第五章 菌种保藏 ·、菌种的衰退与复壮的 1.衰退： 菌种在培养或保藏过程中，由于自发突变的 存在，出现某些原有优良生产性状的劣化、 遗传标记的丢失等现象，称为菌种的衰退。 衰退的原因：①基因突变， ②分离现象
第五章 菌种保藏 一、菌种的衰退与复壮的 1.衰退： 菌种在培养或保藏过程中，由于自发突变的 存在，出现某些原有优良生产性状的劣化、 遗传标记的丢失等现象，称为菌种的衰退。 衰退的原因：①基因突变， ②分离现象
常见的衰退现象： 菌落和细胞形态的改变； 生长速度缓慢，产孢子越来越少； 抵抗力、抗不良环境能力减弱等。 代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降；
常见的衰退现象： 菌落和细胞形态的改变； 生长速度缓慢，产孢子越来越少； 抵抗力、抗不良环境能力减弱等。 代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降；
2、菌种的复壮： 使衰退的菌种恢复原来优良性状。狭义的复 壮是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种 分离和生产性能测定等方法，从衰退的群体中 找出未衰退的个体，以达到恢复该菌原有典型 性状的措施；广义的复壮是指在菌种的生产性 能未衰退前就有意识的经常、进行纯种的分离 和生产性能测定工作，以期菌种的生产性能逐 步提高。实际上是利用自发突变（正变)不断 地从生产中选种
2、 菌种的复壮： 使衰退的菌种恢复原来优良性状。狭义的复 壮是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种 分离和生产性能测定等方法，从衰退的群体中 找出未衰退的个体，以达到恢复该菌原有典型 性状的措施；广义的复壮是指在菌种的生产性 能未衰退前就有意识的经常、进行纯种的分离 和生产性能测定工作，以期菌种的生产性能逐 步提高。实际上是利用自发突变（正变）不断 地从生产中选种
菌种的复壮措施： 纯种分离：（平板划线法、 涂布法、倾注法、单 细胞挑取法等)； 通过寄主体内生长进行复壮（如Baci/1ws thur ingiensis的复壮)； 淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化条件进 行处理，以杀死生命力较差的已衰退个体)； 采用有效的菌种保藏方法
菌种的复壮措施： 纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注法、单 细胞挑取法等）； 通过寄主体内生长进行复壮（如Bacillus thuringiensis的复壮） ； 淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化条件进 行处理，以杀死生命力较差的已衰退个体）； 采用有效的菌种保藏方法
3、防止菌种衰退的方法： 控制传代次数（一般在DNA的复制过程中，碱基 的错配率是5x104,自发突变的频率为108~109， 采用良好的菌种保藏方法，可以减少移种和传代 的数)； 选择合适的培养条件； 采用不同类型的细胞进行传代（对丝状微生物 而言，通常采用稳定的单核孢子进行接种)； 采用有效的菌种保藏方法
3、防止菌种衰退的方法： 控制传代次数（一般在DNA的复制过程中，碱基 的错配率是5x10-4，自发突变的频率为10-8~10-9 ， 采用良好的菌种保藏方法，可以减少移种和传代 的数）； 选择合适的培养条件； 采用不同类型的细胞进行传代（对丝状微生物 而言，通常采用稳定的单核孢子进行接种）； 采用有效的菌种保藏方法
二、菌种保藏 目的： 存活，不丢失，不污染； 防止优良性状丧失； 随时为生产、科研提供优良菌种。 2.原理：选用优良的纯种，（最好是休眠体，如 分生孢子、芽胞等)，创造降低微生物代谢活 动强度，生长繁殖受抑制，难以发生突变的环 境条件。（其环境要素是干燥、低温、缺氧、 缺营养以及添加保护剂等)
二、菌种保藏 1、目的： 存活，不丢失，不污染； 防止优良性状丧失； 随时为生产、科研提供优良菌种。 2. 原理：选用优良的纯种，（最好是休眠体，如 分生孢子、芽胞等），创造降低微生物代谢活 动强度，生长繁殖受抑制，难以发生突变的环 境条件。（其环境要素是干燥、低温、缺氧、 缺营养 以及添加保护剂等）
3.菌种保藏的方法 菌 连续在培养基上（内)移种 生活态 连续在活宿主上（内)移种 种保藏方 传代培养保藏法 固体斜面 湿法半固体琼脂柱 休眠态 液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液） 干法 藏在玻璃管内 吸附在合适的载体上
3.菌种保藏的方法 菌 连续在培养基上（内）移种 种 生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种 保 固体斜面 藏 湿法 半固体琼脂柱 方 休眠态 液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液） 法 干法 藏在玻璃管内 吸附在合适的载体上
方法： ①低温保藏法： 方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代 。 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降。 ②石蜡油低温保藏法： 橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。 ③干燥保藏法 将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材 料上保藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌 和某些真菌保藏，保藏时间几至几十年
方法： ①低温保藏法： 方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代 。 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 。 ②石蜡油低温保藏法： 橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。 ③干燥保藏法 将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材 料上保藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌 和某些真菌保藏，保藏时间几至几十年
④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间 长，是目前最好的保藏方法。 ⑤液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低温冰 箱中（-196℃)。 适用于各种微生物的较理想的保藏方法
④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间 长，是目前最好的保藏方法。 ⑤液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低温冰 箱中（ -196℃）。 适用于各种微生物的较理想的保藏方法
干法保藏菌种的方法 滴入小试管（在放入大试管干燥器中） 藏在玻璃管内封入安培瓶了菌液直接真空干燥法(L-干燥法) L 冷冻真空干燥法 细粒状载体（土壤、沙粒、土壤+沙粒） 球块状载体（硅胶、瓷球） 合适的载体 有机基质（曲料、麦粒） 滤纸片 薄片状载体了明胶小片（滴在蜡纸板上干燥而成) 血清蛋白小片(.乙烯薄膜.)
干法保藏菌种的方法 滴入小试管（在放入大试管干燥器中） 藏在玻璃管内 封入安培瓶 菌液直接真空干燥法（L-干燥法） 冷冻真空干燥法 细粒状载体（土壤、沙粒、土壤+沙粒） 球块状载体（硅胶、瓷球） 合适的载体 有机基质（曲料、麦粒） 滤纸片 薄片状载体 明胶小片（滴在蜡纸板上干燥而成） 血清蛋白小片（.乙烯薄膜. ）