遵义医科大学附属医院医学检验科：《临床分子生物学检验技术》课程教学资源（课件讲稿）实验四 PCR-荧光探针法检测亚甲基四氢叶酸还原酶基因677C/T

第一章 生物化学部分.1 实验一、双缩脲法测定血清蛋白质含量. 1 实验二、纸层析法观察转氨基作用. 2 实验三、血清醋酸纤维薄膜电泳. 4 实验四、血清丙氨酸氨基转移酶活性测定. 7 实验五、胰酶对蛋白质的消化和影响酶作用的因素. 10 实验六、酶的竞争性抑制作用. 13 实验七、血糖浓度的测定. 16 实验八、血清γ球蛋白的分离纯化与鉴定. 18 第二章 分子生物学部分.25 实验一、质粒 DNA 的提取制备与检测. 25 实验二、PCR 技术. 28 实验三、DNA 的限制性酶切与电泳. 31 实验四、DNA 连接实验. 38 实验五、重组 DNA 转化与篮白斑筛选. 41 实验六、SDS-PAGE 测定蛋白质的相对分子量. 44

第一章 免疫学概论 第二章 免疫器官和组织 第三章 抗原 第四章 抗体 第五章 补体系统 第六章 细胞因子 第七章 主要组织相容性复合体及其编码分子 第八章 B淋巴细胞 第九章 T淋巴细胞 第十章 T细胞介导的细胞免疫应答 第十一章 B细胞介导的体液免疫应答 第十二章 固有免疫系统及其应答 第十三章 黏膜免疫 第十四章 免疫耐受 第十五章 超敏反应 第十六章 自身免疫病 第十七章 免疫缺陷病 第十八章 感染免疫 第十九章 肿瘤免疫 第二十章 移植免疫 第二十一章 免疫学检测技术 第二十二章 免疫学防治

标记抗体技术是在抗体球蛋白分子上,连接 某一个特定的、容易检测的分子或原子(标记物 ),利用标记抗体能与相应抗原结合的特性,通 过标记物的检测,从而确定抗原的存在部位。标 记抗体技术目前广泛应用的主要有荧光抗体、酶 标记抗体和同位素标记抗体等。前二者主要用于 抗原定位,而后者不仅可用于定性、定量,还可 用于定位

第一节、实验室规则及安全防护 一、实验室规则 二、实验室安全防护 第二节、分子生物学常用研究技术 一、核酸分离纯化 二、聚合酶链反应技术 三、分子杂交技术 四、分子克隆技术 五、其它新技术 第三节、常用仪器使用 一、离心机 二、分光光度计 三、PCR 仪 第四节、如何撰写实验报告 第五节 核酸分离纯化技术 实验一、基因组 DNA 的提取制备与检测 实验二、总 RNA 的提取制备与检测 实验三、质粒 DNA 的提取制备与检测 第六节 PCR 技术 实验四、常规 PCR 技术 实验五、定量 PCR 技术 第七节 分子克隆技术 实验六、DNA 的限制性酶切与电泳 实验七、凝胶中 DNA 片断的纯化回收 实验八、DNA 连接实验 实验九、感受态细胞的制备 实验十、重组 DNA 转化与篮白斑筛选 第八节 分子杂交技术 实验十一、Southern 印迹杂交 实验十二、Northern 印迹杂交 实验十三、Western 印迹 实验十四、核酸原位杂交 第九节 综合性实验 实验十五、蛋白质双向电泳 实验十六、酵母双杂交实验 实验十七、RNA 干扰实验

第一节:概述 第二节:核酸分子杂交检测技术 第三节:PCR诊断技术 第四节:生物芯片诊断技术 第五节:蛋白组织学诊断技术

1.放大某一基因片段,用于探针、基因功能检测、报道基因研究等。方法是:把某 DNA片段插入到相应的载体(比如质粒、噬菌体、哺乳类细胞表达载体等),给予扩 增,用以标记探针、测序、cDNA库建立、基因功能检测等多种分子生物学实验

现代免疫化学是研究抗原与抗体的组成、结构以及抗原和抗体反应的机制。此外，还研 究体内其他免疫活性物质，如补体分子的组成、结构及其功能。目前，免疫化学已应用于免 疫性疾病发病机制的基础研究和临床检测等。 随着免疫化学、细胞生物学及分子生物学的进展，免疫学实验技术也迅猛发展，并已成 为当今生命科学研究的重要手段，尤其是在医学基础研究和临床实践中得到广泛应用

一、形态学观察 二、细胞遗传学 如：染色体核型分析、染色体显带等 三、分子细胞遗传学 如：荧光原位杂交 四、分子生物学 如： Southern杂交，PCR及相关技术等

PCR是 Polymerase chain reaction的缩写,中文译作聚合酶链式反应。其特点是可以 在几小时内方便、快捷地将微量DNA(含由微量RNA反转录成的cDNA)扩增达10 倍,得到ug级的DNA!该技术发明于八十年代中期,到了八十年代末,由于引用了耐热 DNA聚合酶,使这一技术得以蓬勃发展,成为分子生物学中应用最为广泛的技术之一,发 挥着日益重要的作用 由于其方便快捷,在中医药实验研究和临床检测中应用十分广泛