14基因重组与基因工程 Chapter 14 gene recombination and genetic engineering
14 基因重组与基因工程 Chapter 14 gene recombination and genetic engineering
第一节分子杂交与印迹技术 Molecular Hybridization Blotting Technology
第一节 分子杂交与印迹技术 Molecular Hybridization & Blotting Technology
分子杂交与印迹技术的原理 核酸分子杂交(nucleic acid hybridization) 在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链 分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一 起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定 的碱基配对关系，就可以在不同的分子之间形 成杂化双链(heteroduplex)
核酸分子杂交 (nucleic acid hybridization ) 在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链 分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一 起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定 的碱基配对关系，就可以在不同的分子之间形 成杂化双链(heteroduplex) 。 一、分子杂交与印迹技术的原理
复性 时 RNA —DNA
复性 RNA DNA
1、印迹技术 2、探针技术 探针(probe) 一小段用同位素、生物素或荧光染料标 标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸， 与固定在NC膜上的核苷酸结合，判断是否 有同源的核酸分子存在
1、印迹技术 2、探针技术 探针 (probe) 一小段用同位素、生物素或荧光染料标 标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸， 与固定在NC膜上的核苷酸结合，判断是否 有同源的核酸分子存在
二、印迹技术的类别及应用 1、 DNA印迹技术(Southern blotting) 用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体 的分析。 2、RNA印迹技术(Northern blotting) 用于RNA的定性定量分析。 3、蛋白质的印迹分析(Western blotting) 用于蛋白质定性定量及相互作用研究
二、印迹技术的类别及应用 1、DNA印迹技术(Southern blotting) 用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体 的分析。 2、RNA印迹技术(Northern blotting) 用于RNA的定性定量分析。 3、蛋白质的印迹分析(Western blotting) 用于蛋白质定性定量及相互作用研究
其他 斑，点印迹(dot blotting) 原位杂交(in situ hybridization) DNA,点阵(DNA array) DNA芯片技术(DNA chip)
其他 斑点印迹 (dot blotting) 原位杂交 (in situ hybridization) DNA点阵 (DNA array) DNA芯片技术 (DNA chip)
限制性内切酶 RNA样品 酶切DNA溶液 蛋白样品 电泳 转移 杂交 转移到NC膜后与 转移到NC膜或尼龙膜 转移到NC膜或PVDF 标记探针杂交 后与标记探针杂交 膜后与抗体反应 放或 三种印迹技术的比较 射化 影色 DNA印迹 RNA印迹 蛋白印迹
三种印迹技术的比较
DNA 转移至酸 纤维滤膜上 限制酶消化(HindⅢ) 加黄量 疑戒 吸潮纸 运纸 滤纸 转移缓冲液 硝酸纤维滤感 琼脂榜楼胶电脉 32P-DNA探针 杂交 ③ ① 硝骏纤维鸿膜 放射自显影 分子杂交实验
分子杂交实验 ① ② ③
E 放射自显影照片
放射自显影照片