 9 无明显蛋白凝固，无溶血现象和腐败气味。阳性血清和阴性血清：由兽医生物药品厂生产供应。稀释液：0．5％石炭酸生理盐水，用化学纯石炭酸与氯化钠配制，经高压灭菌后备用。检疫羊用稀释液用 0．5％石炭酸 10％氯化钠溶液。（2）操作步骤：牛、马、骆驼用 1:50、1:100、1:200、1:400 四个稀释度；猪、山羊、绵羊和狗用 1:25、 1:50 、1:100、 1:200 四个稀释度。稀释血清和抗原加入方法：取 5 支小试管。先加入稀释液 0.5%石炭酸生理盐水，第 1 管加 2.3ml，从第 2 管不加，第 3、 4、5 管加 0.5ml。取被检血清 0.2ml 加入到第一管中，混匀，分别取 0.5 加入 2、3 管中。将第 3 管混匀，吸 0.5ml 加入第 4 管，混匀，吸 0.5ml 加入第 5 管。被检血清 0.2ml 生理盐水 2.3ml 0 0.5ml 0.5ml 0.5ml 然后从第 2 管起，加 1：20 稀释抗原 0.5ml。血清最后稀释度为 1:25 1:50 1:100 1:200, 震荡使血清和抗原充分混合，放入 37℃温箱 18-20 小时，取出后室温静置 2 小时，记录每管的反应情况，出现 50%以上凝集的最高稀释度就是这份血清的凝集价实验应该设立以下对照：阴性血清对照：操作步骤与被检血清相同。阳性血清对照：阳性血清稀释到原有滴度，其它同上。抗原对照：已稀释抗原 0.5ml＋稀释液 0.5ml。结果判定：

牛、马、骆驼血清凝集价在1：100以上；猪、山羊、绵羊和狗在1:50以上，判定为阳性。牛、马、骆驼血清凝集价在1：50以上；猪、山羊、绵羊和狗在1：25以上，判定为可疑。可疑家畜经过3-4周重检，牛羊重检仍然为可疑，可判定为阳性，猪马重检仍然为可疑，但是无临床症状判定为阴性。试管凝集试验也可用简便方式进行，即以0.2ml吸管将被检血清以0.08、0.04、0.02及0.01分别加人4支小试管内，然后每管加人1：40稀释的抗原1ml，充分摇匀，这样4管血清的最后稀释度分别为1：25、1：50、1：100、1:2000.牛、马和骆驼的血清稀释和加抗原的方法与前述者一致，不同的仅第1管加稀释液2.4ml及被检血清0.1ml。加抗原后从第2管到第5管血清稀释度依次为1:50、1:100、1:200和1:400。每次试验须作三种对照，阴性血清对照的操作步骤与被检血清者相同。阳性血清对照须将血清稀释到其原有滴度，其他步骤同上。抗原对照即将当时使用的乙稀释抗原0，5mlfB稀释液0.5ml。每次试验须制备比浊管，以为记录结果的依据，配制方法即以当时使用的已稚释抗原加等量稀释液，按表11比例配制。比浊管配制方法管号抗原稀释液实验用稀释液清亮度（%）标记1 0.0 1.0 10020.250.757530.50.5504 0.750.252551.00.00全部试管充分振荡后，置37～38℃温箱中，22～24h后用比浊管对照检查记录结果。出现50%以上凝集的最高稀释度就是这份血清的凝集价，因此50%亮度的比浊管很重要。（3）结杲判定：牛、马和骆驼血清集价为1：100以上，猪、羊和狗1：50以上者，判为阳性。牛、马和骆驼血清凝集价为1：50，猪、羊和狗为1：25者判为可疑。可疑反应的家畜经3～4周重检，牛、羊重检时仍为可疑，判为阳性。猪和马重检时仍为可疑，但农场中未出现阳性反应及无临诊症状灼家畜，判为阴性。鉴于猪血清常有个别出现非特异性凝集反应9在试验时须结合流行病学判定结果。如果出现个别弱阳性（例如凝集价为1：1001：200），但猪群中均无临诊症状（流产、关节炎、睾丸炎），可以考虑此种反应为非特异性，经3～4周可采血重检。2.2、变态反应。本试验是用不同类型的抗原进行布氏杆菌病诊断的方法之一。布氏杆菌水解素即变态反应试验的一种抗原，这种抗原专供绵羊和山羊检查布氏杆菌病之用。按《羊布氏杆菌病变态反应技术操作规程及判定标准》进行。（1）操作步骤使用细针头，将水解素注射于绵羊或山羊的尾褶壁部或肘关节无毛处的皮内，注射剂量0.2ml。注射前应将注射部位用酒精棉消毒。如注射正确，在注射部形成绿豆大小的硬包。注射一只后，针头应用酒精棉消毒，然

牛、马、骆驼血清凝集价在 1:100 以上；猪、山羊、绵羊和狗在 1:50 以上，判定为阳性。牛、马、骆驼血清凝集价在 1:50 以上；猪、山羊、绵羊和狗在 1:25 以上，判定为可疑。可疑家畜经过 3-4 周重检，牛羊重检仍然为可疑，可判定为阳性，猪马重检仍然为可疑，但是无临床症状判定为阴性。试管凝集试验也可用简便方式进行，即以 0．2ml 吸管将被检血清以 0.08、 O.04、0.02 及 O.01 分别加人 4 支小试管内，然后每管加人 1：40 稀释的抗原 1ml ,充分摇匀，这样 4 管血清的最后稀释度分别为 1：25、1：50、1：100、 1：2000. 牛、马和骆驼的血清稀释和加抗原的方法与前述者一致，不同的仅第 1 管加稀释液 2.4ml 及被检血清 0.1ml。加抗原后从第 2 管到第 5 管血清稀释度依次为 1:50、1:100、1:200 和 1:400。每次试验须作三种对照，阴性血清对照的操作步骤与被检血清者相同。阳性血清对照须将血清稀释到其原有滴度，其他步骤同上。抗原对照即将当时使用的乙稀释抗原 0，5ml fB 稀释液 0.5ml。每次试验须制备比浊管，以为记录结果的依据，配制方法即以当时使用的已稀释抗原加等量稀释液，按表 11 比例配制。比浊管配制方法管号抗原稀释液实验用稀释液清亮度(%) 标记 1 0.0 1.0 100 2 0.25 0.75 75 3 0.5 0.5 50 4 0.75 0.25 25 5 1.0 0.0 0 全部试管充分振荡后，置 37～38℃温箱中，22～24h 后用比浊管对照检查记录结果。出现 50％以上凝集的最高稀释度就是这份血清的凝集价，因此 50％亮度的比浊管很重要。（3）结杲判定：牛、马和骆驼血清攘集价为 1：100 以上，猪、羊和狗 1：50 以上者，判为阳性。牛、马和骆驼血清凝集价为 1：50，猪、羊和狗为 1：25 者判为可疑。可疑反应的家畜经 3～4 周重检，牛、羊重检时仍为可疑，判为阳性。猪和马重检时仍为可疑，但农场中未出现阳性反应及无临诊症状妁家畜，判为阴性。鉴于猪血清常有个别出现非特异性凝集反应 9 在试验时须结合流行病学判定结果。如果出现个别弱阳性（例如凝集价为 1：100～1：200），但猪群中均无临诊症状（流产、关节炎、睾丸炎），可以考虑此种反应为非特异性，经 3～4 周可采血重检。 2.2、变态反应。本试验是用不同类型的抗原进行布氏杆菌病诊断的方法之一。布氏杆菌水解素即变态反应试验的一种抗原，这种抗原专供绵羊和山羊检查布氏杆菌病之用。按《羊布氏杆菌病变态反应技术操作规程及判定标准》进行。（1）操作步骤使用细针头，将水解素注射于绵羊或山羊的尾褶壁部或肘关节无毛处的皮内，注射剂量 0.2ml。注射前应将注射部位用酒精棉消毒。如注射正确，在注射部形成绿豆大小的硬包。注射一只后，针头应用酒精棉消毒，然

猪瘟的诊断1.实验目的：掌握猪瘟的现场和实验室诊断方法。2.实验材料人工攻毒猪.剪刀，镊子等兔子。被检血清.阳性和阴性血清稀释液：0.5%石炭酸生理盐水3.实验步骤。3.1、临床诊断。详细询问和调查发病猪群的发病情况和有关的其他情况，包括发病猪头数、发病经过、可能的原因或传染源、主要临诊症状、治疗措施及效果、病程和死亡情况、发病猪的来源及预防接种陶时间、发病猪群附近其他猪群的情况等；详细检查病猪的临诊症状，包括步态及精神状态，大便形状和质地及是否带血或粘液，眼结膜和口腔粘膜是否有出血变化，体表可触摸淋巴结（鼠淋巴结）肿大情况，体温变化情况等。写出病历。病猪急宰或死亡后，应进行剖检，全面检查各系统内脏器官的眼观病理变化，特别注意淋巴结、咽喉部、肾脏、膀胱、胆囊、心内外膜、肠道等脏器的出血性交化。写出剖检记录。从临诊症状、流行病学和病理变化等方面进行综合分析，注意有无其他疾病（如弓形虫病、猪丹毒、猪肺疫、猪副伤寒等）的可能性，作出初步诊断。3.2、细菌学检查采取刚死不久的病猪或急宰猪的血液、淋巴结、脾脏等材料，接种于血液琼脂和麦康琼凯脂平板上，培养24～48h，检查有无疑似的病原细菌。知有，需进一步鉴定和作动物接种试验。将检查结果记入病历或剖检记录内，并提出诊断意见。猪瘟诊断中细菌学检查的目的是为了确定发病猪（群）是否存在并发或继发细菌感染，有时也为了排除猪瘟。3.3、家兔接种试验选择体重1.5kg以上大小基本相等的清洁级健康家兔4只，分为2组；试验前3天测温，每天3次，间隔8h，体温应正常。采病猪淋巴结和脾脏等病料做成1：10悬液，取上清液加青霉素、链霉素各1000单位处理后，以每只5m1的剂量肌肉内接种试验兔。如用血液需加抗凝剂，每头接种2ml。对照组不接种。继续测温，每隔6hl次，连续3天。7天后用猪瘟兔化弱毒1：20~50的清液静脉注射试验兔和对照兔，每只1ml

猪瘟的诊断 1．实验目的：掌握猪瘟的现场和实验室诊断方法。 2．实验材料人工攻毒猪. 剪刀，镊子等. 兔子. 被检血清. 阳性和阴性血清稀释液：0.5%石炭酸生理盐水 3．实验步骤。 3.1、临床诊断。详细询问和调查发病猪群的发病情况和有关的其他情况，包括发病猪头数、发病经过、可能的原因或传染源、主要临诊症状、治疗措施及效果、病程和死亡情况、发病猪的来源及预防接种陶时间、发病猪群附近其他猪群的情况等；详细检查病猪的临诊症状，包括步态及精神状态，大便形状和质地及是否带血或粘液，眼结膜和口腔粘膜是否有出血变化，体表可触摸淋巴结（鼠蹊淋巴结）肿大情况，体温变化情况等。写出病历。病猪急宰或死亡后，应进行剖检，全面检查各系统内脏器官的眼观病理变化，特别注意淋巴结、咽喉部、肾脏、膀胱、胆囊、心内外膜、肠道等脏器的出血性交化。写出剖检记录。从临诊症状、流行病学和病理变化等方面进行综合分析，注意有无其他疾病（如弓形虫病、猪丹毒、猪肺疫、猪副伤寒等）的可能性，作出初步诊断。 3.2、细菌学检查采取刚死不久的病猪或急宰猪的血液、淋巴结、脾脏等材料，接种于血液琼脂和麦康琼凯脂平板上，培养 24～48h，检查有无疑似的病原细菌。知有，需进一步鉴定和作动物接种试验。将检查结果记入病历或剖检记录内，并提出诊断意见。猪瘟诊断中细菌学检查的目的是为了确定发病猪（群）是否存在并发或继发细菌感染，有时也为了排除猪瘟。 3.3、家兔接种试验选择体重 1.5kg 以上大小基本相等的清洁级健康家兔 4 只，分为 2 组；试验前 3 天测温，每天 3 次，间隔 8h，体温应正常。采病猪淋巴结和脾脏等病料做成 1:10 悬液，取上清液加青霉素、链霉素各 100O 单位处理后，以每只 5m1 的剂量肌肉内接种试验兔。如用血液需加抗凝剂，每头接种 2ml。对照组不接种。继续测温，每隔 6h1 次，连续 3 天。 7 天后用猪瘟兔化弱毒 1：20～50 的清液静脉注射试验兔和对照兔，每只 1ml

每6h测温1次9连续3天。记录每只兔的体温变化，绘制体温曲线。根据试验组和对照组兔的热反应进行诊断。（1）如试验组接种病料后无热反应，后来接种猪瘟免化弱毒后也无热反应，而对照组兔接种猪免化弱毒有定型热反应，则诊断为猪瘟。（2）如试验组接种病料后有定型热反应，后来接种猪瘟兔化弱毒不发生热反应，而对照组接种猪瘟免化弱毒发生定型热反应，则表明病料内含有猪瘟兔化弱毒。（3）如试验组接种病料后无热反应，后来接种猪瘟兔化弱毒后发生定型热反应，或接种病料后发生热反应，后来对接种猪瘟兔化弱毒又发生定型热反应，而对照组接种猪瘟兔化毒后发生定型热反应，则不是猪瘟。3.4、直接荧光抗体检查1.取急性高温期病猪的扁桃体、淋巴结、脾或其他组织一小片，用滤纸吸去外面液体。2.取洁净载玻片一块，稍为烘热，将组织小片的切面触压玻片，略加转动，作成压印片，置室温干燥，或将病理组织制成冰冻切片。3、滴加冷丙酮数滴，置-20℃固定15~20mln。4.用磷酸盐缓冲液（PBS）洗，阴干。5.滴加标记荧光抗体（中固兽药监察所），置37℃饱和湿度箱盒内作用30min。6.用pH7.2的PBS漂洗3次，每次5~10min。7.干后滴加甘油缓冲液，加盖玻片封闭，用荧光显微镜检查。8.如细胞胞浆内有弥漫性、絮状或点状的亮黄绿色荧光，为猪瘟；如仅见暗绿或灰蓝色，则不是猪瘟。9.试验设已知含猪瘟病毒材料压印片和不含猪猛病毒材料压印片9作为阳性和阴性对照。10.标本染色和漂洗后，浸泡于5%吐温80PBS（pH7。2，0.01mo1/L）中1h以上，可除去非特异染色，晾干后用0.1%伊文思蓝复染15～30min，检查判定同上。思考题：1．猪瘟的兔体交互免疫实验的原理是什么？2.直接荧光抗体实验的原理是什么？

每 6h 测温 1 次 9 连续 3 天。记录每只兔的体温变化，绘制体温曲线。根据试验组和对照组兔的热反应进行诊断。（1）如试验组接种病料后无热反应，后来接种猪瘟免化弱毒后也无热反应，而对照组兔接种猪瘟兔化弱毒有定型热反应，则诊断为猪瘟。（2）如试验组接种病料后有定型热反应，后来接种猪瘟兔化弱毒不发生热反应，而对照组接种猪瘟兔化弱毒发生定型热反应，则表明病料内含有猪瘟兔化弱毒。（3）如试验组接种病料后无热反应，后来接种猪瘟兔化弱毒后发生定型热反应，或接种病料后发生热反应，后来对接种猪瘟兔化弱毒又发生定型热反应，而对照组接种猪瘟兔化毒后发生定型热反应，则不是猪瘟。 3.4、直接荧光抗体检查 1．取急性高温期病猪的扁桃体、淋巴结、脾或其他组织一小片，用滤纸吸去外面液体。 2．取洁净载玻片一块，稍为烘热，将组织小片的切面触压玻片，略加转动，作成压印片，置室温干燥，或将病理组织制成冰冻切片。 3、滴加冷丙酮数滴，置－20℃固定 15～20mln。 4．用磷酸盐缓冲液（PBS）洗，阴干。 5．滴加标记荧光抗体（中圄兽药监察所），置 37℃饱和湿度箱盒内作用 30min。 6．用 ρH7．2 的 PBS 漂洗 3 次，每次 5～10min。 7．干后滴加甘油缓冲液，加盖玻片封闭，用荧光显微镜检查。 8．如细胞胞浆内有弥漫性、絮状或点状的亮黄绿色荧光，为猪瘟；如仅见暗绿或灰蓝色，则不是猪瘟。 9．试验设已知含猪瘟病毒材料压印片和不含猪瘟病毒材料压印片 9 作为阳性和阴性对照。 10．标本染色和漂洗后，浸泡于 5％吐温 80 PBS（pH7。2，0．01mol／L）中 1h 以上，可除去非特异染色，晾干后用 0．1％伊文思蓝复染 15～30min，检查判定同上。思考题： 1. 猪瘟的兔体交互免疫实验的原理是什么？ 2. 直接荧光抗体实验的原理是什么？

猪蓝耳病的诊断1.实验目的：掌握猪蓝耳病的现场和实验室诊断方法。2.实验材料ELISA试剂盒被检血清、阳性和阴性血清、稀释液（0.5%石炭酸生理盐水）。3.实验步骤。3.1、临床诊断。详细询问和调查发病猪群的发病情况和有关的其他情况，包括流行病学情况（如发病动物、发病率、死亡率等）：主要临床表现（如母猪繁殖障碍、仔猪呼吸困难和死亡、部分仔猪四肢和耳部发出现蓝紫色、架子猪临床表现轻度流感症状等）：病理解部剖变化（间质性肺炎等）；治疗情况；免疫情况等3.2、实验室诊断3.2.1细菌学检查：单纯感染为阴性：采取刚死不久的病猪或急宰猪的血液、淋巴结、脾脏等材料，接种于血液琼脂和麦康琼凯脂平板上，培养24～48h，检查有无疑似的病原细菌。3.2.2PRRSV的分离鉴定3.2.3血清学检测：以ELISA进行抗体检测为例。A、用样品稀释液将待检血清1：40稀释（指形管中完成），取预包被的微孔板（可拆分使用），每孔加稀释后的血清100μ1。同样1：40稀释阴、阳性对照血清，阴、阳性对照各设2孔，每孔100μ1。另设一空白对照孔，空白对照孔加100μ1稀释液。轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃温浴30分钟。B、甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗板5次，200μ1/孔，每次在干净吸水纸上拍干。C、每孔加酶标二抗（抗猪IgG一HRP结合物）100μ1，置37℃温浴30分钟。D、洗涤5次，方法同2。E、每孔加底物A液、B液各1滴（50μ1），混匀，室温避光显色10分钟。F、每孔加终止液1滴（50μ1），15分钟内测定结果。判定标准：以空白孔调零，在酶标仪上测各孔OD630值。试验成立条件是阳性对照孔平均0D630值大于或等于1.0，阴性对照孔平均OD630值必须小于0.2。样品0D630值大于0.42，判定为阳性；样品0D630值在0.380.42之间，判为可疑；样品0D630值小于0.38，判为阴性。备注：阳性结果表明免疫力达标，阴性结果表明免疫力不达标。思考题：如何判定某个猪群是否有蓝耳病的存在？

猪蓝耳病的诊断 1．实验目的：掌握猪蓝耳病的现场和实验室诊断方法。 2．实验材料 ELISA 试剂盒被检血清、阳性和阴性血清、稀释液（0.5%石炭酸生理盐水）。 3．实验步骤。 3.1、临床诊断。详细询问和调查发病猪群的发病情况和有关的其他情况，包括流行病学情况（如发病动物、发病率、死亡率等）；主要临床表现（如母猪繁殖障碍、仔猪呼吸困难和死亡、部分仔猪四肢和耳部发绀出现蓝紫色、架子猪临床表现轻度流感症状等）；病理解剖变化（间质性肺炎等）；治疗情况；免疫情况等 3.2、实验室诊断 3.2.1 细菌学检查：单纯感染为阴性：采取刚死不久的病猪或急宰猪的血液、淋巴结、脾脏等材料，接种于血液琼脂和麦康琼凯脂平板上，培养 24～48h，检查有无疑似的病原细菌。 3.2.2 PRRSV 的分离鉴定 3.2.3 血清学检测：以 ELISA 进行抗体检测为例。 A、用样品稀释液将待检血清 1:40 稀释（指形管中完成），取预包被的微孔板（可拆分使用），每孔加稀释后的血清 100μl。同样 1:40 稀释阴、阳性对照血清，阴、阳性对照各设 2 孔，每孔 100μl。另设一空白对照孔，空白对照孔加 100μl 稀释液。轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置 37℃温浴 30 分钟。 B、甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗板 5 次，200μl/孔，每次在干净吸水纸上拍干。 C、每孔加酶标二抗（抗猪 IgG－HRP 结合物）100μl，置 37℃温浴 30 分钟。 D、洗涤 5 次，方法同 2。 E、每孔加底物 A 液、B 液各 1 滴（50μl），混匀，室温避光显色 10 分钟。 F、每孔加终止液 1 滴（50μl），15 分钟内测定结果。判定标准：以空白孔调零，在酶标仪上测各孔 OD630 值。试验成立条件是阳性对照孔平均 OD630 值大于或等于 1.0，阴性对照孔平均 OD630 值必须小于 0.2。样品 OD630 值大于 0.42，判定为阳性；样品 OD630 值在 0.38～0.42 之间，判为可疑；样品 OD630 值小于 0.38，判为阴性。备注：阳性结果表明免疫力达标，阴性结果表明免疫力不达标。思考题：如何判定某个猪群是否有蓝耳病的存在？

鸡新城疫的诊断1、实验目的：掌握鸡新城疫的临诊诊断要点；系统地了解和掌握鸡新城疫的实验室诊断和免疫监测技术。2、实验内容2.1、鸡新城疫的临诊诊断。2.2NDV的分离鉴定2.2.1.样品采集2.2.2.病毒分离培养分离NDv最敏感的方法仍是鸡胚接种。接种前样品在含抗生素培养基中应在室温作用2h（女口加抗生素培养基中的样品已在4℃过夜，此步可省去）。组织悬液或拭子的冲洗液在1000～2000r／min，离心10min，取上清接种4～5个9～10日龄的SPF鸡胚，以尿囊腔接种每胚0.2ml。如果没有SPF鸡胚，也可以用非免疫鸡胚。抗体阳性鸡胚会降低病毒分离的成功率。接种后的鸡胚在37℃继续孵育9并定时照蛋。将死胚或垂死胚取出置4℃冷却，接种5～7天后将所有鸡胚取出置4℃冷却，然后取尿囊液和羊水做HA试验。为了不漏检，应将第一次试验阴性的胚液不经稀释再盲传两代。「对所有HA阳性胚液做无菌检查，如有细菌污染，可用0.22um微孔滤膜过滤除菌，加人抗生素后再接种910日龄的鸡胚。2.2.3.病毒的鉴定鸡胚液HA阳性，用特异性抗血清进行血凝抑制试验（HI），可证实或排除NDV。2.2.3NDV的毒力型鉴定2.3鸡新城疫的血凝和血凝抑制试验。试验材料：96孔血凝板、微量加样器、吸头、Eppendorf管、生理盐水、1%的鸡红细胞、ND种毒、ND卵黄抗体试验原理：NDV等病毒具有凝结多种动物红细胞的特性，NDV的这种特性可被相应的抗体所抑制，因此，可以用血凝和血凝抑制实验进行NDV的鉴定和抗体监测。试验方法2.3.1HA（血凝试验）于血凝板的每孔中滴加生理盐水0.05ml，共滴1排12孔；吸NDV原液滴加于第一列孔，每孔0.05ml，然后由左至右倍比稀释至第11列孔，再从第11列孔吸0.05ml弃之，最后一列不加抗原作为对照；于每孔加入1%红细胞悬液0.05ml，以手持血凝板绕圆圈混匀；置37℃下3040min，判断结果。2.3.2HI（血凝抑制试验）

鸡新城疫的诊断 1、实验目的：掌握鸡新城疫的临诊诊断要点；系统地了解和掌握鸡新城疫的实验室诊断和免疫监测技术。 2、实验内容 2．1、鸡新城疫的临诊诊断。 2．2 NDV 的分离鉴定 2．2．1．样品采集 2．2．2．病毒分离培养分离 NDv 最敏感的方法仍是鸡胚接种。接种前样品在含抗生素培养基中应在室温作用 2h（女口加抗生素培养基中的样品已在 4℃过夜，此步可省去）。组织悬液或拭子的冲洗液在 1000～2000r／min，离心 10min，取上清接种 4～5 个 9～10 日龄的 SPF 鸡胚，以尿囊腔接种每胚 O．2ml。如果没有 SPF 鸡胚，也可以用非免疫鸡胚。抗体阳性鸡胚会降低病毒分离的成功率。接种后的鸡胚在 37℃继续孵育 9 并定时照蛋。将死胚或垂死胚取出置 4℃冷却，接种 5～7 天后将所有鸡胚取出置 4℃冷却，然后取尿囊液和羊水做 HA 试验。为了不漏检，应将第一次试验阴性的胚液不经稀释再盲传两代。｜对所有 HA 阳性胚液做无菌检查，如有细菌污染，可用 0.22um 微孔滤膜过滤除菌，加人抗生素后再接种 9～10 日龄的鸡胚。 2．2．3．病毒的鉴定鸡胚液 HA 阳性，用特异性抗血清进行血凝抑制试验（HI），可证实或排除 NDV。 2．2．3 NDV 的毒力型鉴定 2．3 鸡新城疫的血凝和血凝抑制试验。试验材料: 96 孔血凝板、微量加样器、吸头、Eppendorf 管、生理盐水、1%的鸡红细胞、ND 种毒、ND 卵黄抗体试验原理：NDV 等病毒具有凝结多种动物红细胞的特性，NDV 的这种特性可被相应的抗体所抑制，因此，可以用血凝和血凝抑制实验进行 NDV 的鉴定和抗体监测。试验方法 2.3.1 HA（血凝试验）于血凝板的每孔中滴加生理盐水 0.05ml，共滴 1 排 12 孔；吸 NDV 原液滴加于第一列孔，每孔 0.05 ml，然后由左至右倍比稀释至第 11 列孔，再从第 11 列孔吸 0.05 ml 弃之，最后一列不加抗原作为对照；于每孔加入 1%红细胞悬液 0.05 ml,以手持血凝板绕圆圈混匀；置 37℃下 30~40min, 判断结果。 2.3.2 HI（血凝抑制试验）