第十五章免疫标记技术 岳华
第十五章 免疫标记技术 岳 华
标记抗体技术是在抗体球蛋白分子上,连接 某一个特定的、容易检测的分子或原子(标记 物),利用标记抗体能与相应抗原结合的特性, 通过标记物的检测,从而确定抗原的存在部位。 标记抗体技术目前广泛应用的主要有荧光抗体、 酶标记抗体和同位素标记抗体等。前二者主要用 于抗原定位,而后者不仅可用于定性、定量,还 可用于定位。此外尚有铁蛋白标记抗体,主要用 于免疫电镜的技术,在亚细胞水平上进行抗原定 位 西南民族大学
西南民族大学 标记抗体技术是在抗体球蛋白分子上，连接 某一个特定的、容易检测的分子或原子 (标记 物)，利用标记抗体能与相应抗原结合的特性， 通过标记物的检测，从而确定抗原的存在部位。 标记抗体技术目前广泛应用的主要有荧光抗体、 酶标记抗体和同位素标记抗体等。前二者主要用 于抗原定位，而后者不仅可用于定性、定量，还 可用于定位。此外尚有铁蛋白标记抗体，主要用 于免疫电镜的技术，在亚细胞水平上进行抗原定 位
荧光抗体技术(F1 uorescent antibody technique) 将荧光染料连接在提纯的抗体球蛋白分子上, 这种用荧光染料标记的抗体,就叫荧光抗体。 种物质受到短波光线(如紫外线、蓝紫光)激发 后,能放出波长比激发光长的可见光,此种光称 为荧光染料,抗体经过荧光染料标记后,并不影 响其与抗原结合的能力和特异性。因此,当荧光 抗体与相应的抗原结合时,就形成带有荧光性的 抗原抗体复合物,从而可在荧光显微镜下检出。 西南民族大学
西南民族大学 一 、荧光抗体技术 (Fluorescent antibody technique) 将荧光染料连接在提纯的抗体球蛋白分子上， 这种用荧光染料标记的抗体，就叫荧光抗体。一 种物质受到短波光线 (如紫外线、蓝紫光)激发 后，能放出波长比激发光长的可见光，此种光称 为荧光染料，抗体经过荧光染料标记后，并不影 响其与抗原结合的能力和特异性。因此，当荧光 抗体与相应的抗原结合时，就形成带有荧光性的 抗原抗体复合物，从而可在荧光显微镜下检出
荧光标记抗体 直接法 荧光标记 抗体 间接法 洗抗g抗体 涤 荧光标记 抗体 补体一 补体法 洗抗C3抗体 人 洗涤 大大 免疫荧光技术 Immunology
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11l/
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Secondary filt ( removes UV li H Fluorescein Isothiocyanate COOH 517nm Uv light 490 nm N=C=S H PrimaryHeat Filter Filter
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Fluorescein isothiocyanate (Fitc) UV Light 490 nm Green Light 517nm (longer wavelength) Antibod 西南民族大学
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Antinuclear fluorescent antibody stain 西南民族大学
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LA IB A 2B2 3A 3B
()直接法将提纯的抗体球蛋白(主要为 IgG)与FITC结合制成荧光抗体。 E. coli E. coli Fluorescein Isothiocyanate (FITC) Antibody Fluorecein Isothiocyanate (FITC) Adsorbs at 490 to 495 nm and emits at 517 nm (green light)
西南民族大学 (一)直接法 将提纯的抗体球蛋白(主要为 IgG)与FITC结合制成荧光抗体