第一节 原核基因组 一、病毒基因组 二、细菌基因组 第二节 真核基因组 一、基因组大小 二、真核基因组结构组织特征 三、基因组计划及其意义 第三节 基因重组和基因移动 一、基因重组 二、基因移动

实验一 细菌感受态的制备和质粒的转化 实验二 碱变性法提取质粒 DNA 实验三 水平式琼脂糖凝胶电泳法检测 DNA 实验四 DNA 的限制性内切酶酶切 实验五 DNA 的回收与连接 实验六 基因的 PCR 扩增 实验七 用温度敏感型启动子表达系统表达目的基因 实验八 基因组合生物合成新化合物 实验九 药用甘草片中甘草酸含量的分析及其质量评价 实验十 牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备 实验十一 固定化细胞法生产 L-天冬氨酸和 L-丙氨 实验十二 重组水蛭素Ⅲ的制备 实验十三 酸醇提取法制备猪胰岛素 实验十四 多肽缩宫素的 Fmoc 固相合成 实验十五 酵母 RNA 的制备和单核苷酸的离子交换柱层析分析 实验十六 单核苷酸衍生物制备 实验十七 胰弹性蛋白酶的制备及活力测定 实验十八 超氧化物歧化酶的分离纯化 实验十九 重组门冬酰胺酶Ⅱ的纯化与分析

第一节 碱基互补的能力 第二节 限制性内切酶 第三节 重组DNA 第四节 重组DNA方法学 第五节 DNA序列分析 第六节 基因工程 第七节 遗传病——基因诊断和基因治疗 第八节 基因工程生物技术和社会伦理问题

生物进化过程中微生物形成完善的代谢调节机制 不会有代谢产物的积累 解除或突破微生物的代谢调节控制 ↓ 目的产物积累 微生物育种的目的方法:突变、体内重组 体外重组(基因工程)

实验一 质粒DNA的小量提取 实验二 质粒DNA的酶切和电泳鉴定 实验三 重组DNA分子的构建 实验四 重组子的检测及限制性酶切鉴定 实验五 大肠杆菌感受态细胞的制备 实验六 质粒DNA分子导入原核细胞 实验七 聚合酶链式反应（PCR）扩增DNA片断 实验八 植物基因组DNA的提取 实验十 植物总RNA的提取及其电泳鉴定

第一节 概述 第二节 DNA克隆的基本过程 第三节 重组DNA技术与分子医学的关系

第一节. 概述 第三节. 基因工程工具酶 第四节. 基因工程载体 第五节. 目的基因的获得 第六节. 目的基因导入受体细胞 第七节. 重组体的筛选 第八节. 应用

7.1 Point mutation的类型 7.2 突变发生的机理 7.3 保证遗传稳定的机制 7.4 基因重组交换的分子机理

实验一 细菌感受态的制备和质粒的转化. 2 实验二 碱变性法提取质粒 DNA . 6 实验三 水平式琼脂糖凝胶电泳法检测 DNA . 11 实验四 DNA 的限制性内切酶酶切 . 15 实验五 DNA 的回收与连接 . 18 实验六 基因的 PCR 扩增. 23 实验七 用温度敏感型启动子表达系统表达目的基因. 29 实验八 基因组合生物合成新化合物. 36 实验九 药用甘草片中甘草酸含量的分析及其质量评价. 47 实验十 牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备. 48 实验十一 固定化细胞法生产 L-天冬氨酸和 L-丙氨酸. 50 实验十二 重组水蛭素Ⅲ的制备. 57 实验十三 酸醇提取法制备猪胰岛素. 65 实验十四 多肽缩宫素的 Fmoc 固相合成法. 70 实验十五 酵母 RNA 的制备和单核苷酸的离子交换柱层析分析. 76 实验十六 单核苷酸衍生物制备. 82 实验十七 胰弹性蛋白酶的制备及活力测定. 85 实验十八 超氧化物歧化酶的分离纯化. 89 实验十九 重组门冬酰胺酶Ⅱ的纯化与分析. 97

实验一 植物基因组DNA的提取及其定性定量分析. 1 实验二 PCR扩增目的片段和胶回收. 8 实验三 目的片段和载体的连接. 15 实验四 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化效率检测. 18 实验五 重组质粒的转化. 20 实验六 重组质粒DNA的提取及酶切鉴定. 23 实验七 RNA的提取（TRIzol法）. 30 实验八 mRNA的分离与纯化. 36 实验九 RT-PCR技术. 38 实验十 用mRNA差异显示法分离特异表达的基因片段 . 40 实验十一 cDNA文库的构建. 46 实验十二 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） . 51 实验十三 Southern印迹杂交法（Southern blot）. 56 实验十四 RNA分子杂交（Northern blot）. 62 实验十五 固定化蛋白质的免疫生化鉴定（Western blot）. 67 实验十六 RFLP技术. 71 实验十七 RAPD技术. 74 实验十八 细胞分裂中期染色体的荧光原位杂交技术(FISH). 76 附录一 常用缓冲液及其配制. 80 附录二 常用抗生素溶液. 85 附录三 常用贮存液的配制. 85 附录四 常用核酸蛋白换算数据. 93 附录五 染料在凝胶中的迁移速度. 94 附录六 实验中的一些好习惯. 95